灵芝子实体提取灵芝多糖工艺的制作方法

本发明涉及灵芝多糖的提取工艺
技术领域：
，具体涉及一种灵芝子实体提取灵芝多糖工艺。
背景技术：
：灵芝学名为ganodermalucidumkarst，是多孔菌科真菌灵芝的子实体，具有补气安神、止咳平喘、延年益寿的功效，常用于眩晕不眠、心悸气短、神经衰弱、虚劳咳喘。灵芝子实体是一伞形的菇状物，呈紫红色或棕红色，其质地幼时为肉质，成熟变干后为木栓质。子实体由菌盖(菌伞)和菌柄构成。从《神农本草经》到《中华人民共和国药典》所叙述的灵芝均是指灵芝子实体。灵芝属的化学成分较为复杂，其中有效成份可分为十大类，包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸(主含延胡索酸)，以及微量元素ge、p、fe、ca、mn、zn、等。现代研究证明灵芝多糖是灵芝的主要有效成分之一，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化、降血脂与抗衰老作用。灵芝多糖的种类很多，约有200多种，从灵芝的子实体、孢子粉、发酵液中都能够提取出灵芝多糖，针对提取部位和多糖种类的不同有着不同的提取方式。灵芝多糖的提取方式有：(1)传统提取法：传统的灵芝多糖提取方法是利用多糖能溶于水不溶于有机溶剂的原理，采用水提醇沉法从灵芝子实体中提取多糖。由于传统提取方法简单，不会引起多糖降解，且成本低、安全，是目前多糖提取应用最多的一种方法。但是利用传统提取法耗时长、提取率低，一般只能提取胞壁外多糖且多糖生物活性较低；(2)酶法提取：酶法提取灵芝多糖是一种条件温和的提取方式。由于多糖与几丁质在细胞壁中同时结合细胞壁外层大分子。酶法提取是利用使大分子几丁质、半纤维素等与灵芝多糖分离从而达到多糖的分离。常用的酶有纤维素酶、果胶酶及中性蛋白酶等。酶法提取受温度和ph的影响。因此对于多糖的提取技术有一定的局限性。并且，大多数酶属于蛋白质，在提取过程中影响酶变性条件也是考虑的因素之一。在酶法提取过程中为了达到更好的效果，通常采用复合酶提取，即一定比例的果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶协同使用或复合酶-热水浸提相结合的方法；(3)超临界流体辅助提取：超临界流体萃取技术通过改变温度和压力使被提取物的溶解度发生变化，达到分离提取的目的。是近年来较新的一种提取分离技术，超临界流体萃取技术既有液体溶剂的萃取能力，也有较好的传质效果。超临界流体萃取耗能低、无污染且效率较高，适合于挥发性较强、热敏性物质和脂溶性成分的提取分离。但提取设备复杂，成本较高，比较适合在实验室中应用；(4)超滤法：超滤是一种膜分离技术，利用此方式可以在不破坏多糖的活性的前提下来对多糖进行分级且无污染、设备简单、能耗低；并且可以长期连续使用。但利用超滤法对多糖进行分离前需要了解多糖的相对分子量，根据分子量的大小来确定所需要膜的规格和分离时间；(5)微波辅助提取：微波作为一种高频率的电磁波，在多糖提取过程中利用微波高速振动产生热能，使温度和压力升高细胞膜和细胞壁急剧破裂，细胞内的多糖释放出来。利用微波辅助提取，灵芝多糖得率非常高，且省时、节能、无污染、操作简便。但有一定局限性。微波辅助提取的过程中如果进一步加热，会导致细胞内部和细胞壁水分减少，细胞收缩出现裂纹。因此，要求被处理的物料具有良好的吸水性且不会由于局部温度过高而变性；(6)超声波提取：超声波提取是一种物理破碎过程，通过超声场形成局部瞬间高压，使细胞壁及整个生物体破裂；然后利用产生的空化作用和机械作用增加物质分子运动的频率和速度，使多糖溶出。超声辅助波提取与传统工艺相比，操作简单，提取率高，反应过程无物料损失，无副反应发生，在提取的过程中灵芝多聚糖在无超声场作用时几乎不能水解协同纤维素酶却变得易水解是一种可行的提取技术；(7)超声波-微波协同萃取：超声波-微波协同萃取法是充分利用超声振动的空化作用和微波的高能作用相结合，使样品内部受力均匀降低样品基体的结合力，使目标物快速溶于溶剂中。与传统工艺相比，此方式提取时间较短，提取效率也有所增加同时能够节约一定的水资源。综上，不同的提取方式都有其优缺点，要根据提取原料、条件、提取目的等综合因素考虑，亟需找到一种高效、经济、合理的破壁方法，从而使灵芝孢子的有效成分和药用价值达到最大化的利用而提供基础。技术实现要素：本发明的主要目的是提出一种灵芝子实体提取灵芝多糖工艺，旨在解决现有的灵芝多糖提取方法有效成分低的问题。为实现上述目的，本发明提出一种灵芝子实体提取灵芝多糖工艺，包括以下步骤：将灵芝子实体粉碎以获得灵芝子实体颗粒；将所述灵芝子实体颗粒放置在盐酸中浸泡；将经过盐酸浸泡的灵芝子实体颗粒进行高压保温；从经过高压保温的灵芝子实体颗粒中提取灵芝多糖。优选地，所述将所述灵芝子实体颗粒放置在盐酸中浸泡包括：将灵芝子实体颗粒放入体积/重量比为1～5的盐酸中浸泡1～3小时，其中所述盐酸的浓度为0.5～3％。优选地，所述将所述灵芝子实体颗粒放置在盐酸中浸泡包括：将灵芝子实体颗粒放入体积/重量比为4的盐酸中浸泡2小时，其中所述盐酸的浓度为1％。优选地，所述将经过盐酸浸泡的灵芝子实体颗粒进行高压保温包括：将经过盐酸浸泡的灵芝子实体颗粒放置在高压容器内，维持115～165℃高压20～40min。优选地，所述将经过盐酸浸泡的灵芝子实体颗粒进行高压保温包括：将经过盐酸浸泡的灵芝子实体颗粒放置在高压容器内，维持121℃高压30min。优选地，所述从经过高压保温的灵芝子实体颗粒中提取灵芝多糖包括：将灵芝子实体降温后置于65℃烘箱烘干5～8小时；采用水提醇沉法、酶法提取法、超临界流体辅助提取法、超滤提取法、微波辅助提取法、超声波提取法、超声波-微波协同萃取法中的至少一种方式从灵芝子实体中提取灵芝多糖。优选地，在所述将灵芝子实体降温后置于65℃烘箱烘干5～8小时的步骤中：所述灵芝子实体的烘干时间为6.5小时。本发明所提供的灵芝子实体提取灵芝多糖工艺，灵芝子实体加盐酸浸泡后高压，提取检测的灵芝多糖明显高于未加盐酸浸泡后高压的芝子实体，其中，加盐酸浸泡后高压灵芝子实体中灵芝多糖的含量是未加盐酸浸泡后高压芝子实体的9.9倍(以赤灵芝为测试对象)或4.2倍(以紫灵芝为测试对象)。结果表明，本发明的加盐酸浸泡后高压灵芝子实体中主要成份灵芝多糖的含量更高，本发明的加盐酸浸泡后高压再提取多糖的方法是获得有效成分更高的更为简便实用技术方案。本发明的技术方案制备的破壁灵芝孢子粉可以作为原料药或者直接装胶囊及压成片剂，可以制备成为药品、保健品及功能性食品。附图说明图1为本发明的灵芝子实体提取灵芝多糖工艺的葡萄糖标准曲线。具体实施方式下面将详细描述本发明的实施例，实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同标号表示相同的元件或具有相同功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明公开了一种灵芝子实体提取灵芝多糖工艺，该工艺主要是使灵芝子实体酸泡并高压后提取灵芝多糖。具体地，该方案经过灵芝子实体的粉碎、盐酸浸泡、高压处理、加热回流法，利用高压对灵芝子实体细胞的破碎作用，促进灵芝多糖从胞内溶出，得到灵芝多糖。具体来说，先把灵芝子实体用粉碎机粉碎，形成灵芝子实体颗粒，接着用体积/重量比为1～5(即盐酸的体积是灵芝子实体的重量的1～5倍，比如10g灵芝子实体：40ml盐酸)的0.5～3％的盐酸浸泡灵芝子实体1～3小时，然后，放进高压容器内进行高压，115～165℃高压，维持20～40min，然后，高压降温后取出样品置于65℃烘箱烘干5～8小时，之后提取灵芝子实体中灵芝多糖。取样品适量，精密称定，置圆底烧瓶中，加水静置，加热回流，滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，再加水加热回流，滤过，然后合并滤液，滤液旋蒸至干，残渣用水溶解，之后边搅拌边缓慢滴加乙醇，摇匀，之后于4℃放置12小时，3000r/min离心10min，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至相应体积容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，3000r/min离心10min，精密量取上清液适量，加水稀释，摇匀，取稀释液2ml，然后检测灵芝多糖的含量。该酸泡高压方法提取得到的灵芝多糖的含量是没有经过高压处理的9.9倍(以赤灵芝为测试对象)或4.2倍(以紫灵芝为测试对象)，这种工艺符合卫生条件，产品可以直接装胶囊或者压成片剂，在不受污染的情况下也可以较长时间保存。此外，经本方法酸泡高压烘干后的灵芝子实体还可以采用酶提取法、超临界流体辅助提取法、超滤法、微波辅助提取法、超声波提取法、超声波-微波协同萃取法对灵芝多糖进行提取。实施例一取经粉碎机粉碎的灵芝子实体(赤灵芝)，分为两个实验组，每组10克，1号为灵芝子实体对照组，2号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组，其中：1号不加盐酸浸泡不经高压，2号用40ml的1％盐酸浸泡2小时，后放进高压锅高压，25分钟升温121℃时，保持121℃，维持30分钟，降温，2.5小时降至65℃时，取出，放入65℃烘箱烘干6.5小时，然后提取上述样品。高压后的样品烘干的重量变化情况见表1。表1高压后灵芝子实体的干燥重量变化编号1h2h3h4h5h6h6.5h24211530.14226.65519.49415.13111.38910.582注：2号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组。按照药典法测定灵芝子实体中灵芝多糖的含量方法，结果如下。步骤1、对照品溶液的母液制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每lml含0.12mg的溶液，即得(0.12mg/m1)。步骤2、标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml，分别置10ml具塞试管中，各加2.0ml，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液(精密称取蔥酮0.1g，加硫酸100ml使溶解，摇匀)6ml，立即摇匀，放置15分钟后，立即置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白同步显色操作，照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。步骤3、供试品溶液的制备：取上述编号1和2的粉末约1g，精密称定，装袋，置圆底烧瓶中，加水30ml静置1h，(95℃±2℃)加热回流4h，滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，加水30ml，加热回流3小时，滤过，合并滤液，85℃旋蒸至干，残渣用水2.5ml溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇38ml，摇匀，在4℃放置12小时，3000r/min离心10min，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至相应体积容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，3000r/min离心10min，精密量取上清液适量，加水稀释，摇匀，取稀释液2ml，即得供试品溶液。葡萄糖标准曲线紫外检测结果见表2，标准曲线见附图1。表2葡萄糖标准曲线紫外检测结果浓度(mg/ml)吸光度(abs)0.0120.0640.0240.1350.0360.2510.0480.3440.060.4140.0720.5110.0840.6180.0960.721根据表2葡萄糖标准曲线紫外检测结果求出标准曲线方程：y＝7.8016x-0.039，r2＝0.9975，线性范围：0.064abs～0.721abs。步骤4、灵芝多糖测定：精密量取供试品溶液2ml，置10mlep管中，照标准曲线制备项下的方法，迅速精密加入硫酸蔥酮(0.1g+100ml硫酸)溶液6ml，立即摇匀，放置15分钟后，立即置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白同步显色操作，照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。灵芝多糖紫外检测结果见表3。表3灵芝多糖紫外检测结果注：1号为灵芝子实体对照组，2号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组，a、b为平行对照。从表3灵芝多糖紫外检测结果可见，本发明灵芝子实体加盐酸浸泡后高压，提取检测的灵芝多糖明显高于未加盐酸浸泡后高压的芝子实体，其中，加盐酸浸泡后高压灵芝子实体(2号平均值)中灵芝多糖的含量是未加盐酸浸泡后高压芝子实体的9.9倍(1号平均值)。结果表明，本发明的加盐酸浸泡后高压灵芝子实体中主要成份灵芝多糖的含量更高，本发明的加盐酸浸泡后高压再提取多糖的方法是获得有效成分更高的更为简便实用技术方案。本发明的技术方案制备的破壁灵芝孢子粉可以作为原料药或者直接装胶囊及压成片剂，可以制备成为药品、保健品及功能性食品。实施例二取经粉碎机粉碎的灵芝子实体(紫灵芝)，分为两个实验组，每组10克，3号为灵芝子实体对照组，4号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组，其中：3号不加盐酸浸泡不经高压，4号用40ml的1％盐酸浸泡2小时，后放进高压锅高压，25分钟升温121℃时，保持121℃，维持30分钟，降温，2.5小时降至65℃时，取出，放入65℃烘箱烘干6.5小时，然后提取上述样品。高压后的样品烘干的重量变化情况见表4。表4高压后灵芝子实体的干燥重量变化编号1h2h3h4h5h6h6.5h440.21929.59224.18519.03814.96511.19310.517注：4号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组。按照药典法测定灵芝子实体中灵芝多糖的含量方法，结果如下。步骤1、对照品溶液的母液制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每lml含0.12mg的溶液，即得(0.12mg/ml)。步骤2、标准曲线制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml，分别置10ml具塞试管中，各加2.0ml，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液(精密称取蔥酮0.lg，加硫酸100ml使溶解，摇匀)6ml，立即摇匀，放置15分钟后，立即置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白同步显色操作，照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。步骤3、供试品溶液的制备：取上述编号1和2的粉末约1g，精密称定，装袋，置圆底烧瓶中，加水30ml静置1h，(95℃±2℃)加热回流4h，滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，加水30ml，加热回流3小时，滤过，合并滤液，85℃旋蒸至干，残渣用水2.5ml溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇38ml，摇匀，在4℃放置12小时，3000r/min离心10min，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至相应体积容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，3000r/min离心10min，精密量取上清液适量，加水稀释，摇匀，取稀释液2ml，即得供试品溶液。葡萄糖标准曲线紫外检测结果见表2，标准曲线见附图1。步骤4、灵芝多糖测定：精密量取供试品溶液2ml，置10mlep管中，照标准曲线制备项下的方法，迅速精密加入硫酸蔥酮(0.1g+100ml硫酸)溶液6ml，立即摇匀，放置15分钟后，立即置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白同步显色操作，照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。灵芝多糖紫外检测结果见表6。表6灵芝多糖紫外检测结果注：3号为灵芝子实体对照组，4号为灵芝子实体加盐酸浸泡高压实验组，a、b为平行对照。从表6灵芝多糖紫外检测结果可见，本发明灵芝子实体加盐酸浸泡后高压，提取检测的灵芝多糖明显高于未加盐酸浸泡后高压的芝子实体，其中，加盐酸浸泡后高压灵芝子实体(4号平均值)中灵芝多糖的含量是未加盐酸浸泡后高压芝子实体的4.2倍(3号平均值)。结果表明，本发明的加盐酸浸泡后高压灵芝子实体中主要成份灵芝多糖的含量更高，本发明的加盐酸浸泡后高压再提取多糖的方法是获得有效成分更高的更为简便实用技术方案。本发明的技术方案制备的破壁灵芝孢子粉可以作为原料药或者直接装胶囊及压成片剂，可以制备成为药品、保健品及功能性食品。以上的仅为本发明的部分或优选实施例，无论是文字还是附图都不能因此限制本发明保护的范围，凡是在与本发明一个整体的构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的
技术领域：
均包括在本发明保护的范围内。当前第1页12