本发明涉及一种含氮杂螺环衍生物及其制备方法和在医药上的应用，具体是一种具有毒蕈碱受体拮抗和β2-肾上腺素能受体激动的双重活性的新颖含氮杂螺环衍生物或其立体异构体、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐、共晶或前药、其药物组合物以及其在医药上的应用。
背景技术：
支气管扩张剂对于呼吸疾病例如慢性阻塞性肺疾病(copd)及哮喘等的治疗起重要作用。临床中广泛使用的支气管扩张剂包括毒蕈碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素受体激动剂。毒蕈碱受体拮抗剂通过降低气道平滑肌的迷走神经胆碱能水平来发挥支气管扩张的效力。目前所使用的吸入毒蕈碱受体拮抗剂包括异丙托溴铵、氧托溴铵、格隆溴铵、噻托溴铵、阿地溴胺和芜地溴胺。β2-肾上腺素受体激动剂通过刺激气道平滑肌的肾上腺素能受体而使支气管扩张，逆转支气管收缩剂对各种介质如乙酰胆碱的反应。目前所使用的β2-肾上腺素受体激动剂包括沙丁胺醇、沙美特罗、阿福特罗、福美特罗、维兰特罗和茚达特罗。这些药物除了改善肺的功能，也可改善患者生活质量并减少病情恶化。
随着更多的临床研究发现，证明联合使用毒蕈碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素受体激动剂比单独使用其中一种治疗剂更有效，目前临床上将毒蕈碱受体拮抗剂和β2-肾上腺素受体激动剂制备成复方制剂，用于哮喘和中重度copd的治疗，这类复方制剂主要包括anoroellipta(芜地溴胺/维兰特罗)、ultibrobreezhaler(格隆溴铵/茚达特罗)和异丙托溴胺/沙丁胺醇等。虽然复方制剂比其中单一制剂具有更好的治疗效果，但是在制剂制备上有更高的要求。
因此，人们希望开发同时具有毒蕈碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动双重作用的药物，这种双功能药物具有两种成分组合的药学优点，同时具备单一的分子药代动力学。这些化合物以单一治疗剂的形式给药，可以由两种不同且可能协同起效的作用模式提供支气管扩张作用。另外，具有毒蕈碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动双重作用(maba)的化合物还可以与皮质类固醇(ics)消炎剂药物组合，形成两种治疗剂(maba/ics)而提供三重作用的治疗效果(expertopin.investig.drugs(2014)23(4):453-456)。
因此，有必要开发新颖的同时具有毒蕈碱受体拮抗和β2-肾上腺素能激动的双重活性药物，以提供更有效的单一治疗剂量或者复方制剂，为患者提供更多的临床用药选择。
技术实现要素：
本发明提供一种通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，
其中：
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h或c1-6烷基；
cy选自未取代或者取代的
q2选自-ch-或-n-，条件是q1和q2不同时含有n；
n1、n2、n3和n4各自独立的选自0、1、2、3或4，条件是n1与n2不同时为0，n3和n4不同时为0；
x、y、z各自独立地选自氮、-nrx1-、-crx1rx2-、-crx1rx2crx3rx4-、-crx1＝crx2-、-s-、-o-和-c(o)-；
rx1、rx2、rx3或rx4各自独立地选自h或c1-4烷基；
通式(i)中“------”选自单键或双键；
r1选自
r1a、r1b各自独立的选自h、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3至8元杂环基、c3-10碳环基-c1-4亚烷基或3至8元杂环基-c1-4亚烷基，所述烯基、炔基、亚烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、ch2f、chf2、cf3、oh、och2f、ochf2、ocf3、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、-o(＝o)c1-4烷基、-(＝o)c1-4烷基、-oc3-6环烷基或c1-4烷硫基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个选自n、o或s的杂原子，条件是r1a、r1b不能同时为h；
r1c选自h、羟基、氰基、nh2、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷硫基或-c(＝o)nh2，所述nh2、-c(＝o)nh2或烷基任选进一步被0至2个选自f、cl、br、i、羟基、氰基或c1-4烷基的取代基所取代；
r1e和r1f各自独立选自f、cl、br、i、cf3、nh2、oh、羧基、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷硫基、-nhc1-4烷基、-n(c1-4烷基)2、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基或-c(＝o)o-c1-4烷基；
r2或r4自独立选自选自c1-6亚烷基、c2-6亚烯基或c2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基或苯基-c1-4亚烷基的取代基所取代；
r3各自独立选自f、cl、br、i、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c1-4烷氧基、-oc3-6环烷基、c1-4烷硫基、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基、-c(＝o)-c1-4烷基、-c(＝o)o-c1-4烷基、-oc(＝o)-c1-4烷基或-c(＝o)nh2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、nh2或-c(＝o)nh2任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、c1-4烷基、c1-4烷氧基或-c(＝o)-c1-4烷基的取代基所取代；
r5、r6各自独立的选自h或c1-4烷基；
a为0、1、2、3、4或5；
b为0、1、2、3或4；
c选自0、1、2、3或4。
在本发明的具体实施方案中，在上述的通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
b优选选自
b更优选选自
b进一步优选选自
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h或c1-6烷基；
cy选自未取代或者取代的
cy为含n杂环时，n原子与q1接相连接；
x、y、z各自独立地选自氮、-nrx1-、-crx1rx2-、-crx1rx2crx3rx4-、-crx1＝crx2-、-s-、-o-和-c(o)-；
rx1、rx2、rx3或rx4各自独立地选自h或c1-4烷基；
通式(i)中“------”选自单键或双键；
r1选自
r1a、r1b各自独立的选自h、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3至8元杂环基、c3-10碳环基-c1-4亚烷基或3至8元杂环基-c1-4亚烷基，所述烯基、炔基、亚烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、ch2f、chf2、cf3、oh、och2f、ochf2、ocf3、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、-o(＝o)c1-4烷基、-(＝o)c1-4烷基、-oc3-6环烷基或c1-4烷硫基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个选自n、o或s的杂原子，条件是r1a、r1b不能同时为h；
r1c选自h、羟基、氰基、nh2、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷硫基或-c(＝o)nh2，所述nh2、-c(＝o)nh2或烷基任选进一步被0至2个选自f、cl、br、i、羟基、氰基或c1-4烷基的取代基所取代；
r1e和r1f各自独立选自f、cl、br、i、cf3、nh2、oh、羧基、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷硫基、-nhc1-4烷基、-n(c1-4烷基)2、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基或-c(＝o)o-c1-4烷基；
r2或r4自独立选自选自c1-6亚烷基、c2-6亚烯基或c2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基或苯基-c1-4亚烷基的取代基所取代；
r3各自独立选自f、cl、br、i、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c1-4烷氧基、-oc3-6环烷基、c1-4烷硫基、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基、-c(＝o)-c1-4烷基、-c(＝o)o-c1-4烷基、-oc(＝o)-c1-4烷基或-c(＝o)nh2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、nh2或-c(＝o)nh2任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、c1-4烷基、c1-4烷氧基或-c(＝o)-c1-4烷基的取代基所取代；
r5、r6各自独立的选自h或c1-4烷基；
b选自
其中q选自-ch＝ch-、-ch2ch2-、-o-、-s-、-ch2o-、-och2-、-c(ch3)2o-或-oc(ch3)2-；
b优选选自
a为0、1、2、3、4或5；
b为0、1、2、3或4；
c选自0、1、2、3或4。
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h或c1-6烷基；
cy选自未取代或者取代的
cy为含n杂环时，n原子与q1接相连接；
x、y、z各自独立地选自氮、-nrx1-、-crx1rx2-、-crx1rx2crx3rx4-、-crx1＝crx2-、-s-、-o-和-c(o)-；
rx1、rx2、rx3或rx4各自独立地选自h或c1-4烷基；
通式(i)中“------”选自单键或双键；
r1选自
r1a、r1b各自独立的选自h、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-7碳环基、3至6元杂环基、c3-7碳环基-c1-4亚烷基或3至6元杂环基-c1-4亚烷基，所述烯基、炔基、亚烷基、碳环基或杂环基任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、-o(＝o)c1-4烷基、-(＝o)c1-4烷基、-oc3-6环烷基或c1-4烷硫基的取代基所取代，所述杂环基含有1至3个选自n、o或s的杂原子，条件是r1a、r1b不同时为h；
r1c选自h、羟基、氰基、nh2、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷硫基或-c(＝o)nh2，所述nh2、-c(＝o)nh2或烷基任选进一步被0至2个选自f、cl、br、i、羟基、氰基或c1-4烷基的取代基所取代；
r1e和r1f各自独立选自f、cl、br、i、cf3、nh2、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷硫基、-nhc1-4烷基或-n(c1-4烷基)2；
r3各自独立选自f、cl、br、i、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c2-4炔基、c1-4烷氧基、-oc3-6环烷基、c1-4烷硫基、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基、-c(＝o)-c1-4烷基或-c(＝o)o-c1-4烷基，所述烷基、炔基、烷氧基、环烷基和nh2任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、c1-4烷基、c1-4烷氧基或-c(＝o)-c1-4烷基的取代基所取代；
r2或r4自独立选自选自c1-6亚烷基、c2-6亚烯基或c2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基或苯基-c1-4亚烷基的取代基所取代；
r5、r6各自独立的选自h或c1-4烷基；
b选自
其中q选自-ch＝ch-、-ch2ch2-、-o-、-s-、-ch2o-、-och2-、-c(ch3)2o-或-oc(ch3)2-；
b优选选自
a为0、1、2、3、4或5；
b为0、1、2、3或4；
c选自0、1、2、3或4。
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h、甲基、乙基、丙基或异丙基；
cy选自未取代或者取代的
cy为含n杂环时，n原子与q1接相连接；
x、y、z各自独立地选自氮、-nh-、-ch2-、-ch2ch2-、-ch-、-ch＝ch-、-s-、-o-和-c(o)-；
通式(i)中“------”选自单键或双键；
r1选自
r2、r4各自独立的选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基，所述的亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基或亚戊基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、氰基、oh、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
r3各自独立地选自f、cl、br、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、chf2、cf3、甲氧基、乙氧基、-ochf2或-ocf3；
r5、r6各自独立的选自h、甲基或乙基；
b选自
a为0或1；
b为0、1或2；
c为0、1或2。
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(i)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，所述化合物选自通式(ii)所示的化合物：
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h或c1-6烷基；
cy选自未取代或者取代的
q2选自-ch-或-n-，条件是q1和q2不同时含有n；
n1、n2、n3和n4各自独立的选自0、1、2、3或4，条件是n1与n2不同时为0，n3和n4不同时为0；
r2选自c1-6亚烷基、c2-6亚烯基或c2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基或苯基-c1-4亚烷基的取代基所取代；
r3各自独立选自f、cl、br、i、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c1-4烷氧基、-oc3-6环烷基、c1-4烷硫基、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基、-c(＝o)-c1-4烷基、-c(＝o)o-c1-4烷基、-oc(＝o)-c1-4烷基或-c(＝o)nh2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、nh2或-c(＝o)nh2任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、c1-4烷基、c1-4烷氧基或-c(＝o)-c1-4烷基的取代基所取代；
c选自0、1、2、3或4。
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(ii)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
cy选自未取代或者取代的
cy为含n杂环时，n原子与q1相连接；
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h或c1-6烷基；
r2选自c1-6亚烷基、c2-6亚烯基或c2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选进一步被0至5个选自f、cl、br、i、oh、氰基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基或苯基-c1-4亚烷基的取代基所取代；
r3各自独立选自f、cl、br、i、oh、nh2、羧基、氰基、硝基、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c1-4烷氧基、-oc3-6环烷基、c1-4烷硫基、-s(＝o)-c1-4烷基、-s(＝o)2-c1-4烷基、-c(＝o)-c1-4烷基、-c(＝o)o-c1-4烷基、-oc(＝o)-c1-4烷基或-c(＝o)nh2，所述烷基、烷氧基、环烷基、烯基、炔基、nh2或-c(＝o)nh2任选进一步被0至4个选自f、cl、br、i、cf3、c1-4烷基、c1-4烷氧基或-c(＝o)-c1-4烷基的取代基所取代；
c选自0、1、2、3或4。
在本发明的优选实施方案中，在上述的通式(ii)所示的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药中，
cy选自未取代或者取代的
cy为含n杂环时，n原子与q1相连接；
q1选自键或-n(rq)-；
rq选自h、甲基、乙基、丙基或异丙基；
r2选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、-ch2ch(ch3)-、-ch2c(ch3)2-、-c(ch3)2ch2-、-ch(ch3)ch2-、亚丁基、-ch(ch3)ch2ch2-、-ch2ch(ch3)ch2-、-ch2ch(ch3)ch2-或亚戊基；
r3各自独立地选自f、cl、br、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、chf2、cf3、甲氧基、乙氧基、-ochf2或-ocf3；
c选自0、1或2。
在本发明的优选实施方案中，所述的化合物选自如下结构：
本发明还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有治疗有效剂量的上述通式(i)或(ii)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，以及药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂、媒介物或赋形剂；所述的组合物还可进一步包括一种或几种其他治疗剂；优选地，其中所述其他治疗剂选自pde4抑制剂、毒蕈碱受体拮抗剂、皮质类固醇和β-肾上腺素能受体激动剂中的一种或几种。
本发明还提供了上述通式(i)或(ii)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，在制备用于治疗气道阻塞性疾病的药物中的应用，优选地，在制备用于治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支气管炎的药物中的应用。
本发明还提供了一种治疗气道阻塞性疾病的方法，所述方法包括给药上述通式(i)或(ii)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，或上述的药物组合物。
本发明还提供了一种治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病或支气管炎的方法，所述方法包括给药上述通式(i)或(ii)所述的化合物或其立体异构体、水合物、代谢产物、溶剂化物、药学上可接受的盐、共晶或前药，或上述的药物组合物。
本发明涉及的具体实施例化合物中的二三氟乙酸盐，可将其溶解在极性有机溶剂(如甲醇与二氯甲烷的混合溶剂(v/v＝1/90)中，通过加入碱性试剂(如饱和碳酸氢钠溶液或饱和碳酸钠溶液等)调节ph至碱性，搅拌后用有机溶剂(如二氯甲烷、乙酸乙酯等)萃取，将有机相减压浓缩后可得到对应化合物的游离碱形式。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或卤素任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12c、13c和14c，氢的同位素包括氕(h)、氘(d，又称为重氢)、氚(t，又称为超重氢)，氧的同位素包括16o、17o和18o，硫的同位素包括32s、33s、34s和36s，氮的同位素包括14n和15n，氟的同位素19f，氯的同位素包括35cl和37cl，溴的同位素包括79br和81br。
“烷基”是指直链和支链的一价饱和烃基，主链包括1至10个碳原子，优选为1至8个碳原子，进一步优选为1至6个碳原子，更优选为1至4个碳原子的直链与支链基团，最优选1至2个碳原子，烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代，其中r19和r19a各自独立选自h、羟基、氨基、羧基、c1-8烷基、c1-8烷氧基、c2-8烯基、c2-8炔基、3至10元碳环基、4至10元杂环基、3至10元碳环基氧基或4至10元杂环基氧基，k选自0、1、2、3、4或5，j选自0、1或2。本文中出现的烷基、k、j、r19和r19a，其定义如上所述。
“亚烷基”是指直链和支链的二价饱和烃基，包括-(ch2)v-(v为1至10的整数)，亚烷基实施例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基等；所述的亚烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代，当亚烷基中的取代基数量大于等于2个时，取代基可以稠合在一起形成环状结构。本文中出现的亚烷基，其定义如上所述。
“烷氧基”是指o-烷基的一价基团，其中，烷基如本文所定义，烷氧基实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
“烯基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳双键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，烯基实施例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的烯基，其定义如上所述。
“亚烯基”是指二价烯基基团，其中烯基的定义如上所述。
“炔基”是指直链和支链的一价不饱和烃基，其具有至少1个，通常有1、2或3个碳碳三键，主链包括2至10个碳原子，进一步优选2至6个碳原子，更优选在主链上有2至4个碳原子，炔基实施例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的炔基，其定义如上所述。
“亚炔基”是指二价炔基基团，其中炔基的定义如上所述。
“环烷基”是指一价饱和的碳环烃基，通常有3至10个碳原子，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基等。所述的环烷基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的环烷基，其定义如上所述。
“亚环烷基”是指二价环烷基，其中环烷基的定义如上所述。
“芳基”是指具有单环或稠合环的一价芳香族烃基，通常有6至10个碳原子，非限制性实施例包括苯基、萘-1-基或萘-2-基。所述的芳基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的芳基，其定义如上所述。
“亚芳基”是指二价芳基，其中芳基的定义如上所述。
“杂芳基”是指具有单环或两个稠合环并且在环中包含至少1个选自n、o或s的杂原子的一价芳基，通常有5至8元的原子组成，非限制性实施例包括吡咯基、咪唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、异恶唑基、恶唑基、吡啶基或吡嗪基。所述的杂芳基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的杂芳基，其定义如上所述。
“亚杂芳基”是指二价杂芳基，其中杂芳基的定义如上所述。
“碳环基”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或10至15元三环体系，碳环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、苯基、萘基、
“杂环基”是指饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至10元的单环、4至12元双环或10至15元三环体系，且包含1至4个选自n、o或s的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的n、s可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、环氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3h-吲哚基喹嗪基、n-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0、1、2、3、4或5个选自f、cl、br、i、＝o、-ch2f、-chf2、-cf3、-och2f、-ochf2、-ocf3、羟基、-sr19、硝基、氰基、异氰基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、c2-8烯基、c2-8炔基、-(ch2)a-c(＝o)-r19、-(ch2)k-c(＝o)-o-r19、-(ch2)k-c(＝o)-nr19r19a、-(ch2)k-s(＝o)j-r19、-o-c(＝o)-o-r19或-nr19r19a的取代基所取代。本文中出现的杂环基，其定义如上所述。
“β-肾上腺素受体结合基团”是指能够与β-肾上腺素能受体结合的基团；诸如参见综述文章“β-adrenergicreceptorsincomprehensivemedicinalchemistry，1990，b.e.main，p187(pergamonpress)”。上述基团也参见例如wo/2005092841、us/20050215542、wo/2005070872、wo/2006023460、wo/2006051373、wo/2006087315和wo/2006032627。非限制性实施例包括
“氨基保护基”是指用于氨基保护的基团，该基团适用于保护氨基，使氨基不进行化学反应，但是在分子的其它部分完成所需化学反应之后该基团容易除去。在《有机合成中的保护基》(华东理工大学有机化学教研室译，荣国斌校，华东理工大学出版社，2004；原书为protectivegroupsinorganicsynthesis(thirdedition),theodoraw.greenandpeterg.m.wuts著)中氨基的保护一章对氨基保护基做了详细介绍。本申请将《有机合成中的保护基》中第494-653页引用于此作为本申请的一部分。
“氨基保护基”包括但不限于以下基团：苄基、对甲氧基苄基、三苯甲基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、9-芴基甲氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、乙氧羰基、苄氧基羰基、三氟乙酰基、乙酰基或苯甲酰基。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被f取代的烷基”指烷基可以但不必须被f取代，说明包括烷基被f取代的情形和烷基不被f取代的情形。
“药物组合物”表示一种或几种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐与其他组成成分的混合物，其中其它组分包含生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。
“载体”指的是不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。
“赋形剂”指的是加入到药物组合物中以进一步依赖于化合物给药的惰性物质。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和不同类型的淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。
“前药”是指可以在生理条件下或通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物的化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的功能基团来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“有效剂量”指引起组织、系统或受试者生理或医学翻译的化合物的量，此量是所寻求的，包括在受治疗者身上施用时足以预防受治疗的疾患或病症的一种或几种症状发生或使其减轻至某种程度的化合物的量。
“溶剂化物”指本发明化合物或其盐，它们还包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂。当溶剂为水时，则为水合物。
“ic50”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果，旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点，不作为对本案可实施范围的限定。
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或(和)质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。nmr的测定是用(brukeravanceiii400和brukeravance300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)，氘代氯仿(cdcl3)，氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)。
ms的测定用(agilent6120b(esi)和agilent6120b(apci))。
hplc的测定使用安捷伦1260dad高压液相色谱仪(zorbaxsb-c18100×4.6mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
tbs为叔丁基二甲基硅基。
boc为叔丁基氧基羰基。
tfa为三氟乙酸。
hatu为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(cas:148893-10-1)。
中间体1：4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)
4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butylmethanesulfonate
第一步：4-(4-羟基丁基氨基)-3-硝基-苯甲腈(1b)
4-(4-hydroxybutylamino)-3-nitro-benzonitrile
将4-氟-3-硝基苯腈(10g,60.2mmol)溶于四氢呋喃(200ml)中，加入二异丙基乙胺(11.7g,90.3mmol)和4-羟基丁胺(8.05g,90.3mmol)，室温搅拌过夜。反应液浓缩，残渣加水溶解，用乙酸乙酯(150ml×3)萃取，合并有机相，用水(100ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩即得4-(4-羟基丁基氨基)-3-硝基-苯甲腈(1b)粗品(14.2g)，直接用于下一步。
lcmsm/z＝236.0[m+1]+.
第二步：3-氨基-4-(4-羟基丁基氨基)苯甲腈(1c)
3-amino-4-(4-hydroxybutylamino)benzonitrile
将4-(4-羟基丁基氨基)-3-硝基-苯甲腈(1b)(12.0g，51mmol)加入到乙醇(200ml)中，加入10％钯碳(1.5g)，氢气置换三次，室温搅拌4小时。反应液过滤，滤液减压浓缩即得3-氨基-4-(4-羟基丁基氨基)苯甲腈(1c)(10.2g，收率：97.6％)。
lcmsm/z＝206.0[m+1]+
第三步：1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲腈(1d)
1-(4-hydroxybutyl)-benzotriazole-5-carbonitrile
将3-氨基-4-(4-羟基丁基氨基)苯甲腈(1c)(10.0g，42.6mmol)溶于200ml6m盐酸水溶液中，冰水浴下缓慢滴加40ml亚硝酸钠(4.04g,58.5mmol)水溶液。加完后室温搅拌2小时。用二氯甲烷(100ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩即得1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲腈(1d)(9.2g，收率：87.6％)。
lcmsm/z＝217.0[m+1]+
第四步：1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲醛(1e)
1-(4-hydroxybutyl)-benzotriazole-5-carbaldehyde
将1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲腈(1d)(9.0g，41.7mmol)溶于75ml甲酸与25ml水中。加入10g铝-镍合金，升温至90℃搅拌5小时。将反应体系减压浓缩，残渣用2m氢氧化钠水溶液调节ph至9-10，室温下搅拌1小时。用2m盐酸水溶液调节ph至6-7，用乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并有机相，用水(100ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩即得1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲醛(1e)(6.0g，66.7％)。
lcmsm/z＝220.0[m+1]+
第五步：4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)
4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butylmethanesulfonate
将1-(4-羟基丁基)-苯并三氮唑-5-甲醛(1e)(6.0g，27.4mmol)溶于150ml二氯甲烷中，加入二异丙基乙胺(6.2g，48.1mmol)，冰水浴下缓慢滴加mscl(4.4g，38.4mmol)，加完后0度搅拌2小时。加入200ml二氯甲烷，用100ml水洗涤，有机相减压浓缩后，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-2:1)，得4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)(6.0g，收率：74.1％)。
lcmsm/z＝298.0[m+1]+
中间体2：4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)
4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)ethylmethanesulfonate
第一步：4-(4-羟基乙基氨基)-3-硝基苯腈(2b)
4-(4-hydroxyethylamino)-3-nitro-benzonitrile
将原料4-氟-3-硝基苯腈(2a)(10g,60.2mmol)溶解在200毫升四氢呋喃中，依次加入dipea(11.7g,90.5mmol)和乙醇胺(5.52g,90.4mmol)。加完后室温搅拌过夜。反应液浓缩，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取(150ml×3)，水洗，无水硫酸钠干燥，旋干即得粗品4-(4-羟基乙基氨基)-3-硝基苯腈(2b)(12g)，直接用于下一步。
lc-msm/z＝208.0[m+1]+
第二步：3-氨基-4-(4-羟基乙基氨基)苯腈(2c)
3-amino-4-(4-hydroxyethylamino)benzonitrile
将4-(4-羟基乙基氨基)-3-硝基苯腈(2b)(5.0g，24.15mmol)加入到100毫升乙醇中，加入0.75克10％钯碳，氢气置换三次，室温下搅拌4小时。反应液过滤，滤液减压浓缩即得3-氨基-4-(4-羟基乙基氨基)苯腈(2c)(5g，收率：>99％)。
lc-msm/z＝178.0[m+1]+
第三步：1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲腈(2d)
1-(4-hydroxyethyl)-benzotriazole-5-carbonitrile
将3-氨基-4-(4-羟基乙基氨基)苯腈(2c)(10.0g，56.5mmol)溶解于120毫升6n盐酸中，冰水浴下缓慢滴加40ml亚硝酸钠(5.85g,84.7mmol)水溶液。加完后室温搅拌4小时。用二氯甲烷(100ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩即得1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲腈(2d)(6.1g，收率：57.5％)。
lc-msm/z＝189.0[m+1]+
第四步：1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲醛(2e)
1-(4-hydroxyethyl)-benzotriazole-5-carbaldehyde
将1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲腈(2d)(6.1g，32.4mmol)溶于75ml甲酸与25ml水中。加入8g铝-镍合金，升温至90℃搅拌5小时。将反应体系减压浓缩，残渣用2m氢氧化钠水溶液调节ph至9-10，室温下搅拌1小时。用2m盐酸水溶液调节ph至6-7，用乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并有机相，用水(100ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩即得1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲醛(2e)(4.0g，64.5％)。
lcmsm/z＝192.0[m+1]+
第五步：4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)
4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)ethylmethanesulfonate
将1-(4-羟基乙基)-苯并三氮唑-5-甲醛(2e)(4.1g，21.5mmol)溶于150ml二氯甲烷中，加入二异丙基乙胺(5.4g，41.8mmol)，冰水浴下缓慢滴加mscl(3.6g，31.4mmol)，加完后0度搅拌2小时。加入200ml二氯甲烷，用100ml水洗涤，有机相减压浓缩后，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-2:1)，得4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)(5.5g，收率：95.3％)。
lcmsm/z＝298.0[m+1]+
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.16(s,1h),8.74(s,1h),8.07(d,2h),5.18(t,2h),4.74(t,2h),3.09(s,3h).
实施例1：
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙胺基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物1)
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propylamino]spiro[3.3]heptan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[6-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1b)
[6-[tert-butoxycarbonyl(methyl)amino]spiro[3.3]heptan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将叔丁基n-(2-羟基螺环[3.3]庚烷-6-基)-n-甲基氨基甲酸酯(1a)(0.5g，2.07mmol)溶于甲苯(20ml)中，加入氢化钠(0.311g，7.77mmol)，搅拌30min，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(0.66g，2.59mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得到[6-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1b)(0.30g，产率：20％)。
lcmsm/z＝364.1[m-100+1]+
第二步：[6-(甲氨基)螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1c)
[6-(methylamino)spiro[3.3]heptan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将[6-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1b)(0.30g，0.60mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入过量氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃用固体碳酸钾调节ph值至8-9，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[6-(甲氨基)螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1c)(0.16g，产率：70％)。
lcmsm/z＝364.1[m+1]+
第三步：[6-[3-(5-甲酰苯并三唑-1-基)丙基甲基氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1d)
[6-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl-methyl-amino]spiro[3.3]heptan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将[6-(甲氨基)螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1c)(0.16g，0.44mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.19g，0.66mmol)和二异丙基乙胺(0.219g，1.7mmol)，加热至90℃反应7小时。反应结束后，反应液直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[6-[3-(5-甲酰苯并三唑-1-基)丙基甲基氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1d)(0.15g，产率：62％)。
lcmsm/z＝551.1[m+1]+
第四步：[6-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙胺基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物1)
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propylamino]spiro[3.3]heptan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[6-[3-(5-甲酰苯并三唑-1-基)丙基甲基氨基]螺[3.3]庚烷-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(1d)(0.15g,0.27mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.12g,0.54mmol)，再滴入醋酸(0.03g,0.53mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.21(t,2h),7.89(d,1h),7.72(d,1h),7.36(d,2h),7.26(d,1h),7.12–7.11(m,2h),7.01(d,1h),6.97–6.95(m,2h),6.56(d,1h),5.42–5.41(m,1h),5.04–5.00(m,1h),4.86–4.83(m,2h),4.50(s,2h),3.67–3.61(m,1h),3.28–3.25(m,2h),2.94(s,3h),2.59–2.55(m,2h),2.49–2.43(m,4h),2.17–2.16(m,6h).
lcmsm/z＝378.2[m/2+1]+
实施例2：
[2-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物2)
[2-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：7-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3,5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2b)
tert-butyl7-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-2-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将7-羟基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(1.5g，6.26mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.180g，7.52mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(1.75g，6.89mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得7-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3,5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2b)(1.4g，产率：50％)。
第二步：2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2c)
2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将7-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3,5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(2b)(0.8g，1.7mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2c)(0.50g，产率：80％)。
lcmsm/z＝364.1[m+1]+
第三步：[2-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2d)
[2-[2-(5-formylbenzotriazol-1-yl)ethyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2c)(0.1g，0.275mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)(0.074g，0.275mmol)和二异丙基乙胺(0.071g，0.55mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[2-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2d)(0.1g，产率：70％)。
lcmsm/z＝537.1[m+1]+
第二步：[2-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物2)
[2-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[2-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2d)(0.1g,0.186mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.089g,0.373mmol)，再滴入醋酸1滴，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.30–8.18(m,2h),7.90(d,1h),7.73(d,1h),7.36(dd,2h),7.27(d,1h),7.13(dd,2h),7.06–6.92(m,3h),6.58(d,1h),5.51–5.39(m,1h),5.05(t,2h),4.92(s,1h),4.50(s,2h),3.99–3.94(m,6h),3.31–3.26(m,2h),1.86–1.55(m,8h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.84(s,1h).
lcmsm/z＝741.2[m+1]+
实施例3：
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物3)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(3a)
[2-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(2c)(0.1g，0.275mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.077g，0.275mmol)和二异丙基乙胺(0.071g，0.55mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(3a)(0.106g，产率：70％)。
lcmsm/z＝551.2[m+1]+
第二步：[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物3)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(3a)(0.102g,0.186mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.089g,0.373mmol)，再滴入醋酸1滴，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.30–8.12(m,2h),7.88(d,1h),7.70(d,1h),7.36(d,2h),7.27(d,1h),7.13(dd,2h),7.02(d,1h),6.97(dd,2h),6.55(d,1h),5.44(dd,1h),4.93(s,1h),4.85(s,2h),4.50(t,2h),4.15–3.95(m,2h),3.95–3.75(m,2h),3.39–3.32(m,2h),3.29–3.20(m,2h),2.37–2.25(m,2h),1.85–1.57(m,8h).
lcmsm/z＝755.2[m+1]+
实施例4：
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基-甲基-氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物4)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]spiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[7-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4b)
[7-[tert-butoxycarbonyl(methyl)amino]spiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将n-(2-羟基螺[3.5]壬-7-基)-n-甲基-氨基甲酸叔丁酯(4a)(0.5g，1.9mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.075g，1.9mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(0.94g，3.8mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得[7-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4b)(0.40g，产率：44％)
第二步：[7-(甲氨基)螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4c)
[7-(methylamino)spiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将[7-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4b)(0.40g，0.81mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到[7-(甲氨基)螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4c)(0.30g，产率：90％)。
lcmsm/z＝392.3[m+1]+
第三步：[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基-甲基-氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4d)
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl-methyl-amino]spiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将[7-(甲氨基)螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4c)(0.30g，0.77mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.24g，0.84mmol)和二异丙基乙胺(0.20g，1.5mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基-甲基-氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4d)(0.20g，产率：45％)。
lcmsm/z＝579.3[m+1]+
第四步：[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基-甲基-氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物4)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl-methyl-amino]spiro[3.5]nonan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基-甲基-氨基]螺[3.5]壬-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(4d)(0.20g,0.346mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.135g,0.518mmol)，再滴入醋酸(0.031g,0.518mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.22(d,2h),7.91(d,1h),7.75–7.67(m,1h),7.36(dt,2h),7.27(d,1h),7.13(d,2h),7.01(d,1h),6.99-6.95(m,2h),6.56(d,1h),5.43(dd,1h),4.90(s,1h),4.85(t,2h),4.55–4.47(m,2h),3.75–3.64(m,1h),3.26(dd,3h),3.10(d,1h),2.82–2.69(m,3h),2.48(d,2h),2.23(d,2h),1.90(dd,2h),1.71(d,2h),1.67–1.52(m,4h),1.52–1.39(m,2h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.84.
lcmsm/z＝783.3[m+1]+.
实施例5：
[3-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物5)
[3-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(5b)
tert-butyl9-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-3-azaspiro[5.5]undecane-3-carboxylate
将9-羟基-3-氮杂-螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁基酯(1.00g，3.71mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.178g，7.42mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(1.42g，5.57mmol)，升温至115℃反应10小时。反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得到9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(5b)(1.2g，产率：66％)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.27(dt,2h),7.18(dd,2h),6.97(dd,2h),4.98(dt,1h),4.78(s,1h),3.41–3.29(m,4h),1.74(ddd,2h),1.70–1.60(m,2h),1.51–1.41(m,11h),1.36(dd,4h),1.33–1.23(m,2h).
lcmsm/z＝514.2[m+23]+
第二步：3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5c)
3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(5b)(0.60g，1.22mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入过量的氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃用固体碳酸钾调节ph至8-9，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5c)(0.22g，产率：50％)。
lcmsm/z＝392.1[m+1]+
第三步：[3-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5d)
[3-[2-(5-formylbenzotriazol-1-yl)ethyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5c)(0.22g，0.562mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)(0.182g，0.674mmol)和二异丙基乙胺(0.145g，1.12mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[3-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5d)(0.14g，产率：44％)。
lcmsm/z＝565.2[m+1]+
第四步：[3-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物5)
[3-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[3-[2-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5d)(0.14g,0.25mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.17g,0.37mmol)，再滴入醋酸(0.022g,0.37mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.27–8.19(m,2h),7.93(d,1h),7.73(dd,1h),7.37(dd,2h),7.27(d,1h),7.15(dd,2h),7.04–6.95(m,3h),6.57(d,1h),5.44(dd,1h),5.20(t,2h),4.97(dd,1h),4.50(s,2h),3.86(t,2h),3.68–3.43(m,2h),3.31(s,2h),3.29–3.25(m,2h),1.72(ddd,8h),1.49(s,4h).
lcmsm/z＝385.2[m/2+1]+
实施例6：
[3-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物6)
[3-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[3-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(6a)
[3-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(5c)(0.080g，0.20mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.069g，0.25mmol)和二异丙基乙胺(0.053g，0.41mmol)，加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[3-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(6a)(0.10g，产率：85％)。
lcmsm/z＝579.2[m+1]+
第二步：[3-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物6)
[3-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-azaspiro[5.5]undecan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[3-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(6a)(0.10g,0.17mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.12g,0.26mmol)，再滴入醋酸(0.016g,0.26mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.22(d,2h),7.89(d,1h),7.70(d,1h),7.40(ddd,2h),7.27(d,1h),7.19–7.12(m,2h),7.01(d,1h),6.97(dd,2h),6.55(d,1h),5.43(dd,1h),4.96(dd,1h),4.85(t,2h),4.55–4.46(m,2h),3.48–3.37(m,2h),3.30–3.20(m,4h),3.05(t,2h),2.56–2.45(m,2h),1.92(d,1h),1.71(dd,5h),1.55(d,4h),1.46–1.33(m,1h),1.25(d,1h).
lcmsm/z＝783.3[m+1]+
实施例7：
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物7)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：8-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(7b)
tert-butyl8-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-2-azaspiro[4.4]nonane-2-carboxylate
将7-羟基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(7a)(0.5g，2.1mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.099g，4.1mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(0.79g，3.1mmol)，升温至115℃反应10小时。反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得到8-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(7b)(0.90g，产率：94％)。
lcmsm/z＝486.1[m+23]+
第二步：2-氮杂螺[4.4]壬烷-8-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7c)
2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将8-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯(7b)(0.90g，1.90mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入过量的氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃用固体碳酸钾调节ph至8-9，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氮杂螺[4.4]壬烷-8-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7c)(0.40g，产率：57％)。
lcmsm/z＝364.1[m+1]+
第三步：[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7d)
[2-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[4.4]壬烷-8-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7c)(0.18g，0.495mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.168g，0.594mmol)和二异丙基乙胺(0.128g，0.99mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7d)(0.20g，产率：73％)。
lcmsm/z＝551.1[m+1]+
第四步：[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物7)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7d)(0.14g,0.25mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.17g,0.38mmol)，再滴入醋酸(0.022g,0.38mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.22(d,2h),7.90(dd,1h),7.71(dt,1h),7.42–7.21(m,3h),7.15–7.06(m,2h),7.05–6.84(m,3h),6.55(dd,1h),5.43(dd,1h),5.32(s,1h),4.85(d,2h),4.58–4.45(m,2h),3.57(s,2h),3.33(d,2h),3.29–3.23(m,2h),3.22–3.11(m,1h),3.04(d,1h),2.46(dt,2h),2.11(dd,2h),1.82(dd,6h).
lcmsm/z＝755.2[m+1]+
实施例8：
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物8a)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate(isomer1)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物8b)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate(isomer2)
第一步：[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(8b)
[2-[4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[4.4]壬烷-8-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(7c)(0.15g，0.413mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)(0.147g，0.495mmol)和二异丙基乙胺(0.107g，0.825mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(8b)(0.12g，产率：51％)。
lcmsm/z＝565.2[m+1]+
第二步：[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物8a)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate(isomer1)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物8b)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[4.4]nonan-8-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate(isomer2)
将[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[4.4]壬-8-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(8b)(0.12g,0.21mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.12g,0.32mmol)，再滴入醋酸(0.019g,0.32mmol)，加入5克干燥
(化合物8a出峰时间早于化合物8b)
化合物8a:
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.19(d,2h),7.92(d,1h),7.70(d,1h),7.37(s,2h),7.26(d,1h),7.10(s,2h),7.01(d,1h),6.96(s,2h),6.53(d,1h),5.47–5.38(m,1h),5.32(d,1h),4.84(d,2h),4.50(s,2h),3.63(s,1h),3.25(d,2h),3.15(dd,4h),2.74(dd,1h),2.21–2.08(m,4h),1.99(dd,2h),1.87(dd,3h),1.78(d,1h),1.70(s,2h).
lcmsm/z＝385.2[m/2+1]+
化合物8b:
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.21(d,2h),7.90(d,1h),7.70(dd,1h),7.37(td,2h),7.27(d,1h),7.15–7.09(m,2h),7.01(d,1h),6.98(dt,2h),6.54(d,1h),5.43(dd,1h),5.32(s,1h),4.79(s,2h),4.51(s,2h),3.53(dd,2h),3.29–3.18(m,4h),3.12(dd,1h),3.08–2.96(m,1h),2.17–1.99(m,4h),1.90–1.69(m,8h).
lcmsm/z＝385.2[m/2+1]+
实施例9：
[8-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物9)
[8-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-8-氮杂螺[3.6]癸烷-8-甲酸叔丁酯(9b)
tert-butyl2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-8-azaspiro[3.6]decane-8-carboxylate
将2-羟基-8-氮杂螺[3.6]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.0g，3.92mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.188g，7.83mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(1.5g，5.87mmol)，升温至115℃反应10小时。反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v:v)＝1:100-1:20)，得到2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-8-氮杂螺[3.6]癸烷-8-甲酸叔丁酯(9b)(1.7g，产率：90.9％)。
lcmsm/z＝500.1[m+23]+
第二步：8-氮杂螺[3.6]癸-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9c)
8-azaspiro[3.6]decan-2-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-8-氮杂螺[3.6]癸烷-8-甲酸叔丁酯(9b)(0.90g，1.90mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入过量的氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃用固体碳酸钾调节ph至8-9，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到8-氮杂螺[3.6]癸-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9c)(0.40g，产率：57％)。
lcmsm/z＝378.1[m+1]+
第三步：[8-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9d)
[8-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将8-氮杂螺[3.6]癸-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9c)(0.150g，0.397mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.135g，0.477mmol)和二异丙基乙胺(0.103g，0.795mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[8-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9d)(0.10g，产率：45％)。
lcmsm/z＝565.2[m+1]+
第四步：[8-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物9)
[8-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[8-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9d)(0.10g,0.18mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.069g,0.27mmol)，再滴入醋酸(0.016g,0.27mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.21(d,2h),7.89(d,1h),7.70(d,1h),7.37(d,2h),7.27(d,1h),7.16–7.09(m,2h),7.01(d,1h),6.97(ddd,2h),6.55(d,1h),5.43(dd,1h),5.11(dd,1h),4.84(d,2h),4.50(s,2h),3.48(s,2h),3.26(dd,4h),3.13(s,2h),2.49(s,2h),2.37(s,2h),2.02–1.66(m,8h).
lcmsm/z＝769.2[m+1]+
实施例10：
[8-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物10)
[8-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[8-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(10a)
[8-[4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将8-氮杂螺[3.6]癸-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(9c)(0.20g，0.53mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)(0.19g，0.64mmol)和二异丙基乙胺(0.14g，1.1mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得到[8-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(10a)(0.12g，产率：39％)。
lcmsm/z＝579.2[m+1]+
第二步：[8-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物10)
[8-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-8-azaspiro[3.6]decan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[8-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-8-氮杂螺[3.6]癸-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(10a)(0.12g,0.21mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.081g,0.31mmol)，再滴入醋酸(0.018g,0.31mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.27–8.18(m,2h),7.90(d,1h),7.71(d,1h),7.37(ddd,2h),7.27(d,1h),7.15–7.09(m,2h),7.01(d,1h),6.97(ddd,2h),6.55(d,1h),5.44(dd,1h),5.17–5.05(m,1h),4.81–4.75(m,2h),4.51(s,2h),3.50–3.32(m,2h),3.26(dd,2h),3.22–3.00(m,4h),2.44–2.29(m,2h),2.13–2.03(m,2h),2.04–1.84(m,4h),1.78(dt,6h).
lcmsm/z＝783.3[m+1]+
实施例11：
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物11)
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(11b)
tert-butyl2-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-6-azaspiro[3.4]octane-6-carboxylate
将2-羟基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(1.0g，4.40mmol)溶于甲苯(60ml)中，加入氢化钠(0.11g，4.40mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(1.75g，6.89mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(11b)(0.65g，产率：33％)。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.29(dd,2h),7.17(dd,2h),6.98(dd,2h),5.21–5.10(m,1h),4.64(s,1h),3.41–3.21(m,4h),2.52–2.38(m,2h),2.20–2.05(m,2h),1.83(dt,2h),1.45(s,9h).
第二步：6-氮杂螺[3.4]辛-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11c)
6-azaspiro[3.4]octan-2-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(11b)(0.65g，1.4mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到6-氮杂螺[3.4]辛-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11c)(0.45g，产率：90％)。
lcmsm/z＝350.3[m+1]+
第三步：[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11d)
[6-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将6-氮杂螺[3.4]辛-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11c)(0.22g，0.63mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.20g，0.69mmol)和二异丙基乙胺(0.15g，1.3mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11d)(0.11g，产率：33％)。
lcmsm/z＝537.3[m+1]+
第四步：[6-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物11)
[6-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11d)(0.11g,0.205mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.080g,0.307mmol)，再滴入醋酸1滴，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.31–8.16(m,2h),7.89(dd,1h),7.71(d,1h),7.36(dd,2h),7.27(d,1h),7.13(dd,2h),7.06–6.91(m,3h),6.55(d,1h),5.45(d,1h),5.20–5.04(m,1h),4.85(d,2h),4.52(d,2h),3.66(s,2h),3.35(s,2h),3.27(d,2h),3.15(s,2h),2.69–2.37(m,4h),2.19(dt,4h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.77.
lcmsm/z＝741.2[m+1]+
实施例12：
[6-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物12)
[6-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(12a)
[6-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)ethyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将6-氮杂螺[3.4]辛-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11c)(0.40g，1.10mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)乙基甲磺酸酯(中间体2)(0.36g，1.3mmol)和二异丙基乙胺(0.30g，2.3mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(12a)(0.20g，产率：33％)。
lcmsm/z＝523.3[m+1]+
第二步：[6-[2-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]乙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物12)
[6-[2-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]ethyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[6-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)乙基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(12a)(0.20g,0.383mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.149g,0.574mmol)，再滴入醋酸1滴，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.29–8.20(m,2h),7.92(d,1h),7.77–7.71(m,1h),7.37(dd,2h),7.27(d,1h),7.13(dd,2h),7.04–6.95(m,3h),6.57(d,1h),5.45(dd,1h),5.19–5.07(m,3h),4.55–4.46(m,2h),3.92(dd,2h),3.75–3.36(m,4h),3.27(dd,2h),2.57(s,2h),2.34–2.16(m,4h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.84(s,1h).
lcmsm/z＝364.2[m/2+1]+
实施例13：
[6-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物13)
[6-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[6-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(13a)
[6-[4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将6-氮杂螺[3.4]辛-2-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(11c)(0.40g，1.10mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)(0.37g，1.30mmol)和二异丙基乙胺(0.30g，1.3mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[6-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(13a)(0.36g，产率：57％)。
lcmsm/z＝551.3[m+1]+
第二步：[6-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物13)
[6-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-6-azaspiro[3.4]octan-2-yl]2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[6-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-6-氮杂螺[3.4]辛-2-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(13a)(0.36g,0.654mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.254g,0.981mmol)，再滴入醋酸(0.058g,0.981mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.27–8.15(m,2h),7.90(d,1h),7.70(d,1h),7.41–7.34(m,2h),7.27(d,1h),7.13(td,2h),7.03-6.95(m,3h),6.54(d,1h),5.43(dd,1h),5.16–5.05(m,1h),4.83(s,2h),4.51(s,2h),3.76–3.50(m,2h),3.25(dd,4h),3.16–3.02(m,2h),2.65–2.47(m,2h),2.24(dd,2h),2.19–2.00(m,4h),1.84–1.68(m,2h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.92.
lcmsm/z＝755.3[m+1]+
实施例14：
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸(化合物14)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：6-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(14b)
tert-butyl6-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
将6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(14a)(1.5g，7.03mmol)溶于甲苯(100ml)中，加入氢化钠(0.28g，7.03mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(2.68g，10.5mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得6-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(14b)(1.6g，产率：52％)。
第二步：2-氮杂螺[3.3]庚-6-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14c)
2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将6-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(14b)(1.4g，3.2mmol)溶于1,4-二氧六环(15ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2-氮杂螺[3.3]庚-6-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14c)(0.80g，产率：74％)。
lcmsm/z＝336.3[m+1]+
第三步：[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14d)
[2-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[3.3]庚-6-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14c)(0.40g，1.20mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.44g，1.6mmol)和二异丙基乙胺(0.31g，2.4mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14d)(0.15g，产率：24％)。
lcmsm/z＝523.3[m+1]+
第四步：[2-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸(化合物14)
[2-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[2-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14d)(0.15g,0.287mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.112g,0.431mmol)，再滴入醋酸(0.026g,0.431mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.20(t,2h),7.88(d,1h),7.69(d,1h),7.37(dd,2h),7.27(d,1h),7.12(dd,2h),7.04–6.94(m,3h),6.54(d,1h),5.41(d,1h),5.06–4.99(m,1h),4.83(s,2h),4.50(s,2h),4.35–4.21(m,1h),4.12(s,3h),3.26(d,4h),2.77(s,2h),2.32(d,4h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.82.
lcmsm/z＝727.2[m+1]+
实施例15：
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物15)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(15a)
[2-[4-(5-formylbenzotriazol-1-yl)butyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将2-氮杂螺[3.3]庚-6-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(14c)(0.40g，1.20mmol)溶解在20ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丁基甲磺酸酯(中间体1)(0.46g，1.6mmol)和二异丙基乙胺(0.31g，2.4mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(15a)(0.12g，产率：19％)。
lcmsm/z＝537.3[m+1]+
第二步：[2-[4-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丁基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物15)
[2-[4-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]butyl]-2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[2-[4-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丁基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(15a)(0.12g,0.224mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.087g,0.335mmol)，再滴入醋酸(0.020g,0.335mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.18(d,2h),7.89(d,1h),7.69(dd,1h),7.37(dd,2h),7.27(d,1h),7.12(dd,2h),7.01(d,1h),6.97(dd,2h),6.53(d,1h),5.41(dd,1h),5.02(dt,1h),4.78(s,2h),4.50(s,2h),4.24(s,1h),4.06(s,2h),3.98(s,1h),3.28–3.23(m,2h),3.23–3.17(m,2h),2.75(d,2h),2.35(s,2h),2.12–2.04(m,2h),1.58(dt,2h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.82.
lcmsm/z＝741.2[m+1]+
实施例16：
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物16)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-a)
tert-butyl9-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonane-7-carboxylate(isomer1)
9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-b)
tert-butyl9-[2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetyl]oxy-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonane-7-carboxylate(isomer2)
将9-羟基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16a)(1.43g，10.0mmol)溶于甲苯(120ml)中，加入氢化钠(4.0g，10.0mmol)，搅拌30分钟，加入2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸甲酯(2.80g，11.0mmol)，升温至115℃反应10小时。将反应冷却至室温，加10ml水淬灭反应，用乙酸乙酯(80ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:100-1:20)，得9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-a)(1.10g，产率：23％)和9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-b)(0.8g，产率：17％)。
16b-a：(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1,rf值：0.3)
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.30(d,2h),7.21(s,2h),7.03–6.95(m,2h),5.11(t,1h),4.69(s,1h),4.55(d,1h),4.35(d,1h),3.81(d,1h),3.77–3.64(m,3h),3.19(d,1h),3.07(d,1h),1.77(d,2h),1.45(s,9h).
16b-b：(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1,rf值：0.2)
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.30(dd,2h),7.20(d,2h),6.99(dd,2h),5.18(t,1h),4.69(s,1h),4.19(d,1h),4.12(d,1h),4.03(t,2h),3.73(t,2h),3.05(d,1h),2.97(d,1h),1.85(d,2h),1.45(s,9h).
第二步：3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16c)
3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-a)(1.10g，2.4mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16c)(0.35g，产率：41％)。
lcmsm/z＝366.3[m+1]+
第三步：[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16d)
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16c)(0.30g，0.82mmol)溶解在10ml乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.26g，0.90mmol)和二异丙基乙胺(0.32g，2.5mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16d)(0.20g，产率：43％)。
lcmsm/z＝553.3[m+1]+
第四步：[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物16)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(16d)(0.20g,0.362mmol)溶于8ml二甲基亚砜和2ml异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.141g,0.543mmol)，再滴入醋酸(0.032g,0.543mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.25–8.11(m,2h),7.88(d,1h),7.70(d,1h),7.41(d,2h),7.27(d,1h),7.19(d,2h),7.01(dd,3h),6.53(d,1h),5.44(dd,1h),5.27(s,1h),4.85(d,2h),4.55–4.45(m,2h),3.89(t,4h),3.71(d,2h),3.47(d,2h),3.25(dd,4h),2.56(dd,2h),2.18(s,2h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.73.
lcmsm/z＝757.3[m+1]+
实施例17：
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物17)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
第一步：3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17a)
3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将9-[2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酰基]氧基-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(16b-b)(0.90g，1.9mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)中，通入氯化氢气体，室温反应2小时。加入水(20ml)，在0℃下用固体碳酸钾调节ph至8-9，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17a)(0.71g，产率：>99％)。
lcmsm/z＝366.3[m+1]+
第三步：[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17b)
[7-[3-(5-formylbenzotriazol-1-yl)propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetate
将3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17a)(0.40g，1.0mmol)溶解在10毫升乙腈中，加入4-(5-甲酰基苯并三氮唑-1-基)丙基甲磺酸酯(合成方法见wo2017114377)(0.31g，1.10mmol)和二异丙基乙胺(0.26g，2.0mmol)，加完后加热至90℃反应7小时。反应结束后，直接减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝1:0-20:1)，得[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17b)(0.40g，产率：73％)。
lcmsm/z＝553.3[m+1]+
第四步：[7-[3-[5-[[[(2r)-2-羟基-2-(8-羟基-2-氧代-1h-喹啉-5-基)乙基]氨基]甲基]苯并三唑-1-基]丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯二三氟乙酸盐(化合物17)
[7-[3-[5-[[[(2r)-2-hydroxy-2-(8-hydroxy-2-oxo-1h-quinolin-5-yl)ethyl]amino]methyl]benzotriazol-1-yl]propyl]-3-oxa-7-azabicyclo[3.3.1]nonan-9-yl]-2-hydroxy-2,2-bis(2-thienyl)acetateditrifluoroacetate
将[7-[3-(5-甲酰基苯并三唑-1-基)丙基]-3-氧杂-7-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-2-羟基-2,2-双(2-噻吩基)乙酸酯(17b)(0.20g,0.362mmol)溶于8毫升二甲基亚砜和2毫升异丙醇的混合溶剂中，加入(r)-5-(2-氨基-1-羟乙基)-8-羟基喹啉-2-(1h)-酮氢氟酸盐(0.141g,0.543mmol)，再滴入醋酸(0.032g,0.543mmol)，加入5克干燥
1hnmr(400mhz,cd3od)δ8.23(s,1h),8.18(d,1h),7.91(d,1h),7.73(d,1h),7.33–7.28(m,2h),7.25(d,1h),7.15(dd,2h),7.01(d,1h),6.93–6.87(m,2h),6.54(d,1h),5.41(d,1h),5.27(d,1h),4.85(t,2h),4.52(d,2h),4.19(d,2h),3.85(d,2h),3.60(d,2h),3.29–3.20(m,2h),3.04–2.92(m,2h),2.79(d,2h),2.43(s,2h),2.30(s,2h).
19fnmr(376mhz,cd3od)δ-74.32.
lcmsm/z＝757.3[m+1]+
生物测试例
测试例1：对人毒蕈碱m3受体的抑制活性
稳定表达人毒蕈碱受体3(hm3)和apo-aequorin的cho细胞(perkinelmer，es-212-af)培养于含10％胎牛血清(fbs)(gibico10099-141)，400μg/mlg418(sigmag5013)和250μg/mlzeocin(invivogenant-zn-5p)的ham’sf12培养基(invitrogen12500-062)中，在37℃，5％co2条件下培养，达到90－100％融合。以pbs/5mmedta冲洗分离细胞，离心收集，以含0.1％bsa(bovogenbsas100)无酚红ham’sf12培养基(invitrogen11039-021)重悬细胞并计数，调整细胞浓度至1x106cells/ml。将15ml细胞悬液加入50ml离心管，加入coelenterazine-h(promegas2011)至终浓度为5μm。用锡纸包裹避光，于旋转摇床20℃下孵育4小时。再以0.1％bsa/无酚红ham’sf12培养基稀释细胞至终浓度为5.0×105cells/ml，将细胞置于旋转摇床上低速转动，室温下孵育至少1小时。实施例化合物用dmso配制为10mm母液，0.1％bsa/无酚红ham’sf12培养基梯度稀释(log(m):-7,-8,-9,-10,-11)，加入96孔板，每孔50μl。每孔再加入50μl细胞悬液(25000细胞/孔)，室温孵育15分钟。将96孔板放入酶标仪(perkinelmer，envision)，以酶标仪加样器每孔加入50μl氯化乙酰胆碱(sigmaa6625)溶液，其浓度为112.92nm(hm3)，记录发光20秒，使用origin7.5计算和分析ic50。本发明化合物人毒蕈碱受体的抑制活性通过以上的实验进行测定，测得的ic50值见下表1。
表1测试化合物对人毒蕈碱m3受体的抑制活性结果
结论：本发明化合物对人毒蕈碱m3受体有显著抑制活性。
测试例2：对人肾上腺素能β2受体的激动活性
实施例化合物对人肾上腺素能受体的激动活性通过lanceultracampassay测定。
稳定表达人肾上腺素能受体(hβ2)的cho细胞(perkinelmer，es-034-cf)培养于含10％胎牛血清(fbs)(gibico10099-141)和250μg/mlzeocin(invivogenant-zn-5p)的mem-alpha培养基(invitrogen12561-056)，在37℃，5％co2条件下培养，达到90-100％融合后用lanceultracampassay试剂盒(perkinelmertrf0263)检测实施例对camp的激动作用。以pbs/5mmedta分离细胞，离心收集，用stimulationbuffer(1xhbss,5mmhepes,0.5mmibmx,0.1％bsa,ph7.4)重悬细胞，调整细胞浓度至6×105cells/ml。实施例化合物用dmso配制为10mm母液，以stimulationbuffer梯度稀释后以每孔5μl加入384孔板。每孔再加入5μl细胞悬液(3000细胞/孔)，室温孵育30分钟后，每孔加入5μl4xeu-camptracer工作溶液，然后每孔加入5μl4xulight-anti-camp工作溶液，并在室温下孵育1小时。384孔板用酶标仪(perkinelmer，envision)检测tr-fret，使用origin7.5计算和分析ec50。本发明化合物对人肾上腺素能受体的激动活性通过以上的实验进行测定，测得的ec50值见表2：
表2测试化合物对人肾上腺素能β2受体的激动活性结果
结论：本发明化合物对β2肾上腺素能受体有显著激动活性。