技术特征：
1.多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：采取新鲜外周血100ml，向外周血中加入淋巴分离液并置于离心管中，在2000r/min的条件下离心15-30min，分离获得pbmc和血浆；将血浆装入离心管并在56℃水浴的条件下灭活，然后离心去除杂质，备用；步骤2：将pbmc用生理盐水洗涤2-3次，然后将洗涤后的pbmc与50ml复合培养基混合并接种于培养瓶中，置于co2培养箱培养；步骤3：培养第三天向培养瓶中加入50ml复合培养基和4ml灭活后的血浆，放入co2培养箱继续培养；培养第五天向培养瓶中加入100ml复合培养基和8ml灭活后的血浆，放入co2培养箱继续培养；步骤4：培养第七天进行扩大培养；培养第十一天收获细胞。2.根据权利要求1所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，复合培养基中包括基础培养基、抗体因子和辅助培养因子。3.根据权利要求2所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，抗体因子包括gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ和il-1α。4.根据权利要求2所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，辅助培养因子包括pha-m和mdp。5.根据权利要求4所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，基础培养基、gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ、il-1α、pha-m和mdp的用量比为500ml：1
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105iu：5
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104iu：5
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103iu：3
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104iu：1
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105iu：1
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104iu：5mg：0.01mg。6.根据权利要求1所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，步骤1中外周血和淋巴分离液的用量比为5ml：3ml。7.根据权利要求1所述的多因子培养免疫细胞的方法，其特征在于，步骤4中扩大培养的方法为：将培养瓶中的细胞吹打均匀得到细胞悬液，将细胞悬液均匀分配到3个新的培养瓶中，在每个新的培养瓶中加入50ml复合培养基和4ml灭活后的血浆，继续放入co2培养箱中培养；培养第九天将剩余灭活后的血浆均分，分别向3个培养瓶中加入80ml复合培养基和均分后的血浆。
技术总结
本发明公开了多因子培养免疫细胞的方法，属于生物技术领域，在基础培养基中加入抗体因子和辅助培养因子用于NK细胞的培养，抗体因子包括GM-CSF、TNF-α、IL-4、IL-2、IFN-γ和IL-1α，辅助培养因子包括PHA-M和MDP，抗体因子和辅助培养因子在培养过程中对NK细胞的扩增影响较小，有利于NK细胞的正常培养；在NK细胞培养过程中通过多种因子进行刺激，能够让NK细胞在培养增殖的过程中产生较长的时间记忆，使NK细胞对肿瘤细胞等靶细胞拥有较高杀伤活性，从而获得更好的使用效果。而获得更好的使用效果。而获得更好的使用效果。
技术研发人员：沈磊 陈永莉 沈凡舒
受保护的技术使用者：中扬精准医学科技（扬州）有限责任公司
技术研发日：2022.03.31
技术公布日：2022/8/5