本发明属于中药提取分离纯化技术领域，涉及一种中药枳实中单一有效成分的精制方法，尤其涉及一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法。
背景技术：
枳实是芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，具有破气消积、化痰散痞的作用，用于治疗积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、结胸、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症，主要含挥发油、生物碱(辛弗林、n-甲基酪胺)、黄酮类化合物、维生素c及维生素d等成分。
枳实中的黄酮化合物种类与含量非常丰富，其活性与内含化合物的黄酮种类和含量都有着直接关系。已有研究发现枳实中多羟基黄酮和黄烷酮具有很好的抗氧化作用，能够有效清除自由基，降低慢性疾病的发病率，并且具有很强的抗炎、抗癌活性。而多甲氧基黄酮的生物活性在最近几年开始引起重视。多甲氧基黄酮具有抗炎、防癌抗癌、降低胆固醇和防止胆固醇氧化等生物学活性。最近研究表明，多甲氧基混合物的衍生物，5-去甲基多甲氧基化合物不但有更强的抗炎抗癌活性，还具有很好的抗癌作用。目前研究较多的是枳实中3个主要多甲氧基黄酮化合物，即陈皮素、川陈皮素和3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮，以及它们的5-去甲基衍生物，即5-去甲基陈皮素、5-去甲基川陈皮素和5-羟基-3,6,7,8,3’,4’-六甲氧基黄酮。目前分离提取黄酮类化合物的方法主要有超声提取法、大孔吸附树脂法、硅胶柱层析法、超临界流体萃取法、高速逆流色谱法。
在目前的工业生产中，对于单一的川陈皮素的生产，含量要求较高，大多数厂家的工艺大致为乙醇提取、树脂分离、乙醇再精制的方法进行加工生产，但一般提取物样品多为混合物，还需要再次进行多种有机溶剂的多次萃取才能实现。因此，生产过程很复杂，成本高，耗时较长，要实现大批量生产并得到市场认可是很艰巨的任务。
技术实现要素：
本发明为了解决上述技术问题，提供了一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，可以实现对其单一成分进行提取、分离、纯化并达到精制的效果。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎后的枳实原料，然后向粉碎后的枳实原料中加入浓度为30～50％的提取溶剂，并于80～90℃的热回流条件下，对粉碎后的枳实原料进行回流提取2～4次，每次2～4h，得到提取液，将多次的提取液合并，回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；
(2)在枳实黄酮混合物粗浸膏中加入10～15倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取2～4h，得到水相层及有机相层；分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；
(3)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。
步骤(1)中，所述的提取溶剂为三氯甲烷。
步骤(1)中，所述的粉碎枳实的粒度为20～40目
步骤(1)中，所述的分离提取原料和提取液的方法是使用高速离心机。
步骤(1)中，所述的枳实黄酮混合物粗浸膏是采用旋转蒸发仪进行制备的。
步骤(2)中，所述的混合有机溶剂为丙酮：石油醚：水＝5～7:4～6:4～6。
步骤(2)中，所述的水为蒸馏水。
步骤(2)中，所述的萃取是在室温下。
步骤(3)中，所述的萃取方法是，将混合有机溶剂进行3～5次萃取。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
1.本发明利用川陈皮素的生理生化特性，通过使用多溶剂提取和多次萃取的方法，得到了纯度较高，含量符合预期的产品。
2.本发明无需进行大孔树脂实验，只需要通过调整、筛选最佳混合溶剂的比例即可。
3.本发明中的溶剂可以回收再利用，工艺简单，成本可控，非常适合工业化大生产。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎后的枳实原料，然后向粉碎后的枳实原料中加入浓度为30～50％的提取溶剂，并于80～90℃的热回流条件下，对粉碎后的枳实原料进行回流提取2～4次，每次2～4h，得到提取液，将多次的提取液合并，回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；其中，所述的提取溶剂为三氯甲烷；所述的粉碎枳实的粒度为20～40目；所述的分离提取原料和提取液的方法是使用高速离心机；所述的枳实黄酮混合物粗浸膏是采用旋转蒸发仪进行制备的。
(2)在枳实黄酮混合物粗浸膏中加入10～15倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取2～4h，得到水相层及有机相层；分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；其中，所述的混合有机溶剂为丙酮：石油醚：水＝5～7:4～6:4～6；所述的萃取是在室温下；所述的水为蒸馏水。
(3)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。其中，所述的萃取方法是，将混合有机溶剂进行3～5次萃取。
实施例2：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎后的枳实原料，然后向粉碎后的枳实原料中加入浓度为50％的提取溶剂，并于80℃的热回流条件下，对粉碎后的枳实原料进行回流提取2次，每次2h，得到提取液，将多次的提取液合并，回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；其中，所述的提取溶剂为三氯甲烷；所述的粉碎枳实的粒度为20目；所述的分离提取原料和提取液的方法是使用高速离心机；所述的枳实黄酮混合物粗浸膏是采用旋转蒸发仪进行制备的。
(2)在枳实黄酮混合物粗浸膏中加入15倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取2h，得到水相层及有机相层；分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；其中，所述的混合有机溶剂为丙酮：石油醚：水＝5:4:4；所述的水为蒸馏水；所述的萃取是在室温下。
(3)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。其中，所述的萃取方法是，将混合有机溶剂进行3次萃取。
实施例3：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎原料，然后加入浓度为40％的提取溶剂，并于85℃的热回流条件下，对粉碎原料进行回流提取3次，每次3h，得到提取液；其中，所述的提取溶剂为三氯甲烷；所述的粉碎枳实的粒度为30目；所述的分离提取原料和提取液的方法是使用高速离心机。
(2)得到的二次提取液进行合并；
(3)回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；其中，所述的混合液粗浸膏是采用旋转蒸发仪进行制备的。
(4)在粗浸膏中加入13倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取3h，得到水相层及有机相层；其中，所述的混合有机溶剂为丙酮：石油醚：水＝6:5:5；所述的水为蒸馏水；所述的萃取是在室温下。
(5)分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；
(6)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。其中，所述的萃取方法是，将混合有机溶剂进行3次萃取。
实施例4：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎原料，然后加入浓度为30％的提取溶剂，并于90℃的热回流条件下，对粉碎原料进行回流提取4次，每次4h，得到提取液；其中，所述的提取溶剂为三氯甲烷；所述的粉碎枳实的粒度为40目；所述的分离提取原料和提取液的方法是使用高速离心机。
(2)得到的二次提取液进行合并；
(3)回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；其中，所述的混合液粗浸膏是采用旋转蒸发仪进行制备的。
(4)在枳实黄酮混合物粗浸膏中加入10倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取4h，得到水相层及有机相层；其中，所述的混合有机溶剂为丙酮：石油醚：水＝7:6:6；所述的水为蒸馏水；所述的萃取是在室温下。
(5)分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；
(6)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。其中，所述的萃取方法是，将混合有机溶剂进行3次萃取。
实施例5：
一种枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，包括以下步骤：
(1)将枳实粉碎，得到粉碎原料，然后加入浓度为30～50％的提取溶剂，并于80～90℃的热回流条件下，对粉碎原料进行回流提取2次，每次2h，得到提取液；
(2)得到的二次提取液进行合并；
(3)回收提取液，得到质量为粉碎原料质量0.2倍的枳实黄酮混合物粗浸膏；
(4)在粗浸膏中加入10～15倍体积的混合有机溶剂，并倒入分液漏斗中，摇匀、萃取2h，得到水相层及有机相层；
(5)分离出水相层及有机相层，并将有机相层液回收，得到质量为粉碎原料质量0.1倍的浸膏；
(6)在最后，将浸膏进行多次萃取、再次过滤、干燥后得到川陈皮素。
本发明提供的枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，其是将枳实粉碎，加提取溶剂进行热回流提取，提取两次，每次2h，合并两次提取液；回收提取溶剂，得粗浸膏；在粗浸膏中加混合有机溶剂进行萃取，得水相层及有机相层；回收有机相层溶液，提取液经冷却、真空浓缩得二次浸膏；再次进行多次萃取，最后干燥精制后得川陈皮素。本发明解决了现有技术难以获得高含量枳实黄酮中单一成分的问题。
本发明提供的枳实黄酮中川陈皮素的精制方法，可以实现对其单一成分进行提取、分离、纯化并达到精制的效果。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。