一种银耳多糖的分离、纯化方法及其制备得到的银耳多糖与流程

1.本发明涉及多糖分离、纯化领域，更具体地，本发明涉及一种银耳多糖的分离、纯化方法及其制备得到的银耳多糖。


背景技术：

2.银耳多糖是一种酸性杂多糖，从银耳中分离、纯化得到，银耳多糖的功能有：1.提高免疫调节能力；2.辅助抑制肿瘤作用；3.延缓衰老作用；4.调节血糖作用；5.调节血脂、预防血栓作用；6.抗辐射作用；7.保护胃粘膜作用。
3.目前，关于银耳多糖的提取、分离、纯化工艺还不是纯熟，目前其分离、纯化的方法分为酶法浸提、酸法浸提、碱法浸提，然而不管是哪一种分离、纯化方法，目前均存在分离时间长，提取效率低的问题，这大大增加了时间成本，影响之后的规模化生产。同时，目前分离、纯化的银耳多糖的水溶液稳定性低，尤其是经历低温到高温的循环环境后，其稳定性大大降低，不溶性物质析出明显，大大降低了银耳多糖的贮存稳定性。


技术实现要素：

4.针对现有技术中存在的一些问题，本发明第一个方面提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，包括：湿银耳在无机碱溶液于90-100℃碱提后，调节ph，固液分离，醇沉、离心、干燥，即得。
5.作为本发明的一种优选的技术方案，所述无机碱溶液的浓度为0.5-2wt％。
6.作为本发明的一种优选的技术方案，所述湿银耳为干银耳在水中浸泡1-3h得到。
7.作为本发明的一种优选的技术方案，所述水和干银耳的重量比为(45-55)：1。
8.作为本发明的一种优选的技术方案，所述无机碱溶液和干银耳的重量比为(50-60)：1。
9.作为本发明的一种优选的技术方案，碱提的时间为2-5h。
10.作为本发明的一种优选的技术方案，所述调节ph步骤包括：在60-70℃，加入无机酸调节至ph为6-7，保温15min以上。
11.作为本发明的一种优选的技术方案，所述醇沉的步骤包括：加入90-98wt％的乙醇，搅拌2-8min。
12.作为本发明的一种优选的技术方案，在所述银耳多糖的分离、纯化方法中，干燥后进行粉碎至粒径为80-100目，即得。
13.本发明第二个方面提供了一种银耳多糖，根据所述银耳多糖的分离、纯化方法分离、纯化得到。
14.本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
15.(1)本技术在银耳多糖的分离、纯化方法过程中，控制无机碱溶液的浓度为0.5-2wt％，且在本技术特定的无机碱溶液的含量条件下，得到的银耳多糖的5wt％的水溶液的透光率大于90％；
7，保温15min以上。
36.优选的，所述调节ph步骤包括：在68℃，加入无机酸调节至ph为6.5，保温12-40min。
37.更优选的，所述调节ph步骤包括：在68℃，加入无机酸调节至ph为6.5，保温25min。
38.本技术中所述无机酸的种类和浓度不作特别限定，本领域技术人员可作常规选择。
39.在一种实施方式中，所述无机酸为37wt％的盐酸。
40.本技术人在实验中发现，在银耳多糖碱提后进行醇沉的过程中，需要12-18h的醇沉时间才能同时保证较高的银耳多糖的收率，而此时的银耳多糖的纯度也较低，本技术人意外的发现，当在醇沉之前，调节ph的温度为60-70℃，且保温15min以上，在后续的醇沉操作时，醇沉2-8min既可完成醇沉操作，获得较高的银耳多糖收率，本技术人认为可能的原因是在经过本技术特定条件调节ph后，且在特定的保温时间内，此时经过本技术提取得到的提取液中的蛋白质分子改变了内部的结构和性质，从多糖溶液中分离出来，为后续的醇沉提供了有力的保障，降低了醇沉的时间。
41.本技术人意外的发现，经过本技术特定的碱提条件以及调节ph的条件，形成的银耳多糖的5wt％水溶液在-18℃～40℃反复冻融3个循环后，稳定性好，无沉淀的析出，粘度稳定，本技术人认为可能的原因是经过本技术特定的碱提后，得到的银耳多糖分子侧链在后期特定的ph存在一定的时间后，随着蛋白质分子的分离和析出，分子侧链之间进一步舒展为较为规则的定向排列，经过后期的醇沉以及干燥后，分子侧链之间的相互作用降低，在经过-18℃～40℃反复冻融3个循环后，降低分子之间聚集的可能。
42.本发明所述固液分离的具体操作步骤不作特别限定，本领域技术人员可作常规选择。
43.在一种实施方式中，所述固液分离得到液体部分进行醇沉。
44.在一种实施方式中，所述醇沉的步骤包括：加入90-98wt％的乙醇，搅拌2-8min。
45.优选的，所述醇沉的步骤包括：加入95wt％的乙醇，搅拌5min。
46.优选的，所述乙醇和固液分离得到的液体部分的重量比为(2-4)：1；更优选的，所述乙醇和固液分离得到的液体部分的重量比为3：10。
47.在一种实施方式中，所述干燥的方式为热风干燥或沸腾干燥。
48.热风干燥：热风干燥又称“瞬间干燥”，是使加热介质(空气、惰性气体、燃气废气或其他热气体)和待干燥固体颗粒直接接触，并使待干燥固体颗粒悬浮于流体中，因而两相接触面积大，强化了传热传质过程，广泛应用于散粒状物料的干燥单元操作。
49.沸腾干燥：流化干燥，又称沸腾干燥，是指运用流态化技术进行干燥的一种干燥方法。适用于干燥细颗粒物料，如碳酸氢铵、碳酸铵、硫酸铵、氯化铵等。有圆筒、卧式、喷雾、喷雾气流等类型。湿物料加在筛板上，干燥介质从下面经筛板吹出，将物料吹成沸腾状，以达到加速干燥的目的。
50.在一种实施方式中，在所述银耳多糖的分离、纯化方法中，干燥后进行粉碎至粒径为80-100目，即得。
51.优选的，在所述银耳多糖的分离、纯化方法中，干燥后进行粉碎至粒径为80目，即得。
52.本技术人在实验中意外的发现，当银耳多糖颗粒的粒径为80-100目时，得到的银耳多糖颗粒在湿度为80wt％的环境中露天存放48h后，不会发生粘结成块的现象，本技术人认为可能的原因是在该粒径范围内，经过本技术前期提取得到的银耳多糖分子与水分子之间的接触表面积有限，同时在该粒径范围内，本技术中得到的银耳多糖的密集的分子侧链阻碍了水分子的进一步透过，而粒径过小会增加吸湿结块的几率，粒径过大，降低了得到的银耳多糖颗粒在后期的使用效率。
53.本发明第二个方面提供了一种银耳多糖，根据所述银耳多糖的分离、纯化方法分离、纯化得到。
54.实施例
55.在下文中，通过实施例对本发明进行更详细地描述，但应理解，这些实施例仅仅是示例的而非限制性的。如果没有其它说明，下面实施例所用原料都是市售的。
56.实施例1
57.本发明的实施例1提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为45：1的水对干银耳进行浸泡1h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为50：1的0.5wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至90℃碱提5h；控制料液温度60℃，加入37wt％盐酸调节ph为6，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分2倍重量的90wt％乙醇，搅拌2min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
58.实施例2
59.本发明的实施例2提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为55：1的水对干银耳进行浸泡3h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为60：1的2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至100℃碱提2h；控制料液温度70℃，加入37wt％盐酸调节ph为6，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分4倍重量的98wt％乙醇，搅拌8min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为100目，得到银耳多糖固体颗粒。
60.实施例3
61.本发明的实施例3提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
62.实施例4
63.本发明的实施例4提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的5wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
64.实施例5
65.本发明的实施例5提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的0.1wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
66.实施例6
67.本发明的实施例6提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为35：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
68.实施例7
69.本发明的实施例7提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温5min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
70.实施例8
71.本发明的实施例8提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为6.5，保温50min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
72.实施例9
73.本发明的实施例9提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调节ph为5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为80目，得到银耳多糖固体颗粒。
74.实施例10
75.本发明的实施例10提供了一种银耳多糖的分离、纯化方法，具体为：使用与干银耳重量比为50：1的水对干银耳进行浸泡2h，弃水，得到湿银耳；加入与干银耳重量比为55：1的1.2wt％氢氧化钠溶液，搅拌升温至95℃碱提3.5h；控制料液温度65℃，加入37wt％盐酸调
节ph为6.5，保温25min；使用过滤设备进行固液分离，得到液体部分，加入为液体部分3倍重量的95wt％乙醇，搅拌5min，利用离心机离心后，热风干燥，粉碎至粒径为120目，得到银耳多糖固体颗粒。
76.性能评估
77.1.透光率：分别将实施例1-10得到的银耳多糖固体颗粒配置5wt％的银耳多糖水溶液，在25℃，以蒸馏水作为对照，在400nm的光源处测定透光率。
78.2.醇沉时间：分别按照实施例1-10银耳多糖的分离、纯化方法进行操作，加入乙醇后，搅拌直至沉淀重量无增加，从加入乙醇开始计时，直至搅拌至沉淀重量无增加结束，记录该时间，其中在10min以内记为一级；在10min-1h记为二级；大于1h记为三级。
79.3.循环冻融稳定性：分别将实施例1-10得到的银耳多糖固体颗粒配置5wt％的银耳多糖水溶液，在-18℃～40℃反复冻融3个循环后，观察是否出现不溶物的析出。其中，反复冻融的条件为于-18℃保持2天，之后在40℃保持2天。
80.4.贮存稳定性：分别将1-10得到的银耳多糖固体颗粒露天放置在湿度为80wt％的环境中48h，观察是否出现结块的现象。
81.表1
[0082][0083][0084]
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范
围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。