一种甜瓜白粉菌生理小种的快速鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗病育种技术领域，具体涉及一种甜瓜白粉菌生理小种的快速鉴定方 法。
【背景技术】
[0002] 甜瓜是我国重要的瓜类作物，自20世纪80年代以来，我国甜瓜的栽培面积和产量 一直居于世界首位。近年来，甜瓜白粉病逐渐成为我国甜瓜露地和保护地栽培的主要病害， 为害后使植株的光合作用减弱，叶片和茎蔓局部或全部硬化干枯，果实不能正常成熟，严重 影响甜瓜的品质和产量，大大降低了其经济效益。
[0003] 白粉病菌属于高度专化性寄生真菌，在寄主表皮细胞内产生吸器，而菌丝体则匍 匐在寄主体表。白粉病菌主要侵染萌芦科作物的叶片，也为害叶柄、茎蔓，严重时果实也会 受到感染，给农业生产带来巨大的损失。过去甜瓜白粉病仅在气候温和、潮湿多雨的地区发 生。近年来，随着设施甜瓜种植面积的急剧增加、甜瓜种植密度的增大、氮肥施用量的增大， 以及种植品种的单一，使得甜瓜白粉病为害日益严重。
[0004] 为了减轻农业生产的损失，国内外研宄者都在进行甜瓜抗白粉病品种的选育。但 是，由于白粉菌生理小种较多，且存在变种的情况，因此目前国内还没未出现具有长效及广 谱抗性的甜瓜品种。
[0005] 选育抗病品种的前提，就是要了解当地白粉菌的生理小种。研宄表明我国甜 瓜白粉病主要由瓜单囊壳白粉菌Podosphaera xanthii和二孢白粉菌Golovinomyces cichoracearum这两种病原菌引起，而仅单囊壳白粉菌P. xanthii已经发现有11个生理小 种，分别是生理小种 0, 1，2U.S, 2France,3, 4, 5, 6, 7,N3 和N4,而G. cichoracearum又有2个 生理小种。目前，国内外对于白粉菌的生理小种的鉴定方法主要是活体鉴定，即种植13个 鉴定寄主材料，等植株生长到具有一定数量的真叶时，再进行白粉菌的接种，然后放在温室 或人工气候箱中控制生长环境，过一段时间观察发病情况。这种活体鉴定的方法需要巨大 的工作量，不但要精心种植13个鉴定寄主，而且还要配置大量的孢子液。为了满足实验的 重复性，往往需要很大的空间来育苗，在接种白粉菌之后，还要做好防护工作，防止空气中 的孢子对实验结果产生影响。另外，从播种到接种后发病，至少要4周以上，同时接种后的 发病情况还要依赖于甜瓜苗的生长情况，具有很多不确定性。因此，针对甜瓜白粉菌生理小 种的鉴定需要建立一套简便、快捷、准确的快速鉴定体系，在可控的环境条件下，利用适当 的接种方法，在短时间内对白粉菌未知生理小种进行鉴定，为甜瓜白粉病的抗病育种奠定 基础。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种甜瓜白粉菌生理小种的快速鉴定方法，解决了现有技术 中存在的甜瓜白粉菌生理小种鉴定工作量大、时间长、鉴定过程不可控的问题。
[0007] 采用的技术方案是，一种甜瓜白粉菌生理小种的快速鉴定方法，具体按照以下步 骤实施：
[0008] 步骤1、育苗：在50孔的穴盘中，装入品氏基质后，播种已知的13个甜瓜白粉病鉴 定寄主，每个寄主播种5~10株；选择6-7天苗龄刚刚平展的子叶作为鉴定材料；
[0009] 步骤2、孢子液配制：取通过单孢在离体叶片上纯化繁殖的新鲜白粉病孢子，用 5%葡萄糖溶液加0. 05%吐温20溶液配制成孢子液，用血球计数板计数，使其浓度达到在 10X10显微镜下观察视野中有25-30个，这个浓度可以保证感病材料发病程度较重，同时 抗病材料有轻度发病症状；
[0010] 步骤3、离体环境的构造：将两张18cm的双圈定性滤纸放在配套的培养皿中，在第 一张滤纸上画好方格，并标上1~13的数字，用无菌水将双层滤纸润湿；将鉴定寄主1~13 的子叶按标号放在方格内，保持叶片正面向上；
[0011] 步骤4、白粉接种：用已灭菌的毛笔将配制好的白粉孢子液均匀地涂在13个鉴定 寄主子叶上；
[0012] 步骤5、培养：将培养皿用封口膜封好，放在25°C光照强度为2000勒克斯条件下光 照培养16h，之后于黑暗的环境下培养8h;
[0013] 步骤6、培养7-10天后，用肉眼观察13个鉴定材料的发病情况，根据发病情况对照 国际标准鉴别寄主抗感反应表判定白粉菌的生理小种。
[0014] 本发明的特点还在于，
[0015] 已知的13个甜瓜白粉病鉴定寄主分别为：1为PI414723,2为IranH，3为 PI124111，4 为MR1，5 为Topmark，6 为WMR29,7 为PMR6,8 为Edisto47,9 为PMR5，10 为 Vedrantais，ll为PMR45，12 为PI124112，13 为Nantaisoblong。所用的接种对象为培养 6-7天的子叶，培养时间短，病虫害污染少，易于发病。
[0016] 育苗的培养条件是：白天的温度控制在28~30°C之间，晚上的温度控制在20~ 22°C之间。
[0017] 步骤6中根据发病情况对照国际标准鉴别寄主抗感反应表判定白粉菌的生理小 种具体为：甜瓜子叶病情鉴定采用5级分级标准：0级：整个子叶没有病斑；1级：〈25%子叶 有病斑；2级：〈=25%，〈50%子叶有病斑；3级：〈=50,〈75子叶有病斑；4级：〈=75% 子叶有病斑。病情指数=2 (病级X该病级株数）八最高病级\调查总株数）\100。病 指彡45为抗（R) ;>45,彡100为感（S)。
[0018] 本发明的有益效果是：（1)鉴定周期短，全过程仅需2周左右，而传统方法需4周 左右；（2)工作量小，不需要配置大量孢子液喷在活体植株上，也不需要精心育苗至植株长 出真叶；（3)占用空间小，先期育苗不需要大量的空间来种植活体植株，接种后在实验室即 可完成培养，所需的条件也更加易于控制；(4)准确度高，在封闭的培养皿中可以排除空气 中的孢子对实验结果的影响。（5)不受制于天气气候条件，在实验室进行实验可避免季节原 因对实验的限制。
【附图说明】
[0019] 图1是本发明中甜瓜白粉病国际公认13个鉴别寄主子叶在18cm培养皿中的示意 图，其中，1 为PI414723,2 为IranH，3 为PI124111，4 为MR1，5 为Topmark，6 为WMR29,7 为 PMR6,8 为Edisto47,9 为PMR5,10 为Vedrantais，11 为PMR45,12 为PI124112,13 为Nantais oblong；
[0020] 图2是本发明统计病情采用的不同级别甜瓜子叶发病示意图，其中，0级：整个子 叶没有病斑；1级：〈25 %子叶有病斑；2级：〈=25%，〈50 %子叶有病斑；3级：〈=50,〈75 子叶有病斑；4级：〈=75%子叶有病斑。