一种酶法合成阿莫西林的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药物的合成方法，具体来说是一种固定化阿莫西林合成酶的筛选 及一种酶法合成阿莫西林的工艺方法。
【背景技术】
[0002] 阿莫西林，本名羟氨苄青霉素，是一种最常用的广谱e-内酰胺类抗生素，具溶菌 作用，主治易感微生物所引起的细菌性感染。阿莫西林服用方便，安全性高，疗效好，不良反 应少，价格低廉，备受医生和患者的青睐。在抗生素类药中，阿莫西林销售额独占鳌头，大约 占世界青霉素类抗生素总销售额的50%。
[0003] 20世纪90年代中期以来，采用酶法合成阿莫西林成为研宄重点。酶法相比化学法 在环保和成本上具有明显的优势。酶法制备阿莫西林的工艺相对流程短，工艺简单，杂质的 带入及产生较少，合成过程中无溶媒及有毒的试剂。
[0004] 在酶法生产阿莫西林的过程中，固定化阿莫西林合成酶的选择是酶法工艺的关 键。固定化阿莫西林合成酶对产品的收率、杂质的含量、产品的澄清度等起着关键的作用。 另外，固定化酶的稳定性决定其使用寿命和生产成本。
【发明内容】
[0005] 针对现有酶法合成阿莫西林工艺中，固定化酶的筛选及评价困难，生产工艺步骤 繁琐、控制点差、反应时间长，转化率低等问题，本发明提供了一种固定化阿莫西林酶，及合 成阿莫西林的新工艺。
[0006] 本发明的内容是通过以下方案通过的：
[0007] 一种酶法合成阿莫西林的工艺，具体步骤如下：
[0008] (1)采用氨基环氧型载体固定化得到固定化阿莫西林酶LK218 ;
[0009] 以戊二醛为交联剂，将假单胞菌（Pseudomonassp.)来源的酰化酶，采用共价法固 定化，得到固定化阿莫西林酶LK218,采用固定化阿莫西林酶LK218催化合成阿莫西林，反 应时间短，产品收率高，纯度高。
[0010] (2)将步骤（1)所得的固定化阿莫西林酶LK218、6-氨基青霉烷酸、D-对羟基苯甘 氨酸衍生物加入至水中搅拌混合，得混合液；
[0011] 6-APA是6-氨基青霉烷酸的英文简写；
[0012] 所述的6-APA与D-对羟基苯甘氨酸衍生物的摩尔比为1/1. 02~1. 05,固定化阿 莫西林酶LK218在反应体系中的浓度为5~20u/mL;
[0013] (3)用3mol/L的盐酸溶液和lmol/L的氢氧化钠溶液调节步骤2)所得的混合液 pH值为6. 2-6. 4,控制混合液温度为10-20°C，反应40-80min，采用HPLC进行跟踪检测，直 至6-APA残留浓度为0-2mg/mL，结束反应；
[0014] 优选反应时间为50-70min，反应过短，转化率低，反应不完全；但反应时间过长， 阿莫西林开始水解。这个反应时间是根据LK218酶考察出来的。
[0015] (4)取步骤3)所得的混合液，通过筛网，分离出反应液和固定化酶；
[0016] 所述的筛网为80-120目，优选90-110目；筛网目数过大，固定化酶就容易从筛网 泄露，目数过小，阿莫西林粗品从筛网放料就较困难；
[0017] (5)反应液用6mol/L的盐酸溶液溶清，再用6mol/L的氨水溶液结晶，养晶，洗涤， 干燥，即得产品阿莫西林。
[0018] 步骤（1)中所述的氨基环氧型载体是苯乙烯系大孔吸附树脂、丙烯酸系大孔吸附 树脂中的一种或两种组合。
[0019] 步骤（2)中所述的D-对羟基苯甘氨酸衍生物选自D-对羟基苯甘氨酸甲酯、D-对 羟基苯甘氨酸乙酯、D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐、D-对羟基苯甘氨酸乙酯盐酸盐中的一 种或多种组合。
[0020] 步骤⑶中所述的6-APA残留浓度为0-lmg/mL。
[0021] 步骤⑷中所述的筛网为80-120目。
[0022] 步骤（5)中所述的用酸溶清pH值为0. 9-1. 1，碱结晶pH为5. 0-5. 2。
[0023] 所述产品的阿莫西林纯度99. 8%以上，澄清度小于0. 5,反应摩尔收率92%以上。
[0024] 本发明将固定化酶投入水相中，每次反应后仅需母液和去离子水清洗即可再用。 6-APA和D-对羟基苯甘氨酸衍生物按比例一次性加入。反应过程中pH值比较稳定。反应 完后，通过筛网放料。整合成过程，工艺简单，操作方便，反应时间短、能耗低、污染少。所得 产品质量好，收率高。因此，本发明是一种高效率的绿色生产工艺。
[0025] 关于本发明的创新点，可以通过下述方面阐述：
[0026] (1)固定化的酶可以回收重复使用，降低了成本。另外固定化的酶性能更稳定。反 应后，更易于分离。此外，还便于运输、储存及自动化操作。
[0027] (2)LK218酶是新研发的品种，现有技术还未使用该产品。另外，与市售类似产品先 比，催化反应过程中，反应时间更短，反应后的阿莫西林产品质量更好，收率更高。
[0028] (3)1)反应时间短，相比市售相似产品，平均反应时间缩短一半；2)产品纯度高， 能达到99. 8%以上；3)收率高，摩尔收率相比目前市售产品，能提高1%;4)澄清度更好，小 于0.5,而市售产品澄清度小于1。
【附图说明】
[0029] 图1为对照品酶催化时6-APA转化率随批次的变化关系；
[0030] 图2为对照品酶代表衰减性能的发白时间随批次的变化关系；
[0031] 图3为LK218酶催化时6-APA转化率随批次的变化关系；
[0032] 图4为LK218酶衰减情况随批次的变化关系。
【具体实施方式】
[0033] 本发明通过比较例和实施例来阐明本发明，但不以任何形式限制本发明。
[0034] 实施例一
[0035] 在反应器中，将1300u的固定化阿莫西林合成酶LK218加入至130mL的去离子水 中，开启搅拌。加入〇? 〇6mol的6-APA和0? 0612mol的D-对羟基苯甘氨酸甲酯。加入氢氧 化钠，调反应pH值至6. 3。保持反应温度为19-20°C。反应55min。将反应液与固定化阿莫 西林合成酶分离。所得产物用盐酸调pH至0. 9-1. 1溶解，过滤，用氢氧化钠调pH值结晶， 终点pH5. 0-5. 2。在0-5°C养晶lh后，洗涤，干燥，得阿莫西林成品。
[0036] 实施例二
[0037] 在反应器中，将1300u的固定化阿莫西林合成酶LK218加入至130mL的去离子水 中，开启搅拌。加入〇? 〇6mol的6-APA和0? 0618mol的D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐。加 入氢氧化钠，调反应pH值至6. 3。保持反应温度为14-15°C。反应65min。将反应液与固定 化阿莫西林合成酶分离。所得产物用盐酸调pH至0. 9-1. 1溶解，过滤，用氢氧化钠调pH值 结晶，终点PH5. 0-5. 2。在0-5°C养晶lh后，洗涤，干燥，得阿莫西林成品。