技术特征：
1.一种重组人源胶原蛋白，其特征在于，该重组人源胶原蛋白的编码基因rhiiic8，rhiiic8的核苷酸序列为seq id no.1；rhiiic8的氨基酸序列为seq id no.2。2.含有权利要求1所述编码基因的表达载体。3.含有权利要求1所述编码基因的基因工程菌。4.一种如权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)获得重组载体：选取人类三型胶原保守区域肽段，将该序列重复8次进行人工全基因合成rhiiic8，将其构建到pet22b的表达载体中获得重组载体；(2)构建重组基因工程菌：提取质粒、将其转化到bl21
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plyss感受态细胞中，挑取单克隆并对其扩大培养，获得重组基因工程菌；(3)制备重组人源胶原蛋白：经过诱导表达目的蛋白，然后对表达产物进行分离纯化，得到高纯度的可溶于水的重组人源胶原蛋白。5.根据权利要求2所述的一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(3)中分离纯化的具体步骤如下：(3.1)将步骤(2)中的工程菌接种至lb培养基中，37℃培养过夜，按照体积比1:100转接lb培养基，在摇瓶中37℃培养至od600为0.6，加入终浓度为0.1mm的iptg，25℃培养6
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8小时，离心力为5000xg离心5分钟，收集菌体沉淀；(3.2)用pbs缓冲液洗涤菌体沉淀后重悬菌体沉淀，选择性加入终浓度1
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5mg/ml溶菌酶的triton x
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100溶液帮助裂解细胞，在冰浴下超声破菌，12000rpm离心20min，收集上清液；所述溶菌酶的triton x
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100溶液加入量以重悬所用pbs缓冲液体积为10ml/40ml；(3.3)用pbs缓冲液清洗镍离子亲和柱，然后将亲和柱和上清液分别在室温或冰上轻摇30min，上柱，用含有15mm咪唑的pbs溶液洗涤杂蛋白，优选洗脱1柱体积，洗涤至柱上仅剩下了纯rhiiic8蛋白，在柱上加入prescission protease蛋白酶，即ppase，于室温或冰上轻摇2小时，将rhiiic8蛋白从柱上释放出来，用pbs溶液洗脱，优选1/2柱体积，收集洗脱液，所得产物透析过夜，冻干，获得纯化的重组人源胶原蛋白；其中，所述蛋白酶加入量以柱子体积计为1μl/5ml。6.根据权利要求5所述的一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(3.1)中lb培养基液体的组成为：胰蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、nacl 5g/l，溶剂为去离子水，ph值为7.5，在lb培养基液体中添加15g/l琼脂混匀后得到lb培养基平板。7.根据权利要求5所述的一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(3.2)中的超声破菌条件为：280w、2s超声，5s间歇，保护温度25℃，破菌时长为15min。8.根据权利要求5所述的一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(3.3)中冻干的具体步骤为：每5mg蛋白依次加入体积浓度为10％，5％，3％，2％，1％的甘露醇水溶液0.5ml，每个浓度在
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40℃预冻10min，最后
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35℃冻干。9.一种用于组织工程、美容护肤的生物材料，其特征在于，所述生物材料包含权利要求1所述编码基因的重组人源胶原蛋白或权利要求4
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8任一所述制备方法制备得到的重组人源胶原蛋白。
技术总结
本发明公开了一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用，属于生物工程领域，该制备方法包括如下步骤：(1)获得重组载体：选取人类三型胶原保守区域肽段，将该序列重复8次进行人工全基因合成RHIIIC8，将其构建到pET22b的表达载体中获得重组载体；(2)构建重组基因工程菌：提取质粒、将其转化到BL21
技术研发人员：郭伟
受保护的技术使用者：江苏亨瑞生物医药科技有限公司
技术研发日：2021.08.30
技术公布日：2021/11/8