通过动态调控ATP促进谷胱甘肽合成的重组质粒、工程菌及其应用的制作方法

文档序号:21090985发布日期:2020-06-12 17:13阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组质粒,其特征在于:由核糖开关ydao模块、提高胞内atp水平的基因、gshf基因片段和质粒载体重组构建而成;所述提高胞内atp水平的基因连接在核糖开关ydao模块的下游。

2.根据权利要求1所述的一种重组质粒,其特征在于:所述核糖开关ydao模块来源于枯草芽孢杆菌。

3.根据权利要求1所述的一种重组质粒,其特征在于:所述提高胞内atp水平的基因为来源于谷氨酸棒状杆菌的ppk基因。

4.根据权利要求1所述的一种重组质粒,其特征在于:所述质粒载体为prsfduet-1质粒。

5.一种工程菌,是将权利要求1-4任意一种所述的重组质粒转入谷胱甘肽产生菌中而得到的。

6.根据权利要求5所述的一种工程菌,所述谷胱甘肽产生菌为大肠杆菌bl21(de3)。

7.利用权利要求6所述的工程菌发酵生产谷胱甘肽的方法,其特征在于:将所述工程菌在lb培养基中过夜培养,然后接种到发酵培养基中发酵;当菌体生物量至od600为0.4-0.6时,加入iptg诱导,并加入终浓度为15-50mmol/l的三聚磷酸钠,继续培养至发酵结束。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述发酵培养基为m9培养基;所述m9培养基的配方为:每1l体积中含有葡萄糖20g、na2hpo4·2h2o7.52g、kh2po43g、nacl0.5g、nh4cl0.5g、mgso4·2h2o0.25g、cacl2·2h2o0.15g、生物素1g、硫胺素1g和100×微量元素溶液10ml;

所述100×微量元素溶液的配方为:每1l体积中含有edta5g、fecl3·6h2o0.83g、zncl284mg、cucl2·2h2o13mg、cocl2·2h2o10mg、h3bo310mg和mncl2·4h2o1.6mg。

9.根据权利要求5所述的工程菌在通过动态调控atp促进谷胱甘肽合成方面的应用。


技术总结
本发明涉及通过动态调控ATP促进谷胱甘肽合成的重组质粒、工程菌及其应用,属于发酵技术领域,本发明利用基因重组技术,首先将核糖开关ydaO模块、ppk基因、gshf基因片段和质粒载体重组构建重组质粒,然后将重组质粒转入到大肠杆菌感受态中,在大肠杆菌中构建基于核糖开关ydaO模块和聚磷酸激酶(ppk)的ATP调控方法,可实现控制ATP浓度在一定水平,从而利于胞内ATP依赖性产物的合成。

技术研发人员:陈雅维;柴骏;廖源;孔维臻;王书涵
受保护的技术使用者:河南科技大学
技术研发日:2020.03.17
技术公布日:2020.06.12
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