1.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体分子由两条相同的多肽链以共价键结合形成四价同源二聚体，每条多肽链从n端至c端依次包含特异性结合肿瘤相关抗原的第一单链fv、特异性结合效应细胞抗原cd3的第二单链fv和fc片段；其中，第一和第二单链fv通过连接肽相连，而第二单链fv与fc片段直接相连或通过连接肽相连，且所述fc片段不具有cdc、adcc和adcp等效应子功能。
2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv所包含的vh结构域和vl结构域通过连接肽连接，且所述连接肽的氨基酸序列为(ggggx)n，x包含ser或ala，x优选ser；n为1-5的自然数，n优选3。
3.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述肿瘤相关抗原包含但不限于：cd19、cd20、cd22、cd25、cd30、cd33、cd38、cd39、cd40、cd47、cd52、cd73、cd74、cd123、cd133、cd138、bcma、ca125、cea、cs1、dll3、dll4、egfr、epcam、flt3、gpa33、gpc-3、her2、mege-a3、nyeso1、psma、tag-72、cix、叶酸盐结合蛋白、gd2、gd3、gm2、vegf、vegfr2、vegfr3、钙黏素(cadherin)、整合素(integrin)、间皮素(mesothelin)、claudin18、αvβ3、α5β1、erbb3、c-met、igf1r、epha3、trailr1、trailr2、rankl、b7蛋白家族、粘蛋白家族(mucin)、fap和肌腱蛋白(tenascin)；优选地，所述肿瘤相关抗原为cd19、cd20、cd22、cd30、cd38、bcma、cs1、epcam、cea、her2、egfr、ca125、mucin1、gpc-3和mesothelin。
4.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd19，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：9、10和11所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：12、13和14所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：17、18和19所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：20、21和22所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：25、26和27所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：28、29和30所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iv)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：33、34和35所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：36、37和38所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
5.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd20，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：41、42和43所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：44、45和46所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：49、50和51所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：52、53和54所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：57、58和59所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：60、61和62所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iv)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：65、66和67所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：68、69和70所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
6.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd22，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：73、74和75所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：76、77和78所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：81、82和83所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：84、85和86所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
7.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd30，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：89、90和91所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：92、93和94所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：97、98和99所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：100、101和102所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
8.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合epcam，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：105、106和107所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：108、109和110所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：113、114和115所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：116、117和118所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
9.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cea，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：121、122和123所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：124、125和126所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：129、130和131所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：132、133和134所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：137、138和139所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：140、141和142所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
10.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合her2，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：145、146和147所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：148、149和150所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：153、154和155所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：156、157和158所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：161、162和163所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：164、165和166所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
11.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合egfr，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：169、170和171所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：172、173和174所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：177、178和179所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：180、181和182所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：185、186和187所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：188、189和190所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
12.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合gpc-3，其vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：193、194和195所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：196、197和198所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
13.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合mesothelin，其vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：201、202和203所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：204、205和206所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
14.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合mucin1，其选自下组：
(i)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：209、210和211所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：212、213和214所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：217、218和219所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：220、221和222所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
15.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合ca125，其vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：225、226和227所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：228、229和230所示，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
16.如权利要求1或4所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd19，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：15所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：16所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：23所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：24所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含如seqidno：31所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：32所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iv)vh结构域包含如seqidno：39所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：40所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
17.如权利要求1或5所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd20，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：47所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：48所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：55所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：56所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含如seqidno：63所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：64所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iv)vh结构域包含如seqidno：71所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：72所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
18.如权利要求1或6所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd22，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：79所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：80所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：87所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：88所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
19.如权利要求1或7所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cd30，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：95所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：96所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：103所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：104所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
20.如权利要求1或8所述的双特异性抗体，其特征在于，更优选地，所述第一单链fv特异性结合epcam，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：111所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：112所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：119所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：120所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
21.如权利要求1或9所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合cea，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：127所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：128所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：135所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：136所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含如seqidno：143所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：144所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
22.如权利要求1或10所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合her2，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：151所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：152所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：159所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：160所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含如seqidno：167所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：168所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
23.如权利要求1或11所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合egfr，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：175所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：176所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：183所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：184所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(iii)vh结构域包含如seqidno：191所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：192所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
24.如权利要求1或12所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合gpc-3，其vh结构域包含如seqidno：199所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：200所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
25.如权利要求1或13所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合mesothelin，其vh结构域包含如seqidno：207所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：208所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
26.如权利要求1或14所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合mucin1，其选自下组：
(i)vh结构域包含如seqidno：215所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：216所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；
(ii)vh结构域包含如seqidno：223所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：224所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
27.如权利要求1或15所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一单链fv特异性结合ca125，其vh结构域包含如seqidno：231所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：232所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
28.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv所包含的vh结构域和vl结构域通过连接肽连接，且所述连接肽的氨基酸序列为(ggggx)n，x包含ser或ala，x优选ser；n为1-5的自然数，n优选3。
29.如权利要求1或28所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv在体外结合亲和力分析中以大于约50nm，或大于100nm，或大于300nm，或大于500nm的ec50值结合于效应细胞；更优选地，所述双特异性抗体的第二单链fv不仅能与人cd3结合，还可与食蟹猴或恒河猴的cd3特异性结合。
30.如权利要求29所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv的vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：241、242和243所示，或与上述序列至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：244、245和246所示，或与上述序列至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代的序列。
31.如权利要求29所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv的vh结构域包含的hcdr1、hcdr2和hcdr3分别如seqidno：249、250和251所示，或与上述序列至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代的序列；和其vl结构域包含的lcdr1、lcdr2和lcdr3分别如seqidno：252、253和254所示，或与上述序列至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代的序列。
32.如权利要求30所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv特异性结合cd3，其vh结构域包含如seqidno：247所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：248所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
33.如权利要求31所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二单链fv特异性结合cd3，其vh结构域包含如seqidno：255所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列；和其vl结构域包含如seqidno：256所示的氨基酸序列，或与上述序列中的任何基本上相同(例如至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高度相似的或具有一个或更多个氨基酸取代(例如保守性取代))的序列。
34.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述连接第一单链fv和第二单链fv的连接肽由柔性肽和刚性肽组成；且所述柔性肽包含2个或更多个氨基酸，并优选自下列几种氨基酸：gly(g)、ser(s)、ala(a)和thr(t)；更优地，所述柔性肽包含g和s残基；最优地，所述柔性肽的氨基酸组成结构通式为gxsy(ggggs)z，其中x，y和z是大于或等于0的整数，且x+y+z≥1；所述刚性肽来自天然人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端第118至145位氨基酸组成的全长序列或其截短的片段；优选地，所述刚性肽包含sssskappps。
35.如权利要求34所述的双特异性抗体，其特征在于，所述连接肽包含如seqidno：258所示的氨基酸序列。
36.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，连接所述fc片段与第二单链fv的连接肽包含1-20个氨基酸，并优选自下列几种氨基酸：gly(g)、ser(s)、ala(a)和thr(t)；较优选自gly(g)和ser(s)；更优选地，所述连接肽组成为(ggggs)n，n＝1，2，3或4。
37.如权利要求1或36所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段包含来源于人免疫球蛋白重链恒定区的铰链区、ch2和ch3结构域；较优地，fc片段选自人igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区；较优地，fc片段选自人igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区；更优地，fc片段选自人igg1或igg4的重链恒定区；并且，所述fc片段与其所源自的天然序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。
38.如权利要求37所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段包含具有降低或消除的效应子功能(adcp、adcc和cdc效应)的氨基酸置换、缺失或添加。
39.如权利要求38所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段包含根据eu编号系统确定的l234a/l235a/p331s的氨基酸置换。
40.如权利要求38或39所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段还包含具有以下一种或多种性质的氨基酸的置换、缺失或添加：
(i)与新生儿受体(fcrn)的结合亲和力增强；
(ii)降低或消除的糖基化；
(iii)降低或消除的电荷异质性。
41.如权利要求40所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段还包含以下一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加：
(i)根据eu编号系统确定的m428l、t250q/m428l、m428l/n434s或m252y/s254t/t256e的氨基酸置换；
(ii)根据eu编号系统确定的n297a的氨基酸置换；
(iii)根据eu编号系统确定的k447的氨基酸缺失。
42.如权利要求40所述的双特异性抗体，其特征在于，所述fc片段的氨基酸序列如seqidno：263所示，它与其所源自的天然序列相比具有根据eu编号系统确定的以下6个氨基酸的置换或取代：l234a/l235a/n297a/p331s/t250q/m428l；且缺失或删除了根据eu编号系统确定的k447。
43.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cd19和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：264所示的序列；
(ii)与seqidno：264所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：264所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
44.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cd19和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：283所示的序列；
(ii)与seqidno：283所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：283所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
45.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cd20和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：266所示的序列；
(ii)与seqidno：266所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：266所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
46.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cd22和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：268所示的序列；
(ii)与seqidno：268所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：268所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
47.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cd30和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：270所示的序列；
(ii)与seqidno：270所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：270所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
48.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人epcam和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：272所示的序列；
(ii)与seqidno：272所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：272所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
49.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人cea和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：274所示的序列；
(ii)与seqidno：274所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：274所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
50.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人her2和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：8所示的序列；
(ii)与seqidno：8所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：8所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
51.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人egfr和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：277所示的序列；
(ii)与seqidno：277所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：277所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
52.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人gpc-3和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：279所示的序列；
(ii)与seqidno：279所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：279所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
53.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人mesothelin和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：281所示的序列；
(ii)与seqidno：281所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：281所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
54.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体结合人mucin1和cd3，其氨基酸序列如下：
(i)seqidno：285所示的序列；
(ii)与seqidno：285所示的序列相比具有一个或几个置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与seqidno：285所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
55.编码如权利要求1-54任一项所述双特异性抗体的dna分子。
56.如权利要求55所述的dna分子具有如seqidno：265、267、269、271、273、275、276、278、280、282、284或286所示的核苷酸序列。
57.包含如权利要求55或56所述dna分子的载体。
58.包含如权利要求57所述载体的宿主细胞；所述宿主细胞包含原核细胞、酵母或哺乳动物细胞，优选为cho细胞。
59.一种药物组合物，所述组合物包含如权利要求1-54任一项所述的双特异性抗体以及可药用赋形剂、载体或稀释剂。
60.制备如权利要求1-54任一项所述双特异性抗体的方法，其包括：(a)获得双特异性抗体的融合基因，构建双特异性抗体的表达载体；(b)通过基因工程方法将上述表达载体转染到宿主细胞中；(c)在允许产生所述双特异性抗体的条件下培养上述宿主细胞；(d)分离、纯化产生的所述抗体；
其中，步骤(a)中所述表达载体选自质粒、细菌和病毒中的一种或多种，优选地，所述表达载体为pcdna3.4载体；
其中，步骤(b)通过基因工程方法将所构建的载体转染入宿主细胞中，所述宿主细胞包含原核细胞、酵母或哺乳动物细胞，如cho细胞、ns0细胞或其它哺乳动物细胞，优选为cho细胞；
其中，步骤(d)通过常规的免疫球蛋白纯化方法，包含蛋白质a亲和层析和离子交换、疏水层析或分子筛方法分离、纯化所述双特异性抗体。
61.如权利要求1-54任一项所述双特异性抗体在制备治疗、预防或缓解癌症/肿瘤的药物中的用途，所述癌症的实例包括但不限于间皮瘤、鳞状细胞瘤、骨髓瘤、骨肉瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性上皮肿瘤、腺癌、黑色素瘤、肉瘤、急性和慢性白血病、淋巴瘤和脑膜瘤、霍奇金病、塞扎莱综合征、多发性骨髓瘤，肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、喉癌、乳腺癌、头颈癌、膀胱癌、子宫癌、皮肤癌、前列腺癌、宫颈癌、阴道癌、胃癌、肾细胞癌、肾癌、胰腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝胆癌、骨癌、皮肤癌和血液癌，以及鼻腔鼻窦癌、鼻咽癌、口腔癌、口咽癌、喉头癌、喉下部癌、唾液腺癌、纵隔膜癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠和肛门区域的癌症、输尿管癌、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、外阴癌、内分泌系统癌症、中枢神经系统癌症和浆细胞癌。
62.如权利要求1-54任一项所述双特异性抗体用于增强或刺激免疫应答或功能的方法，其包含对患者/受试者个体施用治疗有效量的所述双特异性抗体。
63.如权利要求1-54任一项所述双特异性抗体用于治疗肿瘤、延迟其进展、降低/抑制其复发的方法，其包括将有效量的所述双特异性抗体给予或施用至所述患有以上疾病或病症的个体；所述肿瘤的实例包括但不限于间皮瘤、鳞状细胞瘤、骨髓瘤、骨肉瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、恶性上皮肿瘤、腺癌、黑色素瘤、肉瘤、急性和慢性白血病、淋巴瘤和脑膜瘤、霍奇金病、塞扎莱综合征、多发性骨髓瘤，肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、喉癌、乳腺癌、头颈癌、膀胱癌、子宫癌、皮肤癌、前列腺癌、宫颈癌、阴道癌、胃癌、肾细胞癌、肾癌、胰腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝胆癌、骨癌、皮肤癌和血液癌，以及鼻腔鼻窦癌、鼻咽癌、口腔癌、口咽癌、喉头癌、喉下部癌、唾液腺癌、纵隔膜癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠和肛门区域的癌症、输尿管癌、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、外阴癌、内分泌系统癌症、中枢神经系统癌症和浆细胞癌。