用于乙醇生产的改善的酵母的制作方法

文档序号:19792558发布日期:2020-01-24 14:35阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从含淀粉材料或含纤维素材料生产发酵产物的方法,所述方法包括:

(a)糖化所述含淀粉材料或含纤维素材料;和

(b)用发酵生物发酵步骤(a)的经糖化的材料;

其中所述发酵生物包含编码蛋白酶的异源多核苷酸,所述蛋白酶具有与seqidno:9、14、16、21、22、33、41、45、61、62、66、67和69中任一个的氨基酸序列至少80%序列同一性,例如至少85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性的成熟多肽序列。

2.如权利要求1所述的方法,其中所述异源多核苷酸编码蛋白酶,所述蛋白酶具有与seqidno:9、14、16、21、22、33、41、45、61、62、66、67和69中任一个的氨基酸序列相差不超过十个氨基酸,例如相差不超过五个氨基酸、相差不超过四个氨基酸、相差不超过三个氨基酸、相差不超过两个氨基酸、或相差一个氨基酸的成熟多肽序列。

3.如权利要求1或2所述的方法,其中所述异源多核苷酸编码蛋白酶,所述蛋白酶具有包含seqidno:9、14、16、21、22、33、41、45、61、62、66、67和69中任一个的氨基酸序列或由其组成的成熟多肽序列。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中步骤(a)的糖化发生在含淀粉材料上,并且其中所述含淀粉材料是糊化的或未糊化的淀粉。

5.如权利要求4所述的方法,所述方法包括在糖化之前,通过使所述含淀粉材料与α-淀粉酶接触来液化所述材料。

6.一种从含淀粉材料生产发酵产物的方法,所述方法包括:

(a)用α-淀粉酶液化所述含淀粉材料;

(b)糖化来自步骤(a)的液化醪;和

(c)用发酵生物发酵步骤(b)的经糖化的材料;

其中步骤(a)的液化和/或步骤(b)的糖化在外源添加的蛋白酶存在下进行;并且

其中所述发酵生物包含编码蛋白酶的异源多核苷酸。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中发酵在减氮条件下进行(例如,少于1000ppm补充尿素或氢氧化铵,如少于750ppm、少于500ppm、少于400ppm、少于300ppm、少于250ppm、少于200ppm、少于150ppm、少于100ppm、少于75ppm、少于50ppm、少于25ppm、或少于10ppm补充氮)。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法,其中在同时糖化和发酵(ssf)中同时进行发酵和糖化。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法,其中顺序进行发酵和糖化(shf)。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法,所述方法包括:从所述发酵中回收所述发酵产物。

11.如权利要求10所述的方法,其中从所述发酵中回收所述发酵产物包括蒸馏。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法,其中所述发酵产物是乙醇。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述发酵生物包含编码葡糖淀粉酶的异源多核苷酸。

14.如权利要求13所述的方法,其中所述葡糖淀粉酶是密孔菌葡糖淀粉酶(例如,本文所述的血红密孔菌葡糖淀粉酶)、粘褶菌葡糖淀粉酶(例如,本文所述的篱边粘褶菌或密粘褶菌葡糖淀粉酶)、或者酵母菌葡糖淀粉酶(例如,本文所述的扣囊复膜酵母菌葡糖淀粉酶,如seqidno:102或seqidno:103)。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法,其中所述发酵生物包含编码α-淀粉酶的异源多核苷酸。

16.如权利要求15所述的方法,其中所述α-淀粉酶是芽孢杆菌α-淀粉酶(例如,本文所述的嗜热脂肪芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、或地衣芽孢杆菌α-淀粉酶),或者德巴利酵母α-淀粉酶(例如,本文所述的西方德巴利酵母α-淀粉酶)。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法,其中所述发酵生物是酿酒酵母细胞。

18.一种重组酵母细胞,所述重组酵母细胞包含编码蛋白酶的异源多核苷酸,其中所述异源多核苷酸编码蛋白酶,所述蛋白酶具有与seqidno:9、14、16、21、22、33、41、45、61、62、66、67和69中任一个的氨基酸序列至少80%序列同一性,例如至少85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%序列同一性的成熟多肽序列。

19.如权利要求18所述的重组酵母,其中所述细胞是酿酒酵母细胞。

20.如权利要求18或19所述的重组酵母,其中所述发酵生物包含编码葡糖淀粉酶的异源多核苷酸和/或编码α-淀粉酶的异源多核苷酸。

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