技术特征：
1.一种以oligo(dt)为亲和配基的层析填料在纯化mrna工艺中的用途。2.根根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述层析填料结构如下：sp-r-oligo dt其中，sp为基础介质，oligo(dt)为亲和配基，r为基础介质偶联oligo(dt)的间隔臂。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述基础介质为琼脂糖微球、聚甲基丙烯酸酯微球、聚乙烯-二乙烯基苯微球或硅胶微球中的一种；所述oligo dt为具有10到30个碱基的多聚脱氧胸腺嘧啶，且在5’端修饰有氨基；所述间隔臂r的两端都具有环氧基、一端与介质偶联，另一端与oligo(dt)末端的氨基偶联，中间具有任意化学结构。4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述层析填料的制备方法包括：(1)将基础介质活化，得到表面修饰有大量环氧基或醛基的活化介质；(2)将oligo(dt)偶联至活化介质上；(3)将多余醛基或环氧基封闭处理，得到oligo dt亲和介质。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：纯化mrna工艺包括：a.制样，有两种方法：法a1，将mrna溶解于制样缓冲液中；a2，将mrna溶解于制样缓冲液中，加热，然后立即在冰上冷却；b.上样，有两种方法：b1，用柱温箱加热层析柱，随后上样，b2，mrna在室温下上样；c.洗杂：使用高盐洗涤缓冲液洗去杂质；d.洗脱，有两种方法：d1，加热层析柱，破坏mrna中poly(a)尾巴与层析介质表面上oligo(dt)碱基之间的氢键；d2，低盐缓冲液或水破坏mrna中poly(a)尾巴与层析介质表面上oligo(dt)碱基之间的氢键；e.在位清洗：对色谱柱进行消毒并再生色谱柱，以进行下一轮纯化。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：mrna带有poly(a)尾巴，poly(a)尾巴可以通过dna质粒翻译形成或者通过加尾酶添加；所述纯化方法的mrna长度≥500nt，或≥750nt，或≥1000nt，或≥1250nt；mrna一般为线形或环形rna；环形rna带有mrna，poly(a)，核酶组分，首尾相行成一个闭环；mrna上样量≥0.2mg/ml。7.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：层析填料表面的寡聚脱氧胸腺嘧啶核苷oligo(dt)配基长度为10-30。8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：步骤a1中的制样缓冲液为pbs、tris、hepes、tricine、硼酸盐、柠檬酸盐或氨基酸缓冲液；上述制样缓冲液中的盐为nacl或kcl；盐浓度为0.1m-2.0m；制样缓冲液的ph为6.5-8.0；mrna和制样缓冲液的混合体积比为1∶1-1∶8；步骤a2中mrna样品加热温度为40-70℃；步骤b1中加热温度为40-70℃；步骤b1中线性流速为30-600cm/h；步骤c中线性流速为30-600cm/h；步骤d1中加热温度为40-80℃；步骤e1中naoh浓度为0.05m-0.2m。9.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：层析柱可以是制备柱、半制备柱、高效液相色谱柱、uplc柱、uhplc柱、fplc柱、重力柱或一次性柱；所述层析柱可用于连续或非连续色谱中的单柱或多柱模式；层析柱的长度从0.1mm到2m不等，层析柱的内径从6.6mm到1m不等；层析柱的外壳材料可以是不锈钢的、peek、玻璃或硼硅酸盐玻璃。10.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述层析填料是无孔的或有孔的，粒径为5m-150m；基础介质是单分散、多分散聚甲基丙烯酸酯、苯乙烯/二乙烯基苯(ps/dvb)、
琼脂糖或硅胶，粒径为5m-150m。
技术总结
本发明公开以Oligo(dT)为亲和配基的层析填料的用途，公开该层析填料在纯化mRNA工艺中的用途，纯化的工艺包括：a.制样；b.上样；c.洗杂；d.洗脱；e.在位清洗。本发明采用上述填料的纯化方法能实现mRNA的有效捕获、除杂和洗脱，简化后续纯化步骤并最大限度地提高下游纯化整体生产效率，适合工业放大生产。此外，环形RNA序列中如果有Poly(A)结构，该柱层析法也适用。用。用。
技术研发人员：吕小林 齐甜铭 丁良龙 胡新妹 毛慧明
受保护的技术使用者：苏州赛分科技股份有限公司
技术研发日：2021.12.27
技术公布日：2022/4/22