一株凝结芽孢杆菌在提升蛋鸡产蛋量上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一株凝结芽孢杆菌在提高蛋鸡在产蛋后 期产蛋量上的应用。
【背景技术】
[0002] 随着生活水平日益提高，人们越来越关注抗生素、化学药品残留所引发的食品安 全和生活健康问题，对无药物残留的绿色畜禽产品的需求越来越多。微生态制剂通过调节 促进正常微生物群生长繁殖、抑制致病菌生长繁殖而发挥作用。因突出的预防和保健效果， 微生态制剂在畜禽养殖中可替代抗生素、化学药品，实现真正的"绿色、无污染"。
[0003] 鸡蛋早已成为人们日常生活的必需品。微生态制剂用在蛋鸡养殖中，可以提高蛋 鸡健康状态、促进产蛋量。CN103518980B报道了一种由植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合所 得到的微生态制剂，使用后，可以提高机体健康程度。CN101715879B报道了一种由酶制剂和 屎肠球菌制备的饲料添加剂，能改善鸡只健康状态，提高产蛋水平。CN103202400B报道了 由干酪乳杆菌、植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌复配的微生态制剂，能改善肉鸡、蛋种鸡生产性 能。这些报道，证明微生态制剂在绿色养殖中大有可为。
[0004] -般来说，鸡群在开产300天后淘汰低产个体，开产500天后产蛋显著下降，必要 时需要更新鸡群。如何提升蛋鸡在产蛋后期的产蛋性能，最大化利用饲料，相关研究很少。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一株凝结芽孢杆菌在提升蛋鸡产 蛋量上的应用。本发明用于蛋鸡养殖中，可显著提升蛋鸡在产蛋后期的产蛋性能：提高产蛋 量、增加产蛋率，降低料蛋比。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] -株凝结芽孢杆菌在提升蛋鸡产蛋量上的应用，所述凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆 菌CCTCCNo.M2011443、地衣芽孢杆菌CCTCCNo.M2012458复配制备得到提升蛋鸡产蛋 量的复合微生态制剂；所述三种菌种的用量分别为：
[0008] 菌种 每克复合微生态制剂含有菌种活菌数 凝结朵泡朴[樹 0.4Xi()s-2.()Xl0loctu 拈A朵泡朴[樹CCTCC No. M 2011443 0.4X i()s-2.0X l0locfu 地衣芽泡杆岗CCTCC No. M 2012458 0.2X 10S-1.0X l010 cfu；
[0009] 其余为填充物；
[0010] 所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans)ZS-007,菌种保藏编号 为CCTCCNo.M2015273,保藏日期为2015年5月3日，保藏地点为中国典型培养物保藏中 心，保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。
[0011] 所述复合微生态制剂有效活菌数为1. 〇X10s-5.OXIO'fu/g，使用量为蛋鸡日采 食量的0. 1% -1%。
[0012] 1、凝结芽孢杆菌的筛选
[0013] 从江苏无锡马山某奶牛养殖场附近的土壤样品称取2g，加入98ml无菌生理盐水， 80°C热处理lOmin后，在37°C摇床上120rpm条件下振荡20min，吸取上清液lml加入LB培 养基中稀释涂布进行菌株分离。通过对菌株进行形态学观察、生理生化实验、16SrDNA分析 等手段有效而准确的确定菌种的属种。
[0014] 最终得到编号为ZS-007的菌种，鉴定为凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans)。
[0015] ZS-007于2015年5月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM 2015273。
[0016]2、凝结芽孢杆菌高密度发酵
[0017] (1)菌种活化
[0018] 将凝结芽孢杆菌菌种接种至营养琼脂斜面培养基上，25-37°C下培养24-48hr;然 后划线转接于营养琼脂茄子瓶斜面，25-37°C下培养24-48hr。
[0019] 营养琼脂斜面培养基及营养琼脂茄子瓶的组成均为：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L， 氯化钠 5g/L，琼脂 15-20g/L，pH7. 2-7. 4。
[0020] ⑵摇瓶培养
[0021] 将活化好的菌种接种至摇瓶中，振荡培养18_30hr。
[0022] 摇瓶培养基配方：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L，pH7. 2-7. 4。250mL摇 瓶装液量为20mL，500mL摇瓶装液量为50mL。
[0023] 培养条件：摇瓶转速200r/min，温度25-37 °C。
[0024] (3)种子罐扩培
[0025] 扩培菌种以用于后期发酵。种子罐培养基组成：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化 钠 5g/L，pH7. 2-7. 4。种子罐体积 10-1000L，装液量 50-80%。
[0026] 培养条件：搅拌转速180-250r/min，通气量0. 5-1.Ovvm，温度25-37°C，培养时间 18-30hr〇
[0027] (4)发酵罐发酵
[0028] 以0. 1% -10 %的接种量将种子液接入发酵罐，发酵培养基组成：葡萄糖25g/L， 蛋白胨15g/L，酵母粉10g/L，磷酸二氢钾lg/L，硫酸镁0. 5g/L，初始pH7. 0。发酵罐体积 1-50m3,装液量 50-80%。
[0029] 培养条件：搅拌转速100-200r/min，通气量0. 5-0. 8vvm，温度25-37°C，培养时间 16-48hr〇
[0030] 取发酵液镜检时，当90%以上的菌体都形成芽孢时，即到发酵终点，得到最终发酵 液。
[0031] 采用平板涂布法测定最终发酵液活菌数和芽孢数，并计算芽孢率。其中，芽孢率 为芽孢数与活菌数的比值。所用培养基为营养琼脂培养基：蛋白胨l〇g/L，牛肉膏3g/L， 氯化钠5g/L，琼脂15-20g/L，pH7. 2-7. 4。测定最终发酵液活菌数时，梯度稀释后测定；测 定芽孢数时，取最终发酵液于80°C热处理10min，梯度稀释后测定。最终发酵液中活菌数 UXlC^cfu/mL以上、芽孢数ljXK^cfu/mL以上、芽孢率90. 8%以上。
[0032] 3、凝结芽孢杆菌干菌粉制备
[0033] 最终发酵液离心后收集湿菌泥，采用喷雾干燥工艺得到干菌粉。操作条件为：进风 温度210°C，出风温度100°C。干菌粉中活菌数8. 0X10ncfu/g以上。
[0034] 本发明有益的技术效果在于：用于蛋鸡养殖中，可显著提升蛋鸡在产蛋后期的产 蛋性能：产蛋量增加11 %以上、产蛋率增加9. 2%以上，料蛋比降低10%以上。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例，对本发明进行具体描述。
[0036] 实施例1
[0037]1、凝结芽孢杆菌的筛选
[0038] 从江苏无锡马山某奶牛养殖场附近的土壤样品称取2g，加入98ml无菌生理盐 水，80°C热处理lOmin后，在37°C摇床上120rpm条件下振荡20min，吸取上清液lml加入LB 培养基中稀释涂布进行菌株分离。