本发明涉及医药试剂技术领域，尤其是涉及一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用。
背景技术：
碱性磷酸酶(alp或akp)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶不是单一的酶，而是一组同功酶，其能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使dna或rna片段的5’-p末端转换成5’-oh末端。碱性磷酸酶能够催化多种底物显色，因此碱性磷酸酶常作为一种标记酶，在临床免疫体外诊断行业有着广泛的应用。
临床免疫体外诊断主要是依赖抗原抗体结合反应，并通过碱性磷酸酶催化底物显色，从而达到定量诊断的目的。因此，结合有碱性磷酸酶的抗原抗体试剂是临床免疫体外诊断试剂盒的重要组分，碱性磷酸酶的稳定性对检测结果的有效性和准确性至关重要。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
本发明的第二个目的在于提供上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，该方法操作简单、成本低廉，且制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。
本发明的第三个目的在于提供上述碱性磷酸酶标记物的稀释液或应用上述的制备方法制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。
本发明提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；
其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mm。
进一步地，所述锌离子的浓度为0.005-10mm，优选为0.005-1mm，更优选为0.01-0.1mm。
进一步地，所述镁离子的浓度为1-10mm，优选为1-5mm。
进一步地，所述蛋白质类化合物的质量浓度为0.01％-1％(w/v)，优选为0.02％-0.5％(w/v)，更优选为0.05％-0.1％(w/v)。
进一步地，所述蛋白质类化合物包括酪蛋白、白蛋白、明胶或黄原胶中的一种或多种，优选为酪蛋白。
进一步地，所述两亲性多聚物包括peg-plga、pa1080、ce510或ce210中的一种或多种，优选为pa1080。
进一步地，所述糖类化合物包括蔗糖、葡萄糖、海藻糖或麦芽糖中的一种或多种，优选为蔗糖。
进一步地，所述基础缓冲液包括磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种或多种，优选为3-吗啉丙磺酸。
本发明还提供了上述的碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，所述方法包括将二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物和糖类化合物溶解于基础缓冲液中，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液。
另外，本发明还提供了上述的碱性磷酸酶标记物的稀释液或应用上述的制备方法制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，包括锌离子、镁离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液，该稀释液中的锌离子能够有效保证碱性磷酸酶中锌离子的含量，浓度为1-50mm的镁离子作为碱性磷酸酶的激活剂，能够有效提高碱性磷酸酶的催化效率，蛋白质类化合物作为保护剂能够防止溶液中碱性磷酸酶变性，两亲性多聚物和糖类化合物均能够对碱性磷酸酶起到保护作用、基础缓冲液能够起到维持溶液ph的作用，从而增加碱性磷酸酶的稳定性。本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，通过各特定组分及特定组分浓度的相互配合，可提高碱性磷酸酶及其标记物在37℃环境下的热稳定性，从而提高其长期保存的稳定性，延长其有效期。此外，本发明通过确定碱性磷酸酶标记物的稀释液的特定组分，能够减少不必要的组分，节省成本。
本发明提供的上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，将特定的组分溶解于基础缓冲液中，即可得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液，该方法操作简单、成本低廉，且制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
根据本发明的一个方面，在至少一个实施例中提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；
其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mm。
碱性磷酸酶是一种含锌的金属酶，本发明提供的稀释液中的锌离子能够有效保证碱性磷酸酶中锌离子的含量，即能够避免碱性磷酸酶受不可控因素的影响从而失去金属锌。在本发明中，锌离子可以来源于含锌的可溶性盐，例如可以为，但不限于氯化锌、硫酸锌、硝酸锌或其他在溶液状态下可以解离出锌离子的盐。
浓度为1-50mm的镁离子作为碱性磷酸酶的激活剂，能够有效提高碱性磷酸酶的催化效率，同时提高碱性磷酸酶的刚性。在本发明中，镁离子可以来源于含镁的可溶性盐，例如可以为，但不限于氯化镁、硫酸镁、硝酸镁或其他在溶液状态下可以解离出镁离子的盐。在本发明中，镁离子的浓度例如可以为，但不限于1mm、5mm、10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm或50mm。镁离子的浓度低于1mm或高于50mm，均无法起到提高催化效率或提升酶刚性的目的。
蛋白质类化合物通过优先吸附作用能够作为保护剂能够防止溶液中碱性磷酸酶变性，例如因分子外吸附变性或因分子间聚合变性。对蛋白质类化合物的种类不做限定，凡是能够起到优先吸附作用的蛋白质类化合物均在本发明的保护范围之内。
两亲性多聚物和糖类化合物均能够对碱性磷酸酶起到保护作用。
其中，两亲性多聚物是指在同一分子链中含有亲水链段和亲油链段的两端亲疏水性不同的高分子聚合物，由于其一端疏水一端亲水的特性，当选择合适分子量的该多聚物时，其疏水端能够插入生物大分子，如蛋白质的内部疏水区域，而亲水端贴合蛋白质的亲水表面，起到支撑蛋白质三维结构的作用，进而起到稳定其生物活性的作用。
糖类化合物包括单糖、二糖和多糖，在本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液中添加糖类化合物，糖类通常具有5个以上的羟基，可以与蛋白质形成氢键以取代水，保证了蛋白质的稳定性；在溶液中它们易结合水分子，发生水合作用，减少了游离水的含量并增加了溶液的粘性，从而减缓晶核的生长过程，使形成的冰晶较细小，以达到保护的目的。
基础缓冲液能够起到维持溶液ph的作用，将本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的ph维持在7-9之间，从而增加碱性磷酸酶的稳定性。
本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，通过各特定组分及特定组分浓度的相互配合，可提高碱性磷酸酶及其标记物在37℃环境下的热稳定性，从而提高其长期保存的稳定性，延长其有效期。此外，本发明通过确定碱性磷酸酶标记物的稀释液的特定组分，能够减少不必要的组分，节省成本。
需要说明的是，碱性磷酸酶标记物包括标记了碱性磷酸酶的抗原抗体，因此，提高碱性磷酸酶的稳定性即可有效提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。
在一些优选的实施方式中，所述锌离子的浓度为0.005-10mm，例如可以为，但不限于0.005mm、0.01mm、0.05mm、0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、0.6mm、0.7mm、0.8mm、0.9mm或1mm。当锌离子的浓度在上述范围内时，能够有效保证碱性磷酸酶中锌离子的含量。
在一些更优选的实施方式中，锌离子的浓度为0.005-1mm，进一步优选为0.01-0.1mm。
通过对锌离子浓度的进一步调整和优化，能够更有效地保证碱性磷酸酶中锌离子的含量，同时避免浪费，节约成本。
在一些优选的实施方式中，所述镁离子的浓度为1-10mm，优选为1-5mm。
通过对锌离子浓度的进一步调整和优化，能够更有效地提高碱性磷酸酶的催化效率和碱性磷酸酶的刚性，同时避免浪费，节约成本。
在一些优选的实施方式中，所述蛋白质类化合物的质量浓度为0.01％-1％(w/v)，例如可以为，但不限于0.01％(w/v)、0.05％(w/v)、0.1％(w/v)、0.2％(w/v)、0.3％(w/v)、0.4％(w/v)、0.5％(w/v)、0.6％(w/v)、0.7％(w/v)、0.8％(w/v)、0.9％(w/v)或1％(w/v)。当蛋白质类化合物的浓度在上述范围内时，能够有效防止溶液中碱性磷酸酶变性。
在一些更优选的实施方式中，蛋白质类化合物的质量浓度为0.02％-0.5％(w/v)，更优选为0.05％-0.1％(w/v)。
通过对蛋白质类化合物的浓度的进一步调整和优化，能够更有效地防止溶液中碱性磷酸酶变性，同时避免浪费，节约成本。
在一些优选的实施方式中，所述蛋白质类化合物包括酪蛋白、白蛋白、明胶或黄原胶中的一种或多种，例如可以为酪蛋白、白蛋白、明胶或黄原胶，或者为酪蛋白和白蛋白的混合物，或者为酪蛋白和明胶的混合物，或者为酪蛋白、白蛋白和明胶的混合物，或者为白蛋白、明胶和黄原胶的混合物，或者为酪蛋白、白蛋白、明胶和黄原胶的混合物。
其中，白蛋白优选为牛血清白蛋白。
优选地，所述蛋白质类化合物为酪蛋白，酪蛋白是一种常用的蛋白类稳定剂，用于在溶液中维持生物活性大分子，特别是酶、抗体的稳定，其主要功能是维持蛋白结构，保护蛋白不受蛋白酶和其他氧化自由基的氧化。
当选择酪蛋白作为蛋白质类化合物时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
在一些优选的实施方式中，所述两亲性多聚物包括peg-plga(聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物)、pa1080、ce510或ce210中的一种或多种，例如可以为peg-plga、pa1080、ce510或ce210，或者peg-plga和pa1080的混合物，或者pa1080和ce510的混合物，或者ce510和ce210的混合物，或者peg-plga、pa1080和ce510的混合物，或者pa1080、ce510和ce210的混合物，或者peg-plga、pa1080、ce510和ce210的混合物。
优选地，所述两亲性多聚物优选为pa1080。
当选择pa1080作为两亲性多聚物时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
在一些优选的实施方式中，所述两亲性多聚物的质量浓度为0.0005-0.002％(w/v)，例如可以为，但不限于0.0005％(w/v)、0.0008％(w/v)、0.001％(w/v)、0.0012％(w/v)、0.0015％(w/v)、0.0018％(w/v)或0.002％(w/v)，优选为0.0008-0.0015％(w/v)，更优选为0.001％(w/v)。
当两亲性多聚物的浓度在上述范围内时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
在一些优选的实施方式中，所述糖类化合物包括蔗糖、葡萄糖、海藻糖或麦芽糖中的一种或多种，例如可以为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或麦芽糖，或者为蔗糖和葡萄糖的混合物，或者为海藻糖和麦芽糖的混合物，或者为蔗糖、葡萄糖和海藻糖的混合物，或者为葡萄糖、海藻糖和麦芽糖的混合物，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖和麦芽糖的混合物。
优选地，所述糖类化合物为蔗糖。蔗糖的主要功能是保护蛋白不受氧化，从而维持其活性。
当选择蔗糖作为糖类化合物时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
在一些优选的实施方式中，所述糖类化合物的浓度为1-10mg/ml，例如可以为，但不限于1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml或10mg/ml，优选为2-8mg/ml，更优选为5mg/ml。
当糖类化合物的浓度在上述范围内时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
在一些优选的实施方式中，所述基础缓冲液包括磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸(mes)、3-吗啉丙磺酸(mops)或4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)中的一种或多种，例如可以为磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸，或者为磷酸盐和三(羟甲基)氨基甲烷的混合物，或者为2-吗啉乙磺酸和3-吗啉丙磺酸的混合物，或者为磷酸盐和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物，或者为磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷和2-吗啉乙磺酸的混合物，或者为2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物，或者为磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物。
优选地，所述基础缓冲液为3-吗啉丙磺酸。3-吗啉丙磺酸是一种缓冲范围为ph6.5-7.9的两性离子缓冲液(good’s缓冲液)，其具有高水溶性、低细胞膜通透性、稳定的酸碱离解常数、低金属螯合能力、高化学稳定性等特点。
当选择3-吗啉丙磺酸作为基础缓冲液时，本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液对碱性磷酸酶的热稳定性提高更显著。
本发明还提供了上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，所述方法包括将二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物和糖类化合物溶解于基础缓冲液中，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液。
对上述制备方法中组分的加入顺序不做限定，上述组分可以顺序加入，也可以随机加入，或者同时加入，凡是在加入后能够溶解于基础缓冲液中即可。
本发明提供的上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，将特定的组分溶解于基础缓冲液中，即可得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液，该方法操作简单、成本低廉，且制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。
另外，本发明还提供了上述碱性磷酸酶标记物的稀释液或应用上述的制备方法制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。
本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够有效提高高碱性磷酸酶及其标记物在37℃环境下的热稳定性，基于上述发明构思，本发明还提供了该稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。
为了便于理解本发明，下面结合具体实施例和对比例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子5mm、酪蛋白0.1％、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
实施例1-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将3-吗啉丙磺酸替换为磷酸盐。
实施例1-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将3-吗啉丙磺酸替换为三(羟甲基)氨基甲烷。
实施例1-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将3-吗啉丙磺酸替换为4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
实施例1-4
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将3-吗啉丙磺酸替换为2-吗啉乙磺酸。
实施例2-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，锌离子的浓度为10mm。
实施例2-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，锌离子的浓度为1mm。
实施例2-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，锌离子的浓度为0.1mm。
实施例2-4
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，锌离子的浓度为0.005mm。
实施例3-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，镁离子的浓度为50mm。
实施例3-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，镁离子的浓度为10mm。
实施例3-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，镁离子的浓度为1mm。
实施例4-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，酪蛋白的浓度为0.01％。
实施例4-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，酪蛋白的浓度为0.02％。
实施例4-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，酪蛋白的浓度为0.05％。
实施例4-4
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，酪蛋白的浓度为0.5％。
实施例5-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将pa1080替换为peg-plga。
实施例5-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将pa1080替换为ce510。
实施例5-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将pa1080替换为ce210。
实施例6-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将蔗糖替换为葡萄糖。
实施例6-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将蔗糖替换为麦芽糖。
实施例6-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将蔗糖替换为海藻糖。
实施例7-1
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将酪蛋白替换为牛血清白蛋白。
实施例7-2
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将酪蛋白替换为明胶。
实施例7-3
本实施例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，与实施例1的不同之处在于，将酪蛋白替换为黄原胶。
实施例8
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.002mm、镁离子25mm、酪蛋白0.2％、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例1
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子0.8mm、酪蛋白0.1％、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例2
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
镁离子5mm、酪蛋白0.1％、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例3
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、酪蛋白0.1％、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例4
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子5mm、pa1080、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例5
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子5mm、酪蛋白0.1％、蔗糖和3-吗啉丙磺酸。
对比例6
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子5mm、酪蛋白0.1％、pa1080和3-吗啉丙磺酸。
对比例7
本对比例提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：
锌离子0.01mm、镁离子5mm、酪蛋白0.1％、pa1080、蔗糖和水。
将上述实施例1、实施例1-1至实施例1-4、实施例2-1至实施例2-4、实施例3-1至实施例3-3、实施例4-1至实施例4-4、实施例5-1至实施例5-3、实施例6-1至实施例6-3、实施例7-1至实施例7-3以及对比例1-8提供的各固体组分溶解于相应的基础缓冲液中，得到相应的碱性磷酸酶标记物的稀释液。
为了对本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液进行进一步的说明，进行如下实验：
实验例
材料与仪器
碱性磷酸酶抗体标记物：抗体来源于鼠。
各项目样品：
磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、2-吗啉乙磺酸(mes)、3-吗啉丙磺酸(mops)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)、酪蛋白、氯化镁、氯化锌、peg-plga，pa1080，ce510，ce210、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、酪蛋白和其它试剂应达到分析纯。
富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)、梅特勒天平。
1、基础缓冲液的选择
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例1-1至实施例1-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液，置于37℃恒温培养箱中进行6天热加速稳定性实验，以系列浓度校准品为样本，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，比较热加速前后碱性磷酸酶标记物的反应性。结果见表1。
表1不同稀释液中不同浓度样品的37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例1-1至实施例1-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例1-1至实施例1-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的基础缓冲液得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
2、锌离子浓度筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例2-1至实施例2-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液，稀释液的ph均为7.3，后续实验提到的稀释液也ph均为7.3。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表2所示。
表2稀释液中不同浓度氯化锌37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例2-1至实施例2-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例2-1至实施例2-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的锌离子浓度得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
3、镁离子浓度筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例3-1至实施例3-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表3所示。
表3稀释液中不同浓度氯化镁37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例3-1至实施例3-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例3-1至实施例3-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的镁离子浓度得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
4、酪蛋白浓度的筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例4-1至实施例4-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表4所示。
表4稀释液中不同浓度酪蛋白37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例4-1至实施例4-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例4-1至实施例4-4提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的酪蛋白浓度得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
5、两亲性多聚物的筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例5-1至实施例5-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表5所示。
表5不同稀释液中不同浓度样品的37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例5-1至实施例5-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例5-1至实施例5-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的两亲性多聚物得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
6、糖类化合物的筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例6-1至实施例6-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表6所示。
表6稀释液中不同糖类化合物37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例6-1至实施例6-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例6-1至实施例6-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的糖类化合物得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
7、蛋白质类化合物的筛选
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、实施例7-1至实施例7-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表7所示。
表7稀释液中不同蛋白质类化合物37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例7-1至实施例7-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均较好，其中，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液热加速稳定性优于实施例7-1至实施例7-3提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，说明应用本发明优选的蛋白质类化合物得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
8、对比实验
将标记碱性磷酸酶的抗tsh抗体分别用实施例1、8和对比例1-7提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液配制成终浓度为0.25μg/ml的溶液。经过6天37℃加速稳定性考察，使用富士全自动化学发光免疫分析仪(fujirebio-g1200)进行检测，得到结果如表8所示。
表8不同稀释液37℃6天热加速稳定性
由反应性剩余结果可知，实施例1、实施例8提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性均优于对比例1-7。
其中，实施例1与实施例8提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液相比，原料组分相同，但实施例8中各组分浓度不在本发明优选范围内，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性优于实施例8，说明在原料组分相同的情况下，各组分浓度在本发明优选范围内的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有更好的热加速稳定性。
实施例1与对比例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液相比，仅镁离子的浓度不同，对比例1提供的镁离子浓度不在本发明范围内，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性优于对比例1，说明在原料组分相同的情况下，只有组分浓度在本发明范围内，才能使得本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有良好的热加速稳定性。
实施例1与对比例2-7提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其相同组分的配比相同，但对比例2中缺少锌离子、对比例3中缺少镁离子、对比例4中缺少蛋白质类化合物、对比例5中缺少两亲性多聚物、对比例6中缺少糖类化合物、对比例7中用水代替了基础缓冲液，实施例1提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液的热加速稳定性优于对比例2-7，说明在相同原料组分的配比相同的情况下，只有通过各原料特定组分之间的协同配合，才能使得本发明提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液具有良好的热加速稳定性。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。