1.一种原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:将ppfbfp荧光蛋白基因转入地杆菌。
2.根据权利要求1所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:所述ppfbfp荧光蛋白基因的核苷酸序列如seqidno:01所示。
3.根据权利要求1所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:所述地杆菌为geobactersulfurreducens菌。
4.根据权利要求3所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:包括以下步骤:
s1,采用质粒puc19构建含有ppfbfp荧光蛋白基因的质粒puc-ppfbfp;
s2,将步骤s1构建的质粒puc-ppfbfp转入geobactersulfurreducens菌。
5.根据权利要求4所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:所述质粒puc-ppfbfp在构建时插入ompj的强启动子。
6.根据权利要求4所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:所述质粒puc-ppfbfp在构建时还插入庆大霉素抗性基因。
7.根据权利要求4所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:所述ppfbfp荧光蛋白基因插入质粒puc19的位点gsu0808与gsu0807之间。
8.根据权利要求4所述的原位荧光标记地杆菌的方法,其特征在于:步骤s2具体为:
a,使用限制性内切酶scai单酶切质粒puc-ppfbfpfp使其线性化,并将线性化质粒进行浓缩;
b,在厌氧条件下,将培养至对数期的geobactersulfurreducenspca4℃预冷后,离心并收集菌体,并用4℃预冷的电转buffer洗涤菌体两次,制备geobactersulfurreducenspca感受态;
c,取浓缩后的线性化质粒puc-ppfbfp加入到geobactersulfurreducenspca感受态细胞悬浮液中,混匀后移入预冷的电击杯底部,进行瞬时电击,促进质粒转入感受态细胞中;
d,用nbaf培养基悬浮转化后的geobactersulfurreducenspca电感受态细胞进行培养,取不同浓度的菌液涂布含有庆大霉素的nbaf琼脂平板,并将其置于厌氧培养箱中培养,挑取平板上的单菌落接种到nbaf培养基中,待菌株增殖生长后进行pcr扩增验证。
9.一种质粒puc-ppfbfp的构建方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)提取geobactersulfurreducenspca基因组dna,并以geobactersulfurreducenspca基因组dna为模板,以引物对gsu0808f/gsu0808r、pompjf/pompjr、gsu0807f/gsu0807r,利用pcr扩增技术分别扩增gsu0808、pompj及gsu0807的核苷酸序列;采用质粒pcm351、引物对gentfor/gentrev,利用pcr技术扩增庆大霉素抗性基因gent;
(2)将扩增的gsu0808、pompj、gsu0807核苷酸序列及基因gent进行纯化;
(3)将纯化的gsu0808、pompj、gsu0807核苷酸序列及基因gent与线性化的puc19质粒载体进行infusion构建质粒puc-ppfbfp;
(4)将重组质粒puc-ppfbfp转入e.colidh5α感受态细胞进行培养,挑取单菌落并进行测序验证。
10.一种根据权利要求9所述的方法构建的质粒puc-ppfbfp。