本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用。
背景技术：
：wnt/β-catenin信号通路于多种肿瘤(结肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胶质瘤及乳腺癌)中都存在异常活化，在肿瘤发生、肿瘤增殖、肿瘤转移、肿瘤休眠、肿瘤免疫、肿瘤耐药及维持肿瘤干性等方面都发挥促进作用。β-catenin作为该信号通路的效应分子，通常会被其降解复合物成员axin-2、apc及gsk-3β等磷酸化，进而进入泛素化途径降解。而当wnt信号异常激活时，其降解复合物成员解体，细胞浆内堆积的β-catenin会转位进入细胞核内与lef/tcf家族形成转录复合物，共同促进多种致癌因子的转录，从而促进肿瘤的发展进程。目前，针对该通路的靶向抑制剂主要包括小分子药物、抗体类药物、rna干扰药物及天然产物。在为期三十多年的研究中，除少数药物进入临床试验外，多数药物仍处于临床前研究当中，尚未见靶向药物上市。在研药物作用类型主要分为四种：抑制配基wnt-3a与细胞膜表面受体lrp5/6及frizzled的结合；降低β-catenin的蛋白表达水平；抑制β-catenin的细胞核转位；抑制细胞核内β-catenin/tcf转录复合物的活性。由于wnt-3a与受体结合这一过程并不是导致β-catenin升高的唯一因素，如在多种结肠癌中β-catenin本身或者其降解复合物组分apc的突变是诱导该通路异常激活的关键步骤，所以第一类药物普适性不强。第二类药物主要为gsk-3β、axin-2、pka等β-catenin降解复合物成员的激动剂，同样由于β-catenin等上游信号蛋白的突变，使这种类型药物的应用也存在局限性；此外，由于β-catenin在生理状态下维持细胞膜及细胞骨架的正常结构，故下调β-catenin的蛋白水平可能存在较大风险。所以对β-catenin的调控重心应该放在抑制β-catenin入核或抑制其在细胞核内转录复合物的活性这两个方面。目前由于入核抑制剂的靶向专一性不强，使这类药物的开发难度大大增加。而一些打断β-catenin及转录辅因子tcf4相互作用的化合物或多肽药物直接作用于该信号通路的下游分子，靶向性强、副作用小，具有良好的抑制肿瘤发生和发展的成药前景。trib3(tribbleshomologue3)是人体中假性激酶tribbles同源蛋白家族成员之一，具有接头蛋白样的功能，参与多种蛋白复合体的组装。其最早在果蝇中被鉴定到，并发现该蛋白能抑制有丝分裂，调节发育过程中细胞的增殖、迁移及形态形成。trib3通过与多种蛋白相互作用，在糖脂代谢、脂肪细胞分化、凋亡、应激和胶原表达等生理、病理过程中发挥重要的调控作用。trib3在多种肿瘤细胞系和人肿瘤组织中呈现高表达。在我们前期的研究中发现trib3能与smad3相互作用，增强tgf-β/smad3信号通路活性，促进肿瘤侵袭。此外，我们还发现，肿瘤微环境中的高胰岛素(insulin)及胰岛素样生长因子1(igf-1)可以上调trb3的表达。trib3与自噬受体p62相互作用，抑制p62与lc3及泛素化底物结合，从而造成p62和泛素化蛋白堆积，并继发性抑制蛋白酶体功能。trib3对自噬及泛素蛋白酶体系统的抑制连接了糖尿病和肿瘤的恶性进程。我们的研究发现肿瘤当中，trib3与β-catenin在细胞核内存在直接相互作用，并共同促进肿瘤的发生、发展。但由于β-catenin与tcf4蛋白相互作用面积过大，小分子药物的介入不能起到较好的打断作用。此外，trib3作为肿瘤发展进程中的重要蛋白，靶向该蛋白的药物目前尚未见报道。因此，如何能够提供一种药物，通过打断β-catenin/trib3相互作用，减弱β-catenin/tcf4的转录活性，进而对wnt/β-catenin信号通路相关的肿瘤进行有效的治疗，是本领域急需解决的难题。技术实现要素：为解决现有技术中wnt/β-catenin信号通路调控机制复杂，药物研发进程缓慢，缺乏一种有效抑制β-catenin转录激活活性的药物的缺陷，本发明提供一种多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用。本发明提供的技术方案之一为：一种特异性结合β-catenin的多肽，其为氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有trib3活性的trib3突变体。较佳地，其为氨基酸序列如seqidno：1所示的多肽。实验发现，氨基酸序列如seqidno：1所示的多肽t3a6能与β-catenin特异性结合，不仅可以抑制wnt/β-catenin信号通路，还可以降低trib3的蛋白水平表达。本发明提供的技术方案之一为：一种上述特异性结合β-catenin的多肽的衍生物，所述的多肽的衍生物为所述的多肽与穿膜肽连接所形成的嵌合肽。优选地，所述穿膜肽连接在所述多肽的n端或者c端。更优选地，所述穿膜肽为pep2，其氨基酸序列如seqidno：2所示。最优选地，所述嵌合肽的氨基酸序列如seqidno：3所示。本发明提供的技术方案之一为：一种抗肿瘤的药物组合物，其活性成分含有所述的多肽，或所述的多肽的衍生物。优选地，所述的活性成分为单一活性成分。更优选地，所述的药物组合物还包括其它具有抗肿瘤活性的化合物。所述的活性成分是指具有预防或治疗肿瘤功能的化合物。在所述药物组合物中，所述靶向抑制β-catenin转录活性及trib3蛋白水平的多肽可以单独作为活性成分或和其他具有抗肿瘤活性的化合物一起作为活性成分。优选地，还包括药用载体和/或赋形剂。所述的载体或赋形剂为本领域常规药用载体或赋形剂，所述的载体或赋形剂可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更佳地，所述的药物组合物包括0.01～99.99％的上述多肽和0.01～99.99％的药用载体或赋形剂，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。更优选地，其给药途径为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳地包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。所述的药物组合物为本领域常规的各种剂型，较佳地为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂或输注剂等。较佳地，所述的药物组合物的施用量为有效量，所述有效量为能够缓解或延迟疾病、退化性或损伤性病症进展的量。所述有效量可以以个体基础来测定，并将部分基于待治疗症状和所寻求结果的考虑。本发明提供的技术方案之一为：上述的多肽、多肽的衍生物或药物组合物以及trib3在制备预防和/或治疗与β-catenin相关的疾病特别是肿瘤的药物中的应用。本发明提供的技术方案之一为：trib3抑制剂或拮抗剂在制备防治与β-catenin相关的疾病，特别是肿瘤的药物中的应用。较佳地，上述两个技术方案中的肿瘤选自肠癌、肝癌、肺癌、胰腺癌或乳腺癌。更佳地，所述肠癌为结肠癌或直肠癌；所述的肝癌为原发性肝癌或继发性肝癌；所述的肺癌为非小细胞肺癌或小细胞肺癌；所述胰腺癌为胰腺导管腺癌、胰腺腺泡细胞癌；所述乳腺癌为非浸润性乳腺癌、早期浸润性乳腺癌、浸润性特殊类型乳腺癌或浸润性非特殊类型乳腺癌。所述预防是本领域常规的预防，较佳地，指存在可能的肿瘤因素时，使用后防止或降低肿瘤的产生。所述治疗是本领域常规的治疗，较佳地，指减轻肿瘤的程度，或者治愈肿瘤使之正常化，或者减缓肿瘤的进程。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的多肽、多肽的衍生物和药物组合物能够抑制β-catenin转录活性，下调wnt/β-catenin通路活性，且同时可以降低trib3的蛋白水平表达，从而应用于治疗和预防肿瘤的双靶点药物的制备中。制备的药物在治疗肿瘤疾病中，具有疗效显著，毒副作用少，使用安全的优点。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所述的pbs，指浓度为0.1m，ph值为7.2的磷酸盐缓冲液。实施例中所述的室温为本领域常规的室温，较佳地为15～30℃。实验结果用均值±标准误表示，经参数或者非参数方差检验，经比较p<0.05认为有显著性差异，p<0.01认为有极其显著性差异。实施例1用表面等离子共振的方法筛选与β-catenin蛋白结合的肽段。首先将trib3分段截短成不同的多肽片段，用多肽固相合成仪进行肽段合成，此过程由北京赛百盛基因有限公司进行。整个筛选过程在表面等离子共振仪biacoret200中进行。筛选方法如下：1)将纯化的蛋白β-catenin(购自北京义翘神州公司)通过氨基偶联到cm5芯片上(购自ge公司)，10μl/min的流速洗去未结合的蛋白，并且平衡芯片表面2小时，洗涤和平衡的缓冲液为ph2.5的甘氨酸缓冲液。2)将不同浓度的200μl多肽片段(200、100、50、25、12.5nm)自动进样，整个过程在25℃进行。所使用的缓冲液为hbs-ep缓冲液(0.01mhepes，0.15mnacl，3mmedta，0.005％表面活性剂surfactantp20。3)用biacoret200随机分析软件模拟不同浓度多肽与β-catenin的结合曲线，得出一条与β-catenin结合能力较强的多肽：t3a6：leu-ser-ala-pro-ala-arg-cys-leu-val-arg-cys-leu-leu-arg(即氨基酸序列如seqidno：1所示的多肽)。kd＝2.88e-7，rmax(ru)＝160。实施例2elisa方法验证肽段t3a6与蛋白β-catenin的结合具体操作步骤如下：1.将人β-catenin蛋白及牛血清白蛋白(bsa)分别用pbs稀释至10μg/ml，每孔添加100μl，4℃包被96孔elisa板过夜。2.用含有0.1％tween-20pbs洗三次，用200μl封闭液(10％牛血清pbs)包板，37℃包被2h。3.倒掉包被用的封闭液，对应加入1μg/ml多肽t3a6溶液200μl；同时设置阳性对照，加入1μg/mltrib3蛋白(购自rd公司)溶液200μl，37℃孵育1h。4.用含有0.1％tween-20pbs洗五次，每孔加入100μl用封闭液1:4000(v/v)稀释后的抗β-catenin单克隆抗体，室温孵育1h。5.用含有0.1％tween-20pbs洗六次。配制底物显色液(100mm乙酸钠ph6.0，每50ml缓冲液加入10μl30％过氧化氢和100μg/mltmb)，每孔加入100μl，室温孵育5min后，每孔加入50μl0.1m稀硫酸以终止反应。6.结果以样品孔的od450反应，见表1。表1多肽与β-catenin的亲和力表1为多肽与β-catenin的亲和力的三次重复实验，结果表明t3a6肽段与阳性对照trib3相似，均与β-catenin蛋白有较高的亲和力。实施例3竞争elisa的方法验证肽段t3a6可以竞争trib3与β-catenin蛋白的结合具体操作步骤如下：1.将人β-catenin蛋白及牛血清白蛋白(bsa)用pbs稀释至10μl/ml，每孔添加100μl，4℃包被96孔elisa板过夜。2.用含有0.1％tween-20pbs洗三次，用200μl封闭液(10％牛血清pbs)包板，37℃包被2h。3.倒掉包被的封闭液，对应加入1μg/mltrib3蛋白溶液200μl，37℃孵育1h。4.用含有0.1％tween-20pbs洗五次；每孔加入100μl封闭液作为阴性对照及100μl用封闭液稀释的辣根过氧化氢酶标记的多肽t3a6，室温孵育1h。5.用含有0.1％tween-20pbs洗六次；配制底物显色液(100mm乙酸钠，ph6.0，每50ml缓冲液加入10μl30％过氧化氢，100μg/mltmb)，每孔加入100μl，室温孵育5min后，每孔加入50μl0.1m稀硫酸以终止反应。6.结果以样品孔的od450反应，见表2。表2多肽竞争trib3与β-catenin蛋白的结合表2显示了多肽竞争trib3与β-catenin蛋白的结合的三次重复实验，结果表明：t3a6可以竞争trib3与β-catenin蛋白的结合，而阴性对照不起竞争结合作用。实施例4双荧光素酶报告基因实验验证多肽pep2-t3a6抑制β-catenin的转录激活活性。将肽段t3a6连接上细胞穿膜肽pep2(其氨基酸序列如seqidno：2所示)，组成多肽的衍生物pep2-t3a6(其氨基酸序列如seqidno：3，核苷酸序列如seqidno：4所示)，此肽段由赛百盛基因技术有限公司进行合成，纯度>98％。双荧光素酶报告基因实验的试剂盒(dual-reporterassaysystem，货号e1910)购自promega。topflash质粒、fopflash质粒及prl-tk质粒购自addgene公司。具体检测步骤如下：1.向12孔板中汇合度为60％的hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-231乳腺癌细胞(以上细胞均购自中国医学科学院基础医学研究所)中分别共转染反应β-catenin/tcf4转录活性的质粒topflash及质粒prl-tk，topflash的突变质粒fopflash及质粒prl-tk作为整个实验的阴性对照。2.转染12小时后，向细胞中加入10μmpep2-t3a6或对照肽。对照肽即scrambled多肽，将pep2-t3a6的t3a6的序列打乱而得(如seqidno:5所示)。3.12小时后，向每孔加入各250μl裂解液，15min后收集上清10μl加入至白色96孔板中，加入50μl荧光素酶底物，进行波长测定，再加入50μlstopbuffer，再次进行波长测定。4.第一次与第二次数值比值即为荧光素酶活性，结果见表3-7。结果表明pep2-t3a6可以在hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-231乳腺癌细胞中降低β-catenin/tcf4的转录活性。表3多肽在hct-8细胞中抑制β-catenin/tcf4的转录活性对照肽pep2-t3a6p值topflash*2235±2341124±560.0001fopflash#102±3103±2/*：转染有top-flash和海肾荧光素载体的样本中采集得到的萤火虫荧光值f(top)/采集得到的海肾荧光值r(top)；#：转染有fop-flash和海肾荧光素载体的样本中采集得到的萤火虫荧光值f(fop)/采集得到的海肾荧光值r(fop)；/：无显著性差异；下同。表4多肽在a549细胞中抑制β-catenin/tcf4的转录活性对照肽pep2-t3a6p值topflash2545±1451235±360.0002fopflash63±568±2/表5多肽在hepg2细胞中抑制β-catenin/tcf4的转录活性对照肽pep2-t3a6p值topflash2954±1561426±140.0001fopflash107±389±2/表6多肽在sw1990细胞中抑制β-catenin/tcf4的转录活性对照肽pep2-t3a6p值topflash2925±1271486±100.0001fopflash123±3112±1/表7多肽在mda-mb-231细胞中抑制β-catenin/tcf4的转录活性对照肽pep2-t3a6p值topflash2634±231322±270.0001fopflash77±184±2/实施例5放线菌酮验证多肽对trib3蛋白的半衰期的影响1.收集对数生长期的结肠癌细胞hct-8，用dmem培养基调整细胞浓度，制成20万个/ml的细胞悬液。2.将2ml步骤1所制得的细胞悬液加入6孔板进行培养，12小时后换成新的培养基，并且分别加入1μg/ml实施例1所制得的多肽pep-t3a6。scrambled对照肽组加入等体积的溶剂pbs。3.12小时后，按时间点加入蛋白合成抑制剂放线菌酮(cycloheximide，chx)，使其作用时间分别为8h、4h、2h、1h、0h；对照组加入等体积的溶剂。4.收集细胞，加入ripa裂解液(购自上海碧云天生物技术有限公司，根据说明书，使用前加入蛋白酶抑制剂pmsf和leupeptin、aprotinin等其它抑制剂)，冰上裂解30min；12000rpm，4℃离心30min；吸取上清，用bca法对蛋白进行定量，按照定量结果将蛋白调整成统一浓度，加入5×上样缓冲液，98℃变性10min。5.取部分样品按照《分子克隆实验指南》所述的方法进行sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳；电泳结束后，进行免疫印迹检测。6.免疫印迹结果利用gel-proanalyzer32analyzer4.0进行定量分析，并绘制时间相关trib3含量变化曲线，确定trib3蛋白含量下降至chx作用0h时的50％所需时间，即为trib3蛋白半衰期。结果如表8所示。表8多肽对细胞trib3蛋白半衰期的影响上表说明，pep2-t3a6作用下，trib3蛋白的半衰期为0.4±0.1小时，而scrambled对照肽作用下，trib3蛋白的半衰期为2.5±0.1小时。pep2-t3a6能明显降低trib3蛋白半衰期。实施例6细胞计数实验验证多肽pep2-t3a6抑制肿瘤细胞的生长具体操作步骤如下：1.收集对数生长期的hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-231乳腺癌细胞调整细胞浓度，制成浓度为15万个/ml的细胞悬液。2.将1ml步骤1所制得的细胞悬液加入12孔板进行培养(其中hepg2、hct-8和mda-mb-231细胞所用培养基为dmem培养基，a549、sw1990细胞所用培养基为rpmi1640培养基，均购自invitrogen公司；培养温度为37℃，培养基体积为1ml)，12小时后换成新的培养基，并且分别加入1μg/ml上述scrambled对照肽及pep2-t3a6。每隔一天进行传代一次，并进行计数。培养12天后绘制出生长曲线。实验结果见表9。表9多肽抑制肿瘤细胞的生长细胞名称/细胞数量(万)对照肽pep2-t3a6p值hct-8634±12.436325±11.3590.0001hepg2743±13.335314±12.2340.0002a549687±11.343200±14.2330.0001sw1990456±12.435168±11.2640.0001mda-mb-231835±12.234426±11.2340.0001上表的结果说明多肽pep2-t3a6能够抑制hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞和mda-mb-23乳腺癌细胞1的生长。实施例7细胞划痕实验验证多肽抑制肿瘤细胞划痕后的愈合具体操作步骤如下：1.先用记号笔在6孔板背后，用直尺比着划横线，横穿过孔。2.在每个孔中分别加入5×105个肿瘤细胞，37℃孵育箱培养过夜后细胞贴壁。该肿瘤细胞为对数生长期的结肠癌细胞hct-8、肝癌细胞hepg2、肺癌细胞a549、胰腺癌细胞sw1990和乳腺癌细胞mda-mb-231。3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线进行划痕，枪头要垂直。4.用pbs洗细胞3次，去除划下的细胞，加入新的培养基，同时各加入1μg/ml上述scrambled对照肽及pep2-t3a6。5.然后放入37℃、5％(v/v)co2培养箱培养，24小时后取样拍照。实验结果见表10。表10多肽抑制肿瘤细胞的迁移损伤修复面积比越大说明肿瘤细胞的迁移能力越强，细胞划痕后愈合能力越强。表10的结果说明多肽pep2-t3a6可以降低hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-23乳腺癌细胞划痕后的愈合能力。实施例8transwell实验验证多肽pep2-t3a6可以抑制肿瘤细胞的侵袭能力具体操作步骤如下：1.从-20℃冰箱取出100×纤维粘连蛋白储液，融化后配成1×工作液，取出30μl迅速涂布在8μm孔径transwell小室外侧，使其铺满孔的底部。2.从-20℃冰箱取出matrigel，融化后稀释8倍取40μl迅速加入8μm孔径transwell小室内侧，使其快速铺满孔的底部；将凝固后的小室放入24孔板的小孔中，下室加入800μl完全培养基。3.收集对数生长期的hct-8、肝癌细胞hepg2、肺癌细胞a549、胰腺癌细胞sw1990和乳腺癌细胞mda-mb-231；然后调整细胞浓度，制成1000万细胞/ml的细胞悬液。4.小室内加入100μl细胞悬液，同时加入1μg/ml上述scrambled对照肽及pep2-t3a6。5.然后移培养板于co2培养箱中37℃进行培养。6.培养12-24h后，对细胞集落进行结晶紫染色，用显微镜拍照；结果见表11中40倍镜平均单视野的细胞数。表11多肽抑制肿瘤细胞的侵袭结果显示，多肽pep2-t3a6明显抑制hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-23乳腺癌细胞的侵袭能力。实施例9裸鼠皮下种瘤实验验证肽段pep2-t3a6对癌细胞生长的抑制1.实验耗材及试剂：灭菌ep管1.5ml，无菌10ml离心管，枪头滤网(100目)，脱脂棉球，镊子数把，酒精棉球，无菌1ml注射器，matrigel，pbs(过滤)，胰酶，血清。2.实验动物及分组：4-6周龄雄性裸鼠20只(购自北京维通利华实验动物有限公司)，随机分为两组：对照组10只，pep2-t3a6给药组10只。3.细胞制备：将贴壁培养的荧光素酶标记的hct-8细胞用胰酶消化，到达胰酶消化时间后(此时细胞状态应为单细胞且刚好贴壁不掉)，吸掉胰酶；用含有1％血清的pbs按2ml/皿终止，将细胞吹下，移至10ml离心管中，1000×g离心5min。弃上清，pbs重悬，过100目滤网一次；细胞计数，按照细胞：matrigel＝6:4比例混匀，调整细胞终浓度至5×105/ml。4.瘤细胞接种：100μl细胞悬液接种于裸鼠右上腹部近腋下皮下。5.肿瘤生长观察：皮下注射肿瘤细胞后一周用多肽进行治疗(4mg/kg体重，每周两次)，游标卡尺纪录肿瘤大小。肿瘤体积＝(长×宽×宽)/2；实验结果以mean±sem表示，并采用ttest检验多肽组与上述scrambled对照肽组间的差异。肿瘤体积越大表明肿瘤生长越快。接种肿瘤后4周，各组小鼠皮下肿瘤体积如表12-表16所示。表12多肽抑制结肠癌细胞hct-8在小鼠体内生长表13多肽抑制肺癌细胞a549在小鼠体内生长表14多肽抑制肝癌细胞hepg2在小鼠体内生长表15多肽抑制胰腺癌细胞sw1990在小鼠体内生长表16多肽抑制乳腺癌细胞mda-mb-231在小鼠体内生长结果表明，多肽pep2-t3a6能抑制hct-8结肠癌细胞、hepg-2肝癌细胞、a549肺癌细胞、sw1990胰腺癌细胞及mda-mb-23乳腺癌细胞在小鼠体内生长。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。sequencelisting<110>胡卓伟<120>多肽、其衍生物及其在制备防治肿瘤的药物中的应用<130>p1711728c<160>5<170>patentinversion3.5<210>1<211>14<212>prt<213>artificialsequence<220><223>t3a6<400>1leuseralaproalaargcysleuvalargcysleuleuarg1510<210>2<211>7<212>prt<213>artificialsequence<220><223>pep2<400>2hisleutyrvalserprotrp15<210>3<211>21<212>prt<213>artificialsequence<220><223>pep2-t3a6<400>3leuseralaproalaargcysleuvalargcysleuleuarghisleu151015tyrvalserprotrp20<210>4<211>63<212>dna<213>artificialsequence<220><223>pep2-t3a6dna<400>4ctgtccgcccccgcccggtgcctggtgcggtgcctgctgcggcacctgtacgtgtccccc60tgg63<210>5<211>23<212>prt<213>artificialsequence<220><223>scrambled多肽<400>5hisleutyrvalserprotrpglyglyleuargvalargleucysleu151015alaleuserproargalacys20当前第1页12