一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用与流程

文档序号:30952167发布日期:2022-07-30 08:07阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,具体包括:s1、称取样品进行菌株的分离纯化;s2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选;s3、提取细菌dna并进行菌种鉴定;s4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种;s5、将菌剂复配为复合菌剂并进行正交设计;s6、通过不同复配比菌种进行除氨除硫并记录不同复配比的去除率数据,得出复合菌剂中各菌种的除氨除硫配比;s7、制备固态菌剂;所述复合菌剂中的菌种包括苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和乳杆菌。2.根据权利要求1所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述复合菌剂中苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与乳杆菌的除氨除硫配比是6:1:2:1:6:2:6。3.根据权利要求1所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述步骤s1包括:s101、称取餐厨垃圾样品,置于装有灭菌生理盐水和若干已灭菌玻璃珠的三角瓶,摇匀,所述餐厨垃圾样品与灭菌生理盐水比例为1:9;s102、通过使用无菌水将样品稀释为不同浓度梯度的稀释液;s103、取100μl不同浓度稀释液涂布于不同培养基平板上,置于30℃恒温培养箱培养5天;s104、通过平板稀释分离法进一步分离纯化,纯化后的单一菌株在显微镜下根据形态特征分类编号并于4℃斜面保存备用。4.根据权利要求3所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述对除臭优势菌进行筛选具体包括:s201、初筛:取新鲜的餐厨垃圾置于容器中,按照3%的接种量将稀释液接种于容器中,混合均匀后密封,30℃静置培养7天;s202、复筛:将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中,接种纯化得到的菌液,每个菌种三次重复;接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20ml硼酸吸收液的小烧杯,接种脱硫菌的广口瓶中放置盛有20ml碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯,广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封;置于30℃培养箱中培养,每隔一段时间取出小烧杯,检测nh3和h2s的释放量,选出除臭效果好的菌种斜面保存。5.根据权利要求4所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述提取细菌dna包括:s301、1ml的细胞悬液在8000g下离心2min,弃去上清液并用400μl ste buffer冲洗细胞两次,在8000g下离心2min,弃去上清;s302、将200μl te buffer悬浮细胞和100μl的tris-saturated phenol加到离心管中,涡旋混合60s;s303、在4℃用13000g离心5min从有机相中分离出水相,取160μl上清液转移到干净的
ep管中;s304、加40μl的te buffer到ep管中,用100μl氯仿混合,在4℃,13000g下离心5min;s305、用氯仿提取的方法纯化裂解液直到没有白色的界面出现,重复两到三遍;s306、取160μl上清液到干净的ep管中,加40μl te和5μl的rnase并在37℃下放置10min,分解rna;s307、将100μl的氯仿加到离心管中,混合,在4℃,13000g离心5min;s308、将150μl的上清液转移到干净的ep管中,所述150μl的上清液包含有纯化的用于序列实验的dna,并在-20℃下保存。6.根据权利要求5所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述五点对峙法包括:将经过菌种鉴定后的菌株接种在lb或pda固体培养基平板中央,在距离菌种点3cm处点种待筛选细菌,并以不接种细菌作为对照,置于27℃培养箱中培养直到对照长满,筛选出无拮抗菌种,重复3次,进行复筛。7.根据权利要求6所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述菌剂的复配包括:s501、菌种的活化与扩大培养:挑取斜面培养基中的单菌落至装有15ml液体培养基的三角瓶中,30℃恒温培养箱培养24h;菌种经过活化后,按照2%的接种量接入装有200ml液体培养基的三角瓶中扩大培养;s502、菌剂的复配:所述苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与乳杆菌的配制体积为100ml的菌悬液,有效活菌数>1
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109cfu/ml,并进行正交设计。8.根据权利要求7所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述固态菌剂的制备方法包括:s701、载体的制备:选择麦麸、麦壳、锯末、活性炭作为混合载体,所述麦麸:麦壳:锯末:活性炭相应质量比例为10:5:2:2,研磨,过筛网,灭菌30min,放在烘箱中烘干备用;s702、供试菌种的制备:挑取斜面培养基中的单菌落至装有液体培养基的三角瓶中,30℃恒温培养箱培养24h;菌种经过活化后,按照2%的接种量接入装有液体培养基的三角瓶中扩大培养;s703、配置方法:将各个菌种的混合液与混合载体搅拌均匀,并依次加入丙三醇、薄荷精油、葡糖糖和海藻糖,混匀,放入35℃烘箱中烘至含水率为25%,固态剂型制备完成。9.根据权利要求8所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法,其特征在于,所述固态菌剂配置方法中各个菌种的混合液与载体按照2.5∶1的比例,葡糖糖的含量为0.1-0.3g/ml,海藻糖含量为0.05g/ml,薄荷精油的含量为10mg/ml,丙三醇的含量为各个菌种的混合液的体积的5%。10.一种除臭优势菌的应用,其特征在于,除臭优势菌根据权利要求1-9任一所述的一种除臭优势菌的筛选、制备方法制备,将所述除臭优势菌加入生物反应器对废气进行除臭。

技术总结
本发明提供了一种除臭优势菌的筛选、制备方法及其应用,方法具体包括:S1、称取样品进行菌株的分离纯化;S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选;S3、提取细菌DNA并进行菌种鉴定;S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种;S5、将菌剂复配为复合菌剂并进行正交设计;S6、通过不同复配比菌种进行除氨除硫并记录不同复配比的去除率数据,得出复合菌剂中各菌种的除氨除硫配比;S7、制备固态菌剂;所述复合菌剂中的菌种包括苏云金芽胞杆菌、毕赤酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和乳杆菌。本发明从餐厨垃圾生化仓样品中分离得到降解氨气和硫化氢的细菌、酵母菌、芽孢杆菌及放线菌等,成本低、除臭效率高且适应广。除臭效率高且适应广。


技术研发人员:张辉 付鹏睿 肖通奋 刘江涛
受保护的技术使用者:浙江延杭智能科技有限公司
技术研发日:2022.04.21
技术公布日:2022/7/29
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