本发明属于植物遗传转化技术领域，特别提供了一种玉米遗传转化方法。
背景技术：
玉米是重要的粮食、经济、油料作物，同时也是重要的工业作物。随着社会经济的不断发展，人们对玉米的需求也日益增多。遗传转化技术的飞速发展为玉米品种的增多起到了重要的作用，但是目前玉米的遗传转化仍然存在着转化时间长、转化率低的问题。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种玉米遗传转化方法，通过调整过程中的培养基及培养参数，大大缩短了玉米遗传转化的时间，并且提高了遗传转化率。
本发明是这样实现的，一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：
1)制备转化受体
灭菌：授粉7-13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；
去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm；
2)制备侵染液
取50mlzm-inf，依次加入cys130μl、hcl130μl、as100μl、vc25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；
3)侵染
将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；
4)共培养
将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；
5)恢复培养
将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d；
6)筛选
第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；
第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基中筛选14d，筛选3-5次，直到筛选到胚性愈伤；
7)分化培养
将获得的胚性愈伤接入分化培养基zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3-4cm；
各步骤中用到的培养基具体配方见下表：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：
进一步地，所述步骤2)中制备的侵染液od600＝0.8。
进一步地，选用的农杆菌为eha105。
进一步地，所述农杆菌携带的抗性基因为潮霉素抗性基因，所述第一次筛选培养基为zmhn15，第二次筛选培养基为zmhn30；
上述培养基配方为：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：
进一步地，所述农杆菌携带的抗性基因为bar抗性基因，所述第一次筛选培养基为zmbasta5，第二次筛选培养基为zmbasta10；
上述培养基配方为：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：
与现有技术相比，本发明的优点在于：过程简单、操作方便、参数及培养基优化，能够在较短时间内获得高遗传转化率的玉米转基因植株。
附图说明
图1为利用本发明的方法得到的淡黄色幼胚；
图2为利用本发明的方法得到的恢复培养阶段的转化愈伤；
图3为利用本发明的方法得到的筛选阶段的抗性愈伤；
图4为利用本发明的方法得到的分化初级阶段的抗性愈伤；
图5为利用本发明的方法得到的抗性玉米芽；
图6为利用本发明的方法得到的伸长抗性玉米苗；
图7为利用本发明的方法得到的生根抗性玉米苗。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1、
本发明是这样实现的，一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：
1)制备转化受体
灭菌：授粉7-13d的玉米棒子(齐319)用70％的乙醇灭菌10min；
去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2-5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2-4mm，参考图1；
2)制备侵染液
取50mlzm-inf，依次加入cys130μl、hcl130μl、as100μl、vc25μl，将农杆菌(eha105，携带的抗性基因为潮霉素抗性基因)挑至混合液中，制成侵染液，od600＝0.8；
3)侵染
将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；
4)共培养
将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸zm-cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；
5)恢复培养
将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm-reco培养基中恢复7d，参考图2；
6)筛选
第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基zmhn15中筛选7d；
第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基zmhn30中筛选14d，筛选3-5次，直到筛选到胚性愈伤，参考图3；
7)分化培养
将获得的胚性愈伤接入分化培养基zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3-4cm，参考图4、图5、图6和图7；
各步骤中用到的培养基具体配方见下表：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：
实施例2、
与实施例1不同的地方在于：
农杆菌携带的抗性基因为bar抗性基因，第一次筛选培养基为zmbasta5，第二次筛选培养基为zmbasta10；
上述培养基配方为：
上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：