一种筛选抗蚜Cry蛋白的方法与流程

文档序号:21789743发布日期:2020-08-07 20:43阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种筛选抗蚜cry蛋白的方法,其特征在于,包括:

将反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和苏云金杆菌cry蛋白混合、静置反应,得到混合酶液,将所述混合酶液与底物混合、反应后,得到检测液,检测所述检测液在405nm下的吸光度值,得到检测值;

将反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和cathepsinb酶活抑制剂混合、静置反应,得到混合抑制剂酶液,将所述混合抑制剂酶液与底物混合、反应后,得到抑制剂对照液,检测所述抑制剂对照液在405nm下的吸光度值,得到抑制检测值;

将反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和cathepsinb酶活激活剂混合、静置反应,得到混合激活剂酶液,将所述混合激活剂酶液与底物混合、反应后,得到激活剂对照液,检测所述激活剂对照液在405nm下的吸光度值,得到激活检测值;

当所述检测值大于等于激活检测值,或所述检测值小于等于抑制检测值时,所述苏云金杆菌cry蛋白为抗蚜cry蛋白;

所述底物包括z-arg-arg-pna和/或bsa;

所述反应缓冲液的组分包括乙酸钠、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和苏云金杆菌cry蛋白体积比为9:4:1;

所述反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和cathepsinb酶活抑制剂体积比为9:4:1;

所述反应缓冲液、蚜虫cathepsinb蛋白酶和cathepsinb酶活激活剂体积比为9:4:1。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述将混合酶液与底物混合后,得到混合液,所述混合液中底物的浓度为2μg/ml;

所述将混合抑制剂酶液与底物混合后,得到抑制剂混合液,所述抑制剂混合液中底物的浓度为2μg/ml;

所述将混合激活剂酶液与底物混合后,得到激活剂混合液,所述激活剂混合液中底物的浓度为2μg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述反应缓冲液中乙酸钠的浓度为50mm/l;

所述反应缓冲液中二硫苏糖醇的浓度为2.5mm/l;

所述反应缓冲液中乙二胺四乙酸的浓度2.5mm/l。

5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述反应缓冲液的ph值为5.5。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述cathepsinb酶活激活剂包括谷胱甘肽。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述cathepsinb酶活抑制剂包括e-64。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述检测的温度为37℃。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述静置反应的温度为37℃;所述静置反应的时间为5min;所述反应的时间为30min。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述蚜虫cathepsinb蛋白酶的氨基酸序列的登录号为q64g01。


技术总结
本发明提供了一种筛选抗蚜Cry蛋白的方法,包括将反应缓冲液、蚜虫Cathepsin B蛋白酶和苏云金杆菌Cry蛋白混合静置反应,得到混合酶液,将所述混合酶液与底物混合反应后,得到检测液,检测所述检测液在405nm下的吸光度值,得到检测值;以Cathepsin B酶活抑制剂和激活剂为对照,得到抑制检测值和激活检测值;当所述检测值大于等于激活检测值,或所述检测值小于等于抑制检测值时,所述苏云金杆菌Cry蛋白为抗蚜Cry蛋白;所述底物包括Z‑Arg‑Arg‑pNA和/或BSA;所述反应缓冲液包括乙酸钠、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸。本发明提供的筛选方法检测结果精准,能够大批量测定,进而实现大规模筛选。

技术研发人员:林毅;赵笑迪;张斌武
受保护的技术使用者:华侨大学
技术研发日:2020.04.21
技术公布日:2020.08.07
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1