本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种祛斑美肤sod复合酶及其制备方法。
背景技术：
众所周知，细胞经呼吸获取氧，其中98%氧与细胞内的葡萄糖和脂肪相结合，转化为能量，满足细胞活动的需要，另外2%的氧则转化成氧自由基。由于氧自由基这种物质非常活跃，几乎可以与各种物质发生作用，引起一系列对细胞具有破坏性的连锁反应，从而引起人体衰老和多种疾病。
在一般情况下，细胞不会遭到氧自由基的杀害，这是因为人体细胞内存在着大量氧自由基的克星---抗氧化剂，比如，脂溶性的维生素e、水溶性的维生素c及一些酶类。这些天然的抗氧化剂能够与氧自由基发生氧化还原，使氧自由基彻底清除。此类经自由基机制实现抗氧化作用的抗氧化剂称为自由基清除剂。
然而，随着年龄的增大，人体内产生自由基清除剂的能力下降，导致体内清除剂的含量减少，活性也逐渐降低，从而削弱了对自由基的防御能力，加速了生命的衰老变化并引发一系列病变。例如老年斑和花斑的产生，老年斑的形成原因是：氧自由基与多种不饱和脂肪酸作用生成一系列过氧化物，与蛋白质作用，使蛋白质交联聚合，产生不溶性蛋白质，以结缔组织中的胶原最为明显，导致胶原坚韧，长度缩短，失去膨胀力，产生皱纹；过氧化脂质在氧化酶的作用下能分解生成丙二醛，在体内的丙二醛（mda）迅速与磷脂酰乙醇胺交联生成黄色色素，然后再与蛋白酶、肽类或脂类结合成无生物活性的棕褐色色素，产生老年斑；色斑产生的原因：阳自由基摧毁细胞膜，导致细胞死亡和细胞膜发生变化，从而使得细胞不能从外部吸收营养，也排泄不出细胞内的代谢产物，长期积累形成黑色素，导致皮肤色斑、黄褐斑、蝴蝶斑等各种色斑的产生。
因此，为了防御自由基的损害，可以向人体内额外补充自由基清除剂，以达到抵御疾病、延缓衰老及老年斑、色斑的产生。
经大量的医学研究证明，sod是一种重要的人体超氧阴离子自由基清除剂，为此，可以通过向人体内额外的补充sod手段来达到抵御疾病、延缓衰老及老年斑、色斑的产生的目的。但现有的sodod来源是从动物血液、胰脏和植物中提取，从动物血液、胰脏中提取的sod为单一性的cu/zn-sod,其综合抗氧化性差，清除自由基的能力弱。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种祛斑美肤sod复合酶，该sod复合酶以刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果为原料制备而呈，其不但含有cu/zn-sod、mn-sod、fe-sod三类金属辅基的酶类自由基清除剂和非酶类自由基清除剂，而且还含有枸杞多糖、人体必需氨基酸、维生素c、类黄酮等众多抗氧化剂，综合抗氧性能好，清除自由基的能力强，在抵御疾病、延缓衰老及祛斑美肤方面的效果好。同时，本发明的目的还在于提供一种上述祛斑美肤sod复合酶的制备方法。
为实现上述目的，本发明的祛斑美肤sod复合酶采用的技术方案是，所述祛斑美肤sod复合酶，主要以下重量份数的原料制成：刺梨干果30～60份、枸杞干果10～30份、桑葚干果10～30份、沙棘干果5～20份。
优选的，所述祛斑美肤sod复合酶，主要以下重量份数的原料制成：刺梨干果50份、枸杞干果20份、桑葚干果20份、沙棘干果10份。
优选的，所述刺梨干果为野生刺梨干果，枸杞干果为野生刺梨干果、桑葚干果为野生桑葚干果、沙棘干果为野生沙棘干果。
本发明的祛斑美肤sod复合酶中，各原料的特性如下：
刺梨：为蔷薇科多年生落叶灌木缫丝花的果实，果实多为扁圆球形，横径一般为2厘米至4厘米，8月至9月果实成熟，黄色，有时带红晕。果肉脆，成熟后有浓芳香味。果皮上密生小肉刺，俗称之为"刺梨"。果实内含有丰富的维生素c，被称为"维c之王"。单宁500毫克至1000毫克;含酸1克左右;总糖量一般4克左右。特别是刺梨富含超氧化物歧化酶（简称sod），sod是国际公认具有抗衰、防癌作用的活性物质，还具有抗病毒、抗辐射的作用，在心血管、消化系统和各种肿瘤疾病防治方面，应用十分广泛。
枸杞：是补益类名贵中药，为茄科枸杞属植物。在枸杞的干燥果实中枸杞多糖含量为5％～8％，总黄酮为5％～6％；我国古代医书《本草纲目》记载：“枸杞，主五内邪气，热中消渴，周痹风湿。久服，坚筋骨，轻身不老，耐暑寒，补精气不足，易颜色，变白，明目安神，令人长寿”。现代药理学研究发现，枸杞具有明目、治疗高血压、抗菌消炎、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、防癌症以及调节免疫等作用。
桑葚：是桑科桑属多年生木本植物桑树的果实，桑椹中含有多种功能性成分，如芦丁、花青素、白黎芦醇等，具有良好的防癌、抗衰老、抗溃疡、抗病毒等作用。桑葚有改善皮肤(包括头皮)血液供应，营养肌肤，使皮肤白嫩及乌发等作用，并能延缓衰老。
沙棘：为胡颓子科沙棘属植物沙棘的果实，又名醋柳果，酸刺果。在沙棘果中包含了β-胡萝卜素、不饱和脂肪酸、氨基酸、黄酮类、维生素、微量元素等，能够降低人体内胆固醇，合理预防动脉粥样硬化。沙棘果实中蕴含的超氧化物歧化酶，也可以有效挥发出体内自由基作用，并且提高人体免疫力，对人体的免疫活性细胞进行调节，充当免疫调节剂的作用，有助于延缓人体衰老。
本发明的祛斑美肤sod复合酶的制备方法，包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果分别粉碎至10～25目，刷选去除刺梨子，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，100kg物料加入8～10倍的水，浸提温度为45～65℃，浸提时间为12～16h，得到浸提液；
（4）将浸提液静置冷却温度至25～32℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液放弃；
（5）将截留液升温至50～60℃，每100l的截留液体中加入1.6～2.8kg的海藻糖进行搅拌均匀10～30min，在50～60℃的恒温条件下静置15～25min，得到含有海藻糖的截留液；
（6）将含有海藻糖的截留液在50～60℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-35～-31℃，冻干时间19～24h，然后进行升华除水，升华的温度为0～25℃，升华时的真空度为60～100pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
优选的，所述步骤（2）中将清洗后的刺梨干果和枸杞干果分别粉碎至18目。
优选的，所述所述步骤（3）中的浸提温度为58℃。
优选的，所述所述步骤（7）中的冻干温度为-26～-24℃。
优选的，所述所述步骤（1）中的刺梨干果为野生刺梨干果，枸杞干果为野生枸杞干果，桑葚干果为野生桑葚干果，沙棘干果为野生沙棘干果。
本发明的有益效果：本发明的祛斑美肤sod复合酶以刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果为原料制备而成，其不但含有cu/zn-sod、mn-sod、fe-sod三类金属辅基的酶类自由基清除剂和非酶类自由基清除剂，而且还含有枸杞多糖、人体必需氨基酸、维生素c、类黄酮等众多抗氧化剂，综合抗氧性能好，清除自由基的能力强，在抵御疾病、延缓衰老及祛斑美肤方面的效果好。
本发明的祛斑美肤sod复合酶不但是酶类自由基清除剂，且还含有非酶类自由基清除剂，具有催化超氧阴离子（o2.-）歧化为h2o2和o2的能力，过氧化氢（h2o2）经过cat歧化生成h2o与o2。在人体抗氧化和清除自由基生化反应中，是一种综合性很强的抗氧化剂类物质，同时具备全方位、无死角的清除细胞内、外的自由基，修复被自由基损伤的细胞，抑制自由基再次损伤细胞的功能。
本发明的祛斑美肤sod复合酶的制备过程，对原料粉碎后以水为溶剂并45～65℃的温度下进行sod复合酶浸提，水取代了有机溶剂，避免了在浸提过程中有机溶剂与其它活性物质发生化学反应生成新衍生物而抑制sod复合酶活性的问题，从而确保了所提取sod复合酶的抗氧化功能；同时，在浸提过程中，温度控制在45～65℃，经实验证明，在该温度范围下，各种浸提物之间不会发生化合反应，不会有新的衍生物生成，进而不但确保了所提取sod复合酶的纯度，而且进一步的确保了所提取sod复合酶的活性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下重量份数的原料制成：刺梨干果50份、枸杞干果20份、桑葚干果20份、沙棘干果10份。
本实施例的祛斑美肤sod复合酶的制备方法，包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果粉碎分别粉碎至18目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚干果粉碎物沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚干果粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入8倍的水，浸提温度为58℃；浸提时间为14h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度25℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至55℃，每100l的截留液体中加入2kg的海藻糖，搅拌均匀20min，在55℃恒温条件下静置20min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod复合酶的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在55℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-35℃，冻干时间19h，然后进行升华除水，升华的温度为25℃，升华时的真空度为60pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
实施例2
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下重量份数的原料制成：刺梨干果30份、枸杞干果30份、桑葚干果10份、沙棘干果20份。
本实施例的祛斑美肤sod复合酶的制备方法，包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果分别粉碎至10目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入10倍的水，浸提温度为65℃；浸提时间为12h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度28℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至60℃，每100l的截留液体中加入1.6kg的海藻糖，搅拌均匀10min，在60℃恒温条件下静置15min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod复合酶的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在60℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-31℃，冻干时间20h，然后进行升华除水，升华的温度为20℃，升华时的真空度为80pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
实施例3
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下重量份数的原料制成：刺梨60份、枸杞干果10份、桑葚干果30份、沙棘干果5份。
本实施例的祛斑美肤sod复合酶的制备方法，包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果分别粉碎至25目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入9倍的水，浸提温度为45℃，浸提时间为16h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度32℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至50℃，每100l的截留液体中加入2.8kg的海藻糖，搅拌均匀30min，在50℃恒温条件下静置25min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在50℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-33℃，冻干时间22h，然后进行升华除水，升华的温度为10℃，升华时的真空度为100pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
实施例4
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下重量份数的原料制成：野生刺梨干果50份、野生枸杞干果20份、野生桑葚干果20份、野生沙棘干果10份。
本实施例的祛斑美肤sod复合酶的制备方法,包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果分别粉碎至14目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入8倍的水，浸提温度为60℃，浸提时间为15h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度26℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至58℃，每100l的截留液体中加入1.8kg的海藻糖，搅拌均匀20min，在50℃恒温条件下静置18min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod复合酶的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在58℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-25℃，冻干时间22h，然后进行升华除水，升华的温度为5℃，升华时的真空度为70pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
实施例5
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下重量份数的原料制成：野生刺梨干果30份、野生枸杞干果30份、野生桑葚干果10份、野生沙棘干果20份。
本实施例的祛斑美肤sod复合酶的制备方法，包括以下步骤：
（1）净选上述重量份数的野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果，清洗；
（2）将野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果分别粉碎至22目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入10倍的水，浸提温度为48℃，浸提时间为13h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度30℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至53℃，每100l的截留液体中加入2.2kg的海藻糖，搅拌均匀20min，在53℃恒温条件下静置22min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod复合酶的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在53℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-26℃，冻干时间21h，然后进行升华除水，升华的温度为0℃，升华时的真空度为70pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
实施例6
本实施例的祛斑美肤sod复合酶，主要由以下质量份数的原料制成：野生刺梨干果60份、野生枸杞干果10份、野生桑葚干果30份、野生沙棘干果5份。
（1）净选上述重量份数的野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果，清洗；
（2）将清洗后的野生刺梨干果、野生枸杞干果、野生桑葚干果、野生沙棘干果分别粉碎至12目，筛选去除刺梨籽，得到刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物；
（3）将刺梨粉碎物、枸杞粉碎物、桑葚粉碎物、沙棘粉碎物混合均匀，放入浸提容器内进行浸提，浸提溶剂为水，每100kg物料加入8倍的水，浸提温度为62℃，浸提时间为14h，得到浸提液，浸提液中含有sod复合酶、维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性固形物；
（4）将浸提液静置冷却至温度27℃时进行超滤，截留分子量1000道尔顿，截留液待用，通过液废弃，该步骤的目的是过滤掉浸提液中的小分子物质（维生素a、维生素c、胡萝卜素、人体必须的氨基酸、类黄酮等可溶性物物质），以提高sod复合酶的纯度和避免小分子物质之间发生化学反应生成衍生物而抑制sod复合酶活性的问题；
（5）将截留液升温至54℃，每100l的截留液体中加入2.6kg的海藻糖，搅拌均匀20min，在54℃恒温条件下静置16min，得到含有海藻糖的截留液，海藻糖是一种保护剂，其作用是保护sod复合酶的活性；
（6）将含有海藻糖的截留液在57℃进行真空浓缩，浓缩至固形物含量46%，得到浓缩液；
（7）将浓缩液灌装并送入冷冻干燥机内进行冻干，冻干温度为-24℃，冻干时间24h，然后进行升华除水，升华的温度为15℃，升华时的真空度为90pa，得到粉末状的祛斑美肤sod复合酶。
经试验证明，在制备祛斑sod复合酶的步骤（1）中，将原料（刺梨干果、枸杞干果、桑葚干果、沙棘干果）粉碎成10～25目大小的颗粒，在该粒度大小范围下的原料容易浸提sod复合酶，且sod复合酶的浸出率高。
经实验证明，在步骤（3）中，浸提温度在45～65℃范围内，各种浸提物之间不会发生化合反应，即不会有新的衍生物生成，这样避免了衍生物抑制sod复合酶活性的问题，从而确保了所提取sod复合酶的抗氧化功能和纯度。