1.一种检测LRP2基因SNP位点rs2544390基因型的方法,其特征在于:步骤如下:
(1)构建重组阴性质粒和重组阳性质粒:所述重组阴性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1,所述重组阳性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2;
(2)提取待测样本的外周血基因组DNA,对重组阴性质粒、重组阳性质粒和待测样本的DNA均进行PCR扩增和HRM分析,收集数据;
作为优选,所述HRM分析的条件为:94℃90s;60℃30s;83-94℃收集数据,温度上升速率为0.06℃/s;
(3)根据收集数据绘制高分辨率熔解曲线,根据重组阴性质粒、重组阳性质粒的熔解曲线判断待测样本LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型:
与重组阴性质粒的熔解曲线重合则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为GG;
与重组阳性质粒的熔解曲线重合则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为AA;
在重组阴性质粒和重组阳性质粒之间的则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为GA。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增时所用引物为(1)-(3)中的一种:
(1)上游引物:LRP2-F 5'-GATGGGCACTCTGACGGT-3'
下游引物:LRP2-R 5'-GTTGTTGCAAGCCGAAGAGC-3'
(2)与(1)中的互补序列;
(3)将(1)中的序列向5’端和/或3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增时的反应体系为:
4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增时的反应条件为:94℃预变性3min;94℃变性10s;60℃退火/延伸20s;40个循环。
5.一种用于检测LRP2基因SNP位点rs2544390基因型的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括重组阴性质粒、重组阳性质粒和用于扩增上述重组阴性质粒和重组阳性质粒的引物;所述重组阴性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1,所述重组阳性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于:所述引物为(1)-(3)中的一种:
(1)上游引物:LRP2-F 5'-GATGGGCACTCTGACGGT-3'
下游引物:LRP2-R 5'-GTTGTTGCAAGCCGAAGAGC-3'
(2)与(1)中的互补序列;
(3)将(1)中的序列向5’端和/或3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒,其特征在于:所述PCR扩增时的反应体系为:
作为优选,PCR反应条件为:94℃预变性3min;94℃变性10s;60℃退火/延伸20s;40个循环。
8.权利要求5-7任一所述的试剂盒的使用方法,其特征在于:步骤如下:
(1)提取待测样本的外周血基因组DNA,对重组阴性质粒、重组阳性质粒和待测样本的外周血基因组DNA均进行PCR扩增和HRM分析:
所述HRM分析的条件为:
94℃90s;
60℃30s;
83-94℃收集数据,温度上升速率为0.06℃/s;
(2)根据收集数据绘制高分辨率熔解曲线,根据重组阴性质粒、重组阳性质粒的熔解曲线判断待测样本LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型:
与重组阴性质粒的熔解曲线重合则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为GG;
与重组阳性质粒的熔解曲线重合则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为AA;
在重组阴性质粒和重组阳性质粒之间的则LRP2基因SNP位点rs2544390的基因型为GA。
9.序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2在制备检测LRP2基因SNP位点rs2544390基因型的试剂盒中的应用。
10.序列表中SEQ ID No.1、序列表中SEQ ID No.2、权利要求5-8任一所述的试剂盒在制备辅助评估痛风易患性试剂中的应用。