一种鳄鱼油的提取方法与流程

本发明涉及油脂提取技术领域，尤其涉及一种鳄鱼油的提取方法。

背景技术：

鳄鱼的脂肪组织中可以提炼出大量的鳄鱼油，其性质与人体脂肪相近，因此有着良好的皮肤渗透性，易被人体吸收，还具有抗衰老作用，可以用作化妆品原料。研究发现鳄鱼油还有杀菌消炎，促进创面愈合、淡化疤痕的作用，在生物医药领域有着较好的应用前景。

目前鳄鱼油的提取主要是利用蒸煮法、压榨法、淡碱水解法，上述方法存在提取率低、原料浪费严重、提取时间长、熬制过程易氧化、能源消耗高等问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种的鳄鱼油的提取方法，该方法鳄鱼油的得率和品质均好于现有市场的销售品。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种鳄鱼油的提取方法，包括以下步骤：

1)将鳄鱼脂肪、角蛋白酶和水混合，调节ph值至6.8～7.2，55～65℃酶解1～3h，过滤，收集滤液，得到粗提物；

2)将活性炭和所述粗提物混合，静置，过滤，收集滤液，得到第一精制物；

3)将白土和所述第一精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到第二精制物；

4)将白土、活性炭和所述第二精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到鳄鱼油。

优选的，步骤1)所述鳄鱼脂肪和角蛋白酶的质量比为100:0.5～1.5；所述鳄鱼脂肪和水的比例为0.5～1.5g:0.5～1.5ml。

优选的，步骤1)所述酶解的温度为58～62℃；所述酶解的时间为1.5～2.5h。

优选的，步骤2)所述活性炭的颗粒大小为5mm*；所述活性炭和粗提物的质量比为6～10:100。

优选的，步骤2)～步骤4)所述静置的温度为55～65℃；所述静置的时间为15～25min。

优选的，步骤2)所述过滤的方式为滤网过滤；所述滤网的孔径为180～220目。

优选的，步骤3)所述离心的温度为25～35℃；所述离心的时间为12～18min；所述离心的转速为10000～14000rpm。

优选的，步骤3)所述过滤的方式为微孔滤膜过滤；所述微孔滤膜过滤为1.2μm孔径pp滤膜。

优选的，步骤4)所述白土、活性炭和第二精制物的质量比为3～8:3～8:100。

优选的，步骤4)所述过滤的方式为微孔滤膜过滤；所述微孔滤膜过滤为0.22μm孔径pp滤膜。

本发明有益效果：本发明提供了一种鳄鱼油的提取方法，包括以下步骤：

1)将鳄鱼脂肪、角蛋白酶和水混合，调节ph值至6.8～7.2，55～65℃酶解1～3h，过滤，收集滤液，得到粗提物；2)将活性炭和所述粗提物混合，静置，过滤，收集滤液，得到第一精制物；3)将白土和所述第一精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到第二精制物；4)将白土、活性炭和所述第二精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到鳄鱼油。本发明采用酶解法能够有效分解与蛋白相结合的脂肪，提高鳄鱼油得率，且无污染物带入，利于后续纯化过程；本发明运用微孔滤膜过滤的方法能够有效分离精制过程中的异物，并且能有效除菌，其操作简单、加工设备要求简单，能源消耗低。本发明获得的鳄鱼油可开发为渗透性强、高保湿性能的鳄鱼油护肤品等。本发明的方法收率高、周期短、无污染，酸值低、dha和epa等有效成分保存较好，能够获得略带鱼腥味、微黄色的澄清液态鳄鱼油。

附图说明

图1为不同蛋白酶提取鳄鱼油的提取情况。

具体实施方式

本发明提供了一种鳄鱼油的提取方法，包括以下步骤：

1)将鳄鱼脂肪、角蛋白酶和水混合，调节ph值至6.8～7.2，55～65℃酶解1～3h，过滤，收集滤液，得到粗提物；

2)将活性炭和所述粗提物混合，静置，过滤，收集滤液，得到第一精制物；

3)将白土和所述第一精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到第二精制物；

4)将白土、活性炭和所述第二精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到鳄鱼油。

本发明中，所述鳄鱼脂肪优选为北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪；本发明具体实施过程中，所述北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪为冷冻鳄鱼脂肪，在提取前优选的还包括对所述冷冻鳄鱼脂肪进行解冻和绞碎处理；所述解冻的温度优选为1～5℃，更优选为4℃；所述解冻的时间优选为6～10h，更优选为8h；经所述绞碎处理后的鳄鱼脂肪为糜状脂肪；所述糜状脂肪的粒径小于1mm；所述绞碎的设备优选为绞肉机。

经解冻和绞碎处理后，本发明将鳄鱼脂肪、角蛋白酶和水混合，调节ph值至6.8～7.2，55～65℃酶解1～3h，过滤，收集滤液，得到粗提物；所述鳄鱼脂肪和角蛋白酶的质量比优选为100:0.5～1.5，更优选为100:1；所述角蛋白酶购于浙江一诺生物科技有限公司；所述鳄鱼脂肪和水的比例优选为0.5～1.5g:0.5～1.5ml，更优选为1g:1ml；所述ph值优选为7；本发明对所述调节ph的试剂没有特殊要求，采用本领域常规试剂即可；所述酶解的温度优选为58～62℃，更优选为60℃；所述酶解的时间优选为1.5～2.5h，更优选为2h；本发明中，所述酶解的作用是有效分解与蛋白相结合的脂肪，提高鳄鱼油得率；所述过滤的方式优选为滤网过滤；所述滤网的孔径优选为180～220目，更优选为200目。

得到粗提物后，本发明将活性炭和所述粗提物混合，静置，过滤，收集滤液，得到第一精制物；所述活性炭的颗粒大小优选为5mm*；所述活性炭和粗提物的质量比优选为6～10:100，更优选为8:100；所述混合的过程优选的伴随搅拌；本发明对所述搅拌的转速、时间没有特殊限制，以混合均匀为准；所述静置的温度优选为55～65℃，更优选为60℃；所述静置的时间优选为15～25min，更优选为20min；所述静置的过程优选的水浴进行；所述过滤的方式优选为滤网过滤；所述滤网的孔径优选为180～220目，更优选为200目；所述滤网过滤活性炭能够有效去除异物，并且能够有效吸附色素和粗油中腥味。

得到第一精制物后，本发明将白土和所述第一精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到第二精制物；所述白土和第一精制物的质量比优选为3～8:100，更优选为5:100；本发明对所述混合的方式和时间没有特殊限制，以混合均匀为准；所述静置的温度优选为55～65℃，更优选为60℃；所述静置的时间优选为15～25min，更优选为20min；所述静置的过程优选的水浴进行；所述离心的温度优选为25～35℃，更优选为20℃；所述离心的时间优选为12～18min，更优选为15min；所述离心的转速优选为10000～14000rpm，更优选为12000rpm；所述过滤的方式优选为微孔滤膜过滤；所述微孔滤膜过滤优选为1.2μm孔径pp滤膜；所述微孔滤膜过滤能够有效分离异物，并且能有效除菌。

得到第二精制物后，将白土、活性炭和所述第二精制物混合，静置，离心，离心液过滤，收集滤液，得到鳄鱼油；所述活性炭的颗粒大小优选为5mm*；所述白土、活性炭和第二精制物的质量比优选为3～8:3～8:100，更优选为5:5:100；本发明对所述混合的方式和时间没有特殊限制，以混合均匀为准；所述静置的时间优选为15～25min，更优选为20min；所述离心的温度优选为25～35℃，更优选为20℃；所述静置的过程优选的水浴进行；所述离心的温度优选为25～35℃，更优选为20℃；所述离心的时间优选为12～18min，更优选为15min；所述离心的转速优选为10000～14000rpm，更优选为12000rpm；所述过滤的方式优选为微孔滤膜过滤；所述微孔滤膜过滤优选为0.22μm孔径pp滤膜；所述微孔滤膜过滤能够有效分离异物，并且能有效除菌。

得到鳄鱼油后，本发明优选的还包括对鳄鱼油进行灭菌、冷却处理；所述灭菌的方法优选为巴氏消毒；所述灭菌的温度优选为65～75℃，更优选为70℃；所述灭菌的时间优选为35～45min，更优选为40min；所述冷却的时间优选为15min；所述冷却后的温度优选为4℃；本发明中，所述巴氏消毒能够良好的保存脂肪酸中的多不饱和脂肪酸。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1)解冻：取冷冻鳄鱼脂肪(北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪)放入4℃环境中解冻8h。

2)将步骤1)中解冻后的鳄鱼脂肪放入绞肉机中绞碎成粒径小于1mm的糜状脂肪。

3)将步骤2)中糜状脂肪放进酶解罐中，加入1倍(w/v)纯净水，然后加入鳄鱼脂肪质量1％的角蛋白酶，混合后调节ph＝7.0，温度为60℃，酶解时间2h。

4)粗油过滤：将步骤3)处理后的分解液经200目滤网过滤得到粗油。

5)一次精制：向步骤4)得到的粗油中添加脂肪质量8％活性炭颗粒的活性炭颗粒(颗粒大小为5mm*)，搅拌均匀后于60℃水浴中保温20min，经200目滤网过滤。

6)两次精制：将步骤5)处理后的滤液中添加脂肪质量5％的白土，60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用1.2μm孔径pp滤膜过滤。

7)三次精制：将步骤6)处理后的滤液中再次添加脂肪质量5％的活性炭粉末和脂肪质量5％的白土，于60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用0.22μm孔径pp滤膜过滤，得到精制鳄鱼油。

8)灭菌：将步骤7)精制的鳄鱼油分装入瓶后放入灭菌锅中70℃灭菌40min，然后冷却15min至4℃后保存。

经检测，实施例1得到的精制鳄鱼油的提取率为64.73％，得到略带鱼腥味、微黄色的澄清液态鳄鱼油。

对比例1湿法熬制鳄鱼油

1)解冻：1)解冻：取冷冻鳄鱼脂肪(北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪)放入4℃环境中解冻8h。

2)将步骤1)中解冻后的鳄鱼脂肪放入绞肉机中绞碎成粒径小于1mm的糜状脂肪。

3)将步骤2)中糜状脂肪放进反应釜中，加入5倍(w/v)去离子水，混合后调节温度为85℃，熬炼4h。

4)粗油过滤：将步骤3)处理后的分解液经200目滤网过滤，进行固液分离，以分液漏斗进行油水分离后得到鳄鱼粗油。

5)一次精制：向步骤4)得到的粗油中添加脂肪质量8％活性炭颗粒的活性炭颗粒(颗粒大小为5mm*)，搅拌均匀后于60℃水浴中保温20min，经200目滤网过滤。

6)两次精制：将步骤5)处理后的滤液中添加脂肪质量5％的白土，60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用1.2μm孔径pp滤膜过滤。

7)三次精制：将步骤6)处理后的滤液中再次添加脂肪质量5％的活性炭粉末和脂肪质量5％的白土，于60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用0.22μm孔径pp滤膜过滤，得到精制鳄鱼油。

8)灭菌：将步骤7)精制的鳄鱼油分装入瓶后放入灭菌锅中70℃灭菌40min，然后冷却15min至4℃后保存。

按照对比例1的方法设置3组重复，分别为处理1、处理2和处理3。3个重复的提取情况如表1所示。

表1湿法熬制鳄鱼油提取结果

由表1可看出湿法熬制制取鳄鱼精油得率为45.79％，三次提取中处理3得到的粗油质量较高，而处理3精制油得率与处理1和2相当，可能是因为处理3提取分离过程中鳄鱼脂肪残渣中含水过高。

实施例2

1)解冻：取冷冻鳄鱼脂肪(北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪)放入4℃环境中解冻8h。

2)将步骤1)中解冻后的鳄鱼脂肪放入绞肉机中绞碎成粒径小于1mm的糜状脂肪。

3)将步骤2)中糜状脂肪放进酶解罐中，加入1倍(w/v)纯净水，然后加入鳄鱼脂肪质量1％的角蛋白酶，混合后调节ph＝7.0，温度为50℃，酶解时间4h。

4)粗油过滤：将步骤3)处理后的分解液经200目滤网过滤得到粗油。

5)一次精制：向步骤4)得到的粗油中添加脂肪质量8％活性炭颗粒的活性炭颗粒(颗粒大小为5mm*)，搅拌均匀后于60℃水浴中保温20min，经200目滤网过滤。

6)两次精制：将步骤5)处理后的滤液中添加脂肪质量5％的白土，60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用1.2μm孔径pp滤膜过滤。

7)三次精制：将步骤6)处理后的滤液中再次添加脂肪质量5％的活性炭粉末和脂肪质量5％的白土，于60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用0.22μm孔径pp滤膜过滤，得到精制鳄鱼油。

8)灭菌：将步骤7)精制的鳄鱼油分装入瓶后放入灭菌锅中70℃灭菌40min，然后冷却15min至4℃后保存。

对比例2

1)解冻：取冷冻鳄鱼脂肪(北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪)放入4℃环境中解冻8h。

2)将步骤1)中解冻后的鳄鱼脂肪放入绞肉机中绞碎成粒径小于1mm的糜状脂肪。

3)将步骤2)中糜状脂肪放进酶解罐中，加入1倍(w/v)纯净水，然后加入鳄鱼脂肪质量1％的碱性蛋白酶，混合后调节ph＝10.0，温度为50℃，酶解时间4h。

4)粗油过滤：将步骤3)处理后的分解液经200目滤网过滤得到粗油。

5)一次精制：向步骤4)得到的粗油中添加脂肪质量8％活性炭颗粒的活性炭颗粒(颗粒大小为5mm*)，搅拌均匀后于60℃水浴中保温20min，经200目滤网过滤。

6)两次精制：将步骤5)处理后的滤液中添加脂肪质量5％的白土，60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用1.2μm孔径pp滤膜过滤。

7)三次精制：将步骤6)处理后的滤液中再次添加脂肪质量5％的活性炭粉末和脂肪质量5％的白土，于60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用0.22μm孔径pp滤膜过滤，得到精制鳄鱼油。

8)灭菌：将步骤7)精制的鳄鱼油分装入瓶后放入灭菌锅中70℃灭菌40min，然后冷却15min至4℃后保存。

对比例3

1)解冻：取冷冻鳄鱼脂肪(北京泰鳄湖有限公司人工养殖暹罗鳄的尾部脂肪)放入4℃环境中解冻8h。

2)将步骤1)中解冻后的鳄鱼脂肪放入绞肉机中绞碎成粒径小于1mm的糜状脂肪。

3)将步骤2)中糜状脂肪放进酶解罐中，加入1倍(w/v)纯净水，然后加入鳄鱼脂肪质量1％的木瓜蛋白酶，混合后调节ph＝7.0，温度为50℃，酶解时间4h。

4)粗油过滤：将步骤3)处理后的分解液经200目滤网过滤得到粗油。

5)一次精制：向步骤4)得到的粗油中添加脂肪质量8％活性炭颗粒的活性炭颗粒(颗粒大小为5mm*)，搅拌均匀后于60℃水浴中保温20min，经200目滤网过滤。

6)两次精制：将步骤5)处理后的滤液中添加脂肪质量5％的白土，60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用1.2μm孔径pp滤膜过滤。

7)三次精制：将步骤6)处理后的滤液中再次添加脂肪质量5％的活性炭粉末和脂肪质量5％的白土，于60℃水浴中保温20min后分装至离心瓶中后离心，离心条件为15min(30℃，12000rpm)，将离心所得上清液倒入压滤器中，用0.22μm孔径pp滤膜过滤，得到精制鳄鱼油。

8)灭菌：将步骤7)精制的鳄鱼油分装入瓶后放入灭菌锅中70℃灭菌40min，然后冷却15min至4℃后保存。

实施例2、对比例2和对比例3对应不同蛋白酶提取鳄鱼油的酶解条件参见表2。实施例2、对比例2和对比例3对应不同蛋白酶提取鳄鱼油的提取情况参见图1。由图1可看出由于不同蛋白酶对肽键的专一性位点不同，会导致水解效果的差异，本发明选取了3种蛋白酶进行实验，其中角蛋白酶酶解效果最好，其次是木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶。

表2蛋白酶酶解条件

实施例3

在理化指标方面，针对传统的湿熬法(对比例1)和酶解法(实施例1)两种方法精制的鳄鱼油进行感观评价、酸价和过氧化值的测定，并于精制一级鱼油的水产行业标准sc/t3502-2016进行了对比，评定结果如下表3。

表3不同方法提取鳄鱼油的感官理化性质

由表3可知，对比例和实施例提取的鳄鱼油经精制后在外观、气味、酸价和过氧化值的指标上均能达到行业一级精制鱼油的标准，且本发明实施例1制备得到的鳄鱼油的过氧化值指标明显优于对比例1。

实施例4精制鳄鱼油脂肪酸成分分析

将对比例1制备的鳄鱼油及实施例1提取的鳄鱼油经过甲酯化处理后，参考gcms的nist谱图鉴定鳄鱼油各脂肪酸组分的含量。分析结果如下表4。

表4不同方法精制鳄鱼油的脂肪酸组成分析

由表4可知，除对比例1提取精制的鳄鱼油含有0.01％的癸酸外，两种方法提取鳄鱼油成分大致相同。两种提取方法得到的鳄鱼油成分主要以不饱和脂肪酸为主，实施例1和对比例1分别为68.14％和69.01％。其中含量最高的油酸占总脂肪酸含量的40％左右，这也使得鳄鱼油具备良好渗透性。同时，两种方法提取精制的鳄鱼油含亚麻酸、花生四烯酸、epa、dha等物质,与李慧的分析结果一致。

由以上实施例和对比例可知，对比例1湿法熬制鳄鱼精油平均提取率为45.79％，本发明实施例1得到的鳄鱼精油平均提取率为64.73％。对比例1的湿法熬制制取鳄鱼精油可充分保留鳄鱼油原有的脂肪酸组分，但提取后有固体脂肪残渣剩余，造成鳄鱼脂肪的提取不充分，且提取所耗费时间较长。而本发明的提取方法提取鳄鱼脂肪中的精油操作条件温和，高效，提取率高，提取精油脂肪酸成分也能得到很好的保留。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。