示，将新鲜铜藻在温度为-40°C的条件下进行冻结，冷冻15天后取出，在室温条件下进行空气解冻直至铜藻中心温度达到1°C后即完成冻融过程；将铜藻放入离心机，于转速为800rpm的条件下离心1min去除水分；通过反复冻融和离心3次，控制铜藻水分含量为90%。称取10g铜藻放入100mL三角烧杯中，加入85% (V/V)乙醇水溶液500mL，用保险膜封住三角烧杯口，避光浸提I小时，过滤。继续向上述浸提处理的铜藻中再次加入85% (V/V)乙醇水溶液500mL，用保险膜封住三角烧杯口，避光浸提I小时，过滤。多次避光浸提直至提取液无色，合并滤液。将上诉滤液于40°C下浓缩，浓缩时当溶液中逐步出现大量沉淀，滤过；滤液继续于40°C下浓缩，直至溶液中析出红色固体，将滤液于5°C低温结晶5h，过滤得红色固体，即为纯度为85%的高纯度岩藻黄素。再向上述滤去岩藻黄素的滤液中加入一定量二氯甲烷进行萃取，直至二氯甲烷层无色；将二氯甲烷层30°C浓缩，直至溶液中有黄绿色固体析出，即为褐藻多酚提取物。
[0019]使用紫外一可见分光光度计对得到的高纯度岩藻黄素和褐藻多酚粗品进行200?700nm全波长扫描，以甲醇做空白参照。结果表明，岩藻黄素甲醇溶液在451.4nm处吸收峰值最大，说明提取的物质为岩藻黄素，岩藻黄素紫外吸收光谱见图2 ;采用Folin-C1calteu比色法对褐藻多酸甲醇溶液进行含量测定，发现反应液在760nm处吸收值最大。使用HPLC对得到的高纯度岩藻黄素进行分析，具体液相色谱见图3，根据HPLC系统自生成报告可知，得到岩藻黄素的纯度可以达到85%，并根据Folin-C1calteu比色法测定马尾藻提取液中褐藻多酚的含量为10%。褐藻多酚紫外吸收光谱见图4，由图可知，褐藻多酚的最大吸收波长分别在248.5和380.7nm。
[0020]实施例2
将新鲜羊栖菜在温度为_5°C的条件下进行冻结，冷冻30天后取出，在室温条件下进行空气解冻直至羊栖菜中心温度达到2°C后即完成冻融过程；将羊栖菜放入离心机，于转速为1000rpm的条件下离心3min去除水分；通过反复冻融和离心5次，控制羊栖菜水分含量为58%。称取10g羊栖菜放入100mL三角烧杯中，加入85%(V/V)乙醇水溶液300mL，用保险膜封住三角烧杯口，避光浸提I小时，过滤。继续向上述浸提处理的铜藻中再次加入85%(V/V)乙醇水溶液300mL，用保险膜封住三角烧杯口，避光浸提I小时，过滤，合并滤液。滤液于40°C下浓缩，浓缩时当溶液中逐步出现大量沉淀，滤过；取上述滤液继续于40°C下浓缩，直至溶液中析出红色固体，将滤液于_5°C低温结晶5h，过滤得红色固体，即为纯度为85%的高纯度岩藻黄素。再向上述滤去岩藻黄素的滤液中加入一定量正己烷进行萃取，直至正己烷层液体无色；将正己烷30°C浓缩，直至溶液中有黄绿色固体析出，即为褐藻多酚提取物。
[0021]使用紫外一可见分光光度计对得到的高纯度岩藻黄素和褐藻多酚提取物进行200?700nm全波长扫描，以甲醇做空白参照。结果表明，岩藻黄素甲醇溶液在451.4nm处吸收峰值最大，说明提取的物质为岩藻黄素；采用Folin-C1calteu比色法对褐藻多酸甲醇溶液进行含量测定，溶液在760nm处吸收峰最大，该结果与褐藻多酚含量测定相关文献的报道一致。使用HPLC系统对得到的高纯度岩藻黄素进行分析，根据HPLC系统自生成报告可知，得到岩藻黄素的纯度可以达到85%，并根据Folin-C1calteu比色法测定马尾藻提取液中褐藻多酸含量为11%。
[0022]实施例3
同上述实施例1，其区别在于:将新鲜铜藻在温度为-80°C的条件下进行冻结，冷冻I天后取出，在室温条件下进行空气解冻直至铜藻中心温度达到0°C后即完成冻融过程；将铜藻放入离心机，于转速为5000rpm的条件下离心5min去除水分；通过反复冻融和离心5次，控制铜藻水分含量为50% ;避光浸提时间为3小时；低温浓缩的温度为15°C ;有机试剂为丙酮；铜藻与有机试剂的比例为10g:400ml。
[0023]实施例4
同上述实施例2，其区别在于:羊栖菜反复冻融和离心4次，控制水分含量为70% ;避光浸提时间为3小时；温浓缩的温度为20°C ;有机试剂为甲醇；羊栖菜与有机试剂的比例为10g:450ml。
[0024]实施例5
同上述实施例2，其区别在于:羊栖菜反复冻融和离心3次，控制水分含量为79% ;有机试剂为60% (V/V)的乙醇水溶液；羊栖菜与有机试剂的比例为10g:500ml
上述海藻除铜藻和羊栖菜外，所述的马尾藻为海蒿子、海黍子、鼠尾藻、匍枝马尾藻、裂叶马尾藻、半叶马尾藻、弱枝马尾藻。
[0025]当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明保护范围。
【主权项】
1.一种从马尾藻中综合提取岩藻黄素和褐藻多酚的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将新鲜马尾藻在温度为-5?-80°C的条件下进行冻结，冷冻I天?30天后取出，在室温条件下进行空气解冻直至马尾藻中心温度达到O?2°C后即完成冻融过程；将马尾藻放入离心机，于转速为800rpm?1000rpm的条件下离心3_10min去除水分； (2)重复上述步骤I?4次后，将有机试剂加入到马尾藻中，避光浸提1-24小时后抽滤，得到浸提液，将马尾藻反复浸提直至浸提液为无色，合并浸提液，待用； (3)将浸提液于15-40°C条件下进行浓缩，直至溶液中出现大量沉淀，过滤除去沉淀得滤液，待用； (4)将滤液于4°C-30°C低温结晶2-72h，过滤即得纯度高于75%的红色固体岩藻黄素； (5)在步骤(4)得到的滤液中加入脂溶性溶剂，进行多次液液萃取直至脂溶性溶剂层无色，合并多次萃取所得脂溶性溶剂层，待用； (6)将上述步骤(5)所得脂溶性溶剂进行低温浓缩，直至溶液中析出黄绿色固体，即为褐操多酸提取物。2.根据权利要求1所述的一种从马尾藻中综合提取岩藻黄素和褐藻多酚的方法，其特征在于:步骤(2)中所述的有机试剂为丙酮、甲醇或60— 99V/V %的乙醇水溶液。3.根据权利要求1所述的一种从马尾藻中综合提取岩藻黄素和褐藻多酚的方法，其特征在于:步骤(5)中所述的脂溶性溶剂为二氯甲烷、正己烷、环己烷、乙醚中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的一种从马尾藻中综合提取岩藻黄素和褐藻多酚的方法，其特征在于:步骤(I)中所述的马尾藻为羊栖菜、海蒿子、海黍子、鼠尾藻、匍枝马尾藻、铜藻、裂叶马尾藻、半叶马尾藻、弱枝马尾藻。5.一种从马尾藻中提取褐藻多酚的检测方法，其特征在于包括以下步骤: (1)称取新鲜马尾藻1.000 g于锥形瓶中，加入50 mL的体积浓度为60%的乙醇水溶液，40 °(:超声提取30 min，过滤至50 mL容量瓶，加入体积浓度为60%的乙醇水溶液定容至50 mL得到马尾藻提取液，待用； (2)量取马尾藻提取液l.0mL，加1.25mL Folin-C1calteu试剂，混匀3min后，加入.4.0mL 0.lg/mL ~&20)3溶液，加水定容至10mL，混匀，30°C避光反应60min，以试剂空白为对照，在760nm波长处测定吸光度；以没食子酸为标准品绘制得到标准曲线，线性回归方程为Y=0.0138X+0.0267，相关系数R2=0.9993，其中X为马尾藻提取液中褐藻多酚的浓度，单位为μ g/mL ;Y为吸光值；计算马尾藻供试液中褐藻多酚的含量，计算公式如下: 褐藻多酸含量(mg/g) = XX V/m X:马尾藻提取液中褐藻多酚浓度(mg/mL); V:马尾藻提取液总体积(mL); m:马尾藻总质量(g)。
【专利摘要】本发明公开了一种从马尾藻中综合提取岩藻黄素和褐藻多酚的方法，包括将新鲜的马尾藻或冰冻保存的马尾藻通过反复冻融和离心过程控制褐藻的水分；将有机试剂加入到海藻中，避光浸提1-24小时后抽滤，得到浸提液，重复操作将海藻反复浸提直至浸提液为无色，合并浸提液，将浸提液于浓缩，直至溶液中出现大量沉淀，过滤除去沉淀得滤液的步骤；将滤液于低温结晶过滤得岩藻黄素的步骤；在滤液中加入脂溶性溶剂，进行多次液液萃取直至脂溶性溶剂层无色，合并多次萃取所得脂溶性溶剂层进行低温浓缩，直至溶液中析出黄绿色固体，即为褐藻多酚提取物，优点是原料利用率和提取效率高，操作简单。
【IPC分类】C07D303/32, G01N21/31, C07G99/00
【公开号】CN105037300
【申请号】CN201510336405
【发明人】张金荣, 周成旭, 严小军, 何山, 陈海敏, 骆其君, 朱鹏, 段海霞
【申请人】宁波大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月17日