用于研究人肝癌癌内异质性的细胞模型的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物细胞领域，具体地说，涉及用于研宄人肝癌癌内异质性的细胞 模型。
【背景技术】
[0002] 肝细胞癌是是我国发病率三位的恶性肿瘤，我国肝癌占全球一半以上。手术切除 和肝移植是肝癌有望获得根治的唯一手段，但接近70%的患者在术后5年内复发转移，目 前肝癌尚无有效的治疗药物（仅有的肝癌靶向药物索拉菲尼有效率仅2-3%)。已知，抗肿 瘤药物的疗效差异主要由肿瘤细胞基因组的异常表达决定，因肿瘤基因组的不稳定性及肿 瘤间的异质性，抗肿瘤药物往往仅在某一群病人身上有效。例如，靶向BCR-Abl的药物格列 卫在BCR-ABL融合表达的慢性粒细胞白血病病人中非常有效，五年生存率可达90%以上； 靶向EGFR的易瑞沙成功用于EGFR突变的非小细胞肺癌，ALK抑制剂Crizotinib也仅批准 用于EML4-ALK融合的非小细胞肺癌患者。在生物标志物（如BCR-ABL的融合、EGFR突变、 EML4-ALK融合）的指征下，可以有效地判别对特定靶向药物的"有效人群"和"无效人群"， 从而提高疗效、降低毒副作用。肝癌药物开发也面临着一样的问题，如能在药物开发早期体 外阶段筛选出其生物标志物，可显著降低整个药物开发的成本，加速肝癌靶向药物的上市 及临床应用。
[0003] 目前在细胞水平上筛选抗肿瘤药物标志物时，主要是通过关联药物反应与细胞基 因组表达、扩增和突变的差异，分析二者相关性来寻找可特异性预测药物反应的标志物。而 开展此类研宄时，面临的一大问题是：对同一种药物敏感的不同肿瘤细胞中，基因组上往往 也存在着大量的差异（即肿瘤遗传异质性），这些差异中有些与药物反应相关、并导致抗肿 瘤治疗的失效，然而大部分遗传异质性则是与药物反应不相关的差异，这些差异给相关性 分析带来了无法消除的噪音，使得标志物分析变得困难。目前公认，肿瘤内异质性是肿瘤尚 不能被征服的最主要原因，而肝癌恰恰被认为是异质性最强的肿瘤，但业界尚无可以用来 研宄肿瘤内异质性的肝癌细胞株。此外，ATCC(美国菌种保藏中心）可用的商用肝癌细胞 系仅有十几株，而某一基因突变在人群中所在比例较少，需要一定量的样本才能筛选出敏 感细胞株，因此需要建立更多的肝癌细胞株用于研宄。
[0004] 中国专利文献CN:200910180628. 3公开了一种肝癌细胞系及其应用。该肝癌细胞 系为人肝癌细胞株H印-12CGMCCNo. 3204,人肝癌细胞株H印-12CGMCCNo. 3204和人肝癌 细胞株H印-11CGMCCNo. 3203可组成一种用于研宄肝癌机理的细胞模型组。该肝癌细胞系 具有很好的致瘤特性，可作为肝癌发生、肝癌发展或肝癌转移的细胞模型。但是上述细胞模 型并没有涉及肝癌癌内异质性的研宄，因此提供一种可用于研宄人肝癌癌内异质性的细胞 模型是十分必要的。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种肝癌细胞模型组。
[0006] 本发明的再一的目的是，提供所述的肝癌细胞模型组的用途。
[0007] 本发明的另一的目的是，提供一种人肝癌细胞系。
[0008] 本发明的第四个目的是，提供所述的人肝癌细胞系的用途。
[0009] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
[0010] 一种肝癌细胞模型组，由保藏号为CCTCCC2014225的人肝癌细胞系HCCIH01、保 藏号为CCTCCC2014226的人肝癌细胞系HCCIH02和保藏号为CCTCCC2014227的人肝癌细 胞系HCCIH03组成。
[0011] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
[0012] 所述的肝癌细胞模型组在作为研宄人肝癌癌内异质性的细胞模型中的应用。
[0013] 所述的肝癌细胞模型组在研宄FGFR抑制剂AZD4547敏感性机制，寻找AZD4547的 分子标志物中的应用。
[0014] 所述的肝癌细胞模型组在研宄FGFR抑制剂NVP-BGJ398敏感性机制，寻找 NVP-BGJ398的分子标志物中的应用。
[0015] 所述的肝癌细胞模型组在研宄抗肿瘤靶向药物的敏感性机制，寻找抗肿瘤靶向药 物的分子标志物中的应用。
[0016] 为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
[0017] 作为本发明的一种技术方案，人肝癌细胞系HCCIH01，其保藏号为CCTCC C2014225〇
[0018] 作为本发明的一种技术方案，人肝癌细胞系HCCIH02,其保藏号为CCTCC C2014226〇
[0019] 作为本发明的一种技术方案，人肝癌细胞系HCCIH03,其保藏号为CCTCC C2014227〇
[0020] 为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：
[0021] 所述人肝癌细胞系HCCIH01、所述人肝癌细胞系HCCIH02、所述人肝癌细胞系 HCCIH03在研宄肝癌发生机理和/或筛选治疗肝癌药物中的应用。
[0022] 本发明中的三株肝癌细胞，来源于同一个病人肝癌组织的不同部位，尽管存在着 显著的肿瘤内异质性（表型异质性和遗传异质性），但与不同病人来源的肝癌细胞相比，同 一病人来源细胞的基因组信息更为相似、差异小，大大降低了噪音的影响，从而提高了鉴定 药物反应相关标志物的效率和能力，降低抗肿瘤药物分子标志物分析的难度和成本。同时， 这三株细胞也为研宄肝癌癌内异质性的起源、机制及意义提供了良好的模型。
[0023] 本发明优点在于：
[0024] 1、细胞代数明确，无交叉感染；三株肝细胞来源于同一个病人肝癌组织的不同空 间部位，存在着显著的肿瘤内异质性，为研宄肝癌癌内异质性的起源、机制及意义提供了良 好的模型。
[0025] 2、与不同病人来源的肝癌细胞相比，同一病人来源细胞之间的基因组信息更为相 似、混杂因素少，提高了鉴定药物反应相关标志物的效率和能力，降低抗肿瘤药物分子标志 物分析的难度和成本。
【附图说明】
[0026] 附图1是三株肝癌细胞的形态。
[0027] 附图2是三株肝癌细胞克隆形成能力照片。
[0028] 附图3是三株肝癌细胞的迀移能力照片。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0030] 实施例1人肝癌细胞系HCCIH01、HCCIH02、HCCIH03建立及测试
[0031] -、细胞系的建立及检测
[0032] 1.三株原代肝癌细胞建立
[0033] 取术前未经任何治疗的，在在复旦大学附属中山医院肝脏外科行手术切除的肝癌 细胞患者的肿瘤标本，该患者为汉族男性，34岁，HBV+HCV-HIV-，术前AFP为1925ng/ml， 肝细胞癌的诊断获病理证实，并取得患者知情同意和复旦大学附属中山医院伦理委员会批 准。切除后立即在肿瘤实体组织的不同区域进行取样，并将不同采样区域使用序号标记。将 分离好的新鲜肝癌组织，于无菌超净台中PBS洗净后，使用眼科镊子、剪刀等器械在培养皿 中剪碎分离成〇. 5-1_3的小块平铺于皿底，并向培养皿中加入含10ml的10%FBS(GIBCO 公司），1 %双抗DMEM细胞培养基（GIBCO公司），放入37°C5% 0)2的培养箱中进行培养， 次日在倒置显微镜下观察到细胞从组织块四周游出，然后逐渐延伸，长成肉眼可以观察到 的生长晕。5?7天后组织块中央的组织细胞逐渐坏死脱落和发生漂浮，此漂浮小块可随 换液而弃去，由组