本发明涉及免疫学技术领域。
具体地说，是涉及肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品及其制备方法。
背景技术：
体外诊断试剂领域飞速发展，各方法学，各检测指标，日益丰富，给人类的临床指导提供了方便、快捷、准确的诊断方向。随着肺炎支原体igm抗体的大规模生产和应用，肺炎支原体igm抗体阳性血清的质控，临床对照需求逐渐增大，但其潜在的感染风险，不容忽视。尽管目前使用的阳性血清，都有严格的灭活流程，和灭菌处理方式，但其可能存在的感染风险仍没有明确结论。此外，国家对人血清严格监管，购买或收集资质要求高，来源少，价格高，这给阳性血清的使用单位提高了门槛，增加了难度。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种高效价的肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品及其制备方法，既实现了与mp反应的igm抗体性能，又实现了与人igm抗体反应的抗原性能，关键是消除了人血清中可能存在的传染性致病因子的危险性。
本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：
肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品，其特征在于：包括兔抗肺炎支原体igm抗体和正常人免疫球蛋白m，兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m通过交联反应，形成mp-igm抗体-人igm蛋白的交联物。
如上所述的肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
s1、制备兔抗肺炎支原体igm抗体；
s2、兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m交联。
作为一种改进：兔抗肺炎支原体igm抗体的制备包括以下步骤：
s11、免疫；
第一天，弗氏完全佐剂0.8-1.2ml、肺炎支原体重组蛋白0.8-1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第四天，弗氏不完全佐剂0.8-1.2ml、肺炎支原体重组蛋白0.8-1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第七天，弗氏不完全佐剂0.8-1.2ml、肺炎支原体重组蛋白0.8-1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十天，弗氏不完全佐剂0.8-1.2ml、肺炎支原体重组蛋白0.8-1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十二天，取血，离心取上清检测抗血清效价，如达到要求，即可开始每4-6天取一次血清；0.45μm微孔滤膜过滤。
作为一种改进：离心取上清检测抗血清效价，如达不到要求，则每3天加强免疫一次，2天后取血清检测，直至检测效价合格。
作为一种改进：兔抗肺炎支原体igm抗体的制备还包括以下步骤：
s12、纯化；
a1、取抗血清20体积份分别加入15-25体积份pbs缓冲液和8-12体积份饱和硫酸铵溶液，充分混匀；
a2、7000-9000r/min离心18-22min，弃上清，除去白蛋白，沉淀为粗提的免疫球蛋白；
a3、沉淀加15-25体积份pbs缓冲液，再加入饱和硫酸铵溶液8-12体积份，充分混匀；
a4、7000-9000r/min离心18-22min，弃上清；
a5、沉淀加8-12体积份pbs缓冲液，装入透析袋，放于pbs缓冲液中4℃透析24-48h，直至无so42-或nh4+出现为止；
a6、透析结束后，2500-3500r/min离心18-22min，上清用0.22μm微孔滤膜过滤，即为纯化的mp-igm抗体。
作为一种改进：还包括以下步骤：
a7、取mp-igm抗体样本稀释100倍，紫外可见分光光度计测定其在波长260nm、280nm处的吸光值，然后计算得蛋白浓度。
作为一种改进：还包括以下步骤：
a8、取mp-igm抗体样本通过sds-page电泳，完成电泳测试纯度。
作为一种改进：所述饱和硫酸铵溶液的配置包括以下步骤：称硫酸铵400-425克，用50-80℃的蒸馏水500ml溶解，浓氨水调ph至7.3-7.5。
作为一种改进：兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m交联包括以下步骤：
s21、将2质量份人igm溶于450000-500000体积份结合缓冲液mes中，充分溶解；
s22、将10质量份edc溶于800-1200体积份水中；
s23、将步骤s21的产物加入步骤s22的产物中，向混合液中缓慢加入含1.8-2.2质量份兔抗mp-igm抗体的180-200体积份结合缓冲液；
s24、透析分离产品，即得兔抗mp-igm抗体与人免疫球蛋白m的交联产物。
由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：既实现了与mp反应的igm抗体性能，又实现了与人igm抗体反应的抗原性能，关键是消除了人血清中可能存在的传染性致病因子的危险性。
下面具体实施方式对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1：肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品，包括兔抗肺炎支原体igm抗体和正常人免疫球蛋白m，兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m通过交联反应，形成mp-igm抗体-人igm蛋白的交联物。
实施例2：如实施例1所述的肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品的制备方法，包括以下步骤：
s1、制备兔抗肺炎支原体igm抗体。
选优的，兔抗肺炎支原体igm抗体的制备包括以下步骤：
s11、免疫。
第一天，弗氏完全佐剂0.8ml、肺炎支原体重组蛋白0.8mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第四天，弗氏不完全佐剂0.8ml、肺炎支原体重组蛋白0.8mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第七天，弗氏不完全佐剂0.8ml、肺炎支原体重组蛋白0.8mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十天，弗氏不完全佐剂0.8ml、肺炎支原体重组蛋白0.8mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十二天，取血10ml，3500r/min，离心12min取上清检测抗血清效价，如达到要求（1:2000以上），即可开始每4天取一次血清。0.45μm微孔滤膜过滤，过滤分装至无菌管中，-20℃保存。
如达不到要求，则每3天加强免疫一次，2天后取血清检测，直至检测效价合格。
s12、纯化。
a1、取抗血清20体积份分别加入15体积份pbs缓冲液和8体积份饱和硫酸铵溶液，边加边搅拌，充分混匀，静置30min。
所述饱和硫酸铵溶液的配置包括以下步骤：称硫酸铵400克，用50℃的蒸馏水500ml溶解，浓氨水调ph至7.3。
a2、7000r/min离心18min，弃上清，除去白蛋白，沉淀为粗提的免疫球蛋白。
a3、沉淀加15体积份pbs缓冲液，使其完全溶解，再加入饱和硫酸铵溶液8体积份，充分混匀，4℃静置30min；。
a4、7000r/min离心18min，弃上清。
重复步骤a3、a4，2次。
a5、沉淀加8体积份pbs缓冲液，完全溶解后，装入透析袋，透析除盐，放于pbs缓冲液中4℃透析24h，换液5次，以1%bacl2检查透析液中的so42-或以纳氏试剂检查nh4+（取3-4ml透析液，加试剂1-2滴，出现砖红色即认为有nh4+存在），直至无so42-或nh4+出现为止。
a6、透析结束后，2500r/min离心18min，上清用0.22μm微孔滤膜过滤，即为纯化的mp-igm抗体。
a7、取mp-igm抗体样本稀释100倍，紫外可见分光光度计测定其在波长260nm、280nm处的吸光值，然后计算得蛋白浓度。
蛋白浓度计算公式为：蛋白浓度（mg/ml）=1.45xod280-0.74xod260检测浓度。
a8、取mp-igm抗体样本通过sds-page电泳，完成电泳测试纯度。
s2、兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m交联。
s21、将2质量份人igm溶于450000体积份结合缓冲液mes（2-（n-吗啉代）乙磺酸）中，充分溶解。
s22、将10质量份edc（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）平衡到室温，溶于800体积份水中。
s23、将步骤s21的产物加入步骤s22的产物中，向混合液中缓慢加入含1.8质量份兔抗mp-igm抗体的180体积份结合缓冲液，室温下反应2h。
s24、透析分离产品，隔5h换一次透析液，换液5次。
即得兔抗mp-igm抗体与人免疫球蛋白m的交联产物，-20℃保存。
实施例3：如实施例1所述的肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品的制备方法，包括以下步骤：
s1、制备兔抗肺炎支原体igm抗体。
选优的，兔抗肺炎支原体igm抗体的制备包括以下步骤：
s11、免疫。
第一天，弗氏完全佐剂1ml、肺炎支原体重组蛋白1mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第四天，弗氏不完全佐剂1ml、肺炎支原体重组蛋白1mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第七天，弗氏不完全佐剂1ml、肺炎支原体重组蛋白1mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十天，弗氏不完全佐剂1ml、肺炎支原体重组蛋白1mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十二天，取血10ml，4000r/min，离心15min取上清检测抗血清效价，如达到要求（1:2000以上），即可开始每4-6天取一次血清。0.45μm微孔滤膜过滤，过滤分装至无菌管中，-20℃保存。
如达不到要求，则每3天加强免疫一次，2天后取血清检测，直至检测效价合格。
s12、纯化。
a1、取抗血清20体积份分别加入20体积份pbs缓冲液和10体积份饱和硫酸铵溶液，边加边搅拌，充分混匀，静置30min。
所述饱和硫酸铵溶液的配置包括以下步骤：称硫酸铵410克，用65℃的蒸馏水500ml溶解，浓氨水调ph至7.4。
a2、8000r/min离心20min，弃上清，除去白蛋白，沉淀为粗提的免疫球蛋白。
a3、沉淀加20体积份pbs缓冲液，使其完全溶解，再加入饱和硫酸铵溶液10体积份，充分混匀，4℃静置30min；。
a4、8000r/min离心20min，弃上清。
重复步骤a3、a4，2次。
a5、沉淀加10体积份pbs缓冲液，完全溶解后，装入透析袋，透析除盐，放于pbs缓冲液中4℃透析36h，换液5次，以1%bacl2检查透析液中的so42-或以纳氏试剂检查nh4+（取3-4ml透析液，加试剂1-2滴，出现砖红色即认为有nh4+存在），直至无so42-或nh4+出现为止。
a6、透析结束后，3000r/min离心20min，上清用0.22μm微孔滤膜过滤，即为纯化的mp-igm抗体。
a7、取mp-igm抗体样本稀释100倍，紫外可见分光光度计测定其在波长260nm、280nm处的吸光值，然后计算得蛋白浓度。
蛋白浓度计算公式为：蛋白浓度（mg/ml）=1.45xod280-0.74xod260检测浓度。
a8、取mp-igm抗体样本通过sds-page电泳，完成电泳测试纯度。
s2、兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m交联。
s21、将2质量份人igm溶于470000体积份结合缓冲液mes（2-（n-吗啉代）乙磺酸）中，充分溶解。
s22、将10质量份edc（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）平衡到室温，溶于1000体积份水中。
s23、将步骤s21的产物加入步骤s22的产物中，向混合液中缓慢加入含2质量份兔抗mp-igm抗体的190体积份结合缓冲液，室温下反应2h。
s24、透析分离产品，隔5h换一次透析液，换液5次。
即得兔抗mp-igm抗体与人免疫球蛋白m的交联产物，-20℃保存。
实施例4：如实施例1所述的肺炎支原体igm抗体的阳性血清替代品的制备方法，包括以下步骤：
s1、制备兔抗肺炎支原体igm抗体。
选优的，兔抗肺炎支原体igm抗体的制备包括以下步骤：
s11、免疫。
第一天，弗氏完全佐剂1.2ml、肺炎支原体重组蛋白1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第四天，弗氏不完全佐剂1.2ml、肺炎支原体重组蛋白1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第七天，弗氏不完全佐剂1.2ml、肺炎支原体重组蛋白1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十天，弗氏不完全佐剂1.2ml、肺炎支原体重组蛋白1.2mg，颈部、大腿内部、背部10点注射；
第十二天，取血10ml，4500r/min，离心12-18min取上清检测抗血清效价，如达到要求（1:2000以上），即可开始每6天取一次血清。0.45μm微孔滤膜过滤，过滤分装至无菌管中，-20℃保存。
如达不到要求，则每3天加强免疫一次，2天后取血清检测，直至检测效价合格。
s12、纯化。
a1、取抗血清20体积份分别加入25体积份pbs缓冲液和12体积份饱和硫酸铵溶液，边加边搅拌，充分混匀，静置30min。
所述饱和硫酸铵溶液的配置包括以下步骤：称硫酸铵25克，用80℃的蒸馏水500ml溶解，浓氨水调ph至7.5。
a2、9000r/min离心22min，弃上清，除去白蛋白，沉淀为粗提的免疫球蛋白。
a3、沉淀加25体积份pbs缓冲液，使其完全溶解，再加入饱和硫酸铵溶液12体积份，充分混匀，4℃静置30min；。
a4、9000r/min离心22min，弃上清。
重复步骤a3、a4，3次。
a5、沉淀加12体积份pbs缓冲液，完全溶解后，装入透析袋，透析除盐，放于pbs缓冲液中4℃透析48h，换液6次，以1%bacl2检查透析液中的so42-或以纳氏试剂检查nh4+（取3-4ml透析液，加试剂1-2滴，出现砖红色即认为有nh4+存在），直至无so42-或nh4+出现为止。
a6、透析结束后，3500r/min离心22min，上清用0.22μm微孔滤膜过滤，即为纯化的mp-igm抗体。
a7、取mp-igm抗体样本稀释100倍，紫外可见分光光度计测定其在波长260nm、280nm处的吸光值，然后计算得蛋白浓度。
蛋白浓度计算公式为：蛋白浓度（mg/ml）=1.45xod280-0.74xod260检测浓度。
a8、取mp-igm抗体样本通过sds-page电泳，完成电泳测试纯度。
s2、兔抗肺炎支原体igm抗体与正常人免疫球蛋白m交联。
s21、将2质量份人igm溶于500000体积份结合缓冲液mes（2-（n-吗啉代）乙磺酸）中，充分溶解。
s22、将10质量份edc（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）平衡到室温，溶于1200质量体积份水中。
s23、将步骤s21的产物加入步骤s22的产物中，向混合液中缓慢加入含2.2质量份兔抗mp-igm抗体的200质量体积份结合缓冲液，室温下反应2h。
s24、透析分离产品，隔5h换一次透析液，换液6次。
即得兔抗mp-igm抗体与人免疫球蛋白m的交联产物，-20℃保存。
以上对本发明的数个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围之内。