一种快速鉴定大量群体洋葱细胞核育性的KASP标记及其应用的制作方法

文档序号:23717844发布日期:2021-01-24 06:21阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种快速鉴定大量群体洋葱细胞核育性的kasp标记,其特征在于,用于扩增所述kasp标记的引物核苷酸序列如序列表中序列1-3所示。2.如权利要求1所述的kasp标记,其特征在于,所述序列1和序列2的5'端还设计有荧光标签;优选的,所述序列1的5'端设计有第一荧光标签,所述序列2的5'端设计有第二荧光标签,所述第一荧光标签和第二荧光标签并不相同;进一步优选的,所述第一荧光标签为fam,所述第二荧光标签为hex。3.权利要求1所述的kasp标记的扩增引物,其特征在于,所述扩增引物其核苷酸序列如序列表中序列1-3所示;优选的,序列1和序列2的5'端还设计有荧光标签;更优选的,所述序列1的5'端设计有第一荧光标签,所述序列2的5'端设计有第二荧光标签,所述第一荧光标签和第二荧光标签并不相同;进一步优选的,所述第一荧光标签为fam,所述第二荧光标签为hex。4.权利要求1或2所述kasp标记和/或权利要求3所述kasp标记的扩增引物在快速鉴定大量群体洋葱细胞核育性中的应用。5.一种快速鉴定大量群体洋葱细胞核育性的方法,其特征在于,所述方法包括:基于权利要求3所述kasp标记的扩增引物对待测洋葱材料的基因组dna进行pcr扩增;检测并判断pcr扩增产物中多态位点的基因型。6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应程序包括:94℃预变性15min;94℃变性20s,61-55℃退火1min,每一个循环降低0.6℃,10个循环;94℃变性20s,55℃退火1min,26-29个循环。7.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述方法包括:a)提取待测洋葱材料的总dna;b)将样本从96孔板中转移至384孔板中,再最终转移至1536孔板中,确保样本dna终浓度为10ng/μl;c)将装有dna样本的1536孔板进行干燥处理;d)干燥后的dna样本进行pcr体系构建;e)将加好反应体系的孔板进行封膜,并低速快速离心;f)离心后进行水浴pcr,pcr反应程序包括94℃预变性15min;94℃变性20s,61-55℃退火1min,每一个循环降低0.6℃,10个循环;94℃变性20s,55℃退火1min,26-29个循环;g)将完成反应的孔板,吹干降温后在酶标仪pherastar上进行读板,采用snpviewer2软件对扫描数据进行分析,根据分析结果确定洋葱细胞核的基因型即检测洋葱样品的细胞核育性。8.权利要求1或2所述kasp标记、权利要求3所述kasp标记的扩增引物和/或权利要求5-7任一项所述鉴定方法在洋葱雄性不育系和配套保持系选育中的应用。9.一种检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包含权利要求3所述kasp标记的扩增引物。10.如权利要求9所述检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括荧光探针以及pcr体系构建所需试剂。
当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1