利用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物的培养技术领域，尤其涉及利用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法。
【背景技术】
[0002]光合细菌是一类以光作为能源、在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。自然环境下，光合细菌分布较为广泛，可从土壤、水沟和污泥等环境中通过厌氧富集方式获得具光合细菌的混合菌液。现有的光合细菌纯化方法，如半固体试管法、Hungate滚管法、双层平板法等，存在着操作方法相对复杂、试验重复性差、挑菌难度高或难形成单菌落等方面缺陷；而通过厌氧装置或设施培养厌氧菌，其设备费投入又相对较大。
【发明内容】
[0003]本发明针对现有技术的缺点，公开了利用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。
[0005]利用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法，其特征在于:包括以下步骤，
[0006]A.配制光合细菌分离培养基，灭菌后浇成平板；
[0007]B.用灼烧后的接种环蘸取菌悬液，划线接种于平板上；
[0008]C.将平板装入厌氧袋中，置光照下倒置培养，获得光合细菌菌落；本发明使用厌氧袋提供低氧条件，无需厌氧设备投入，节约了科研成本；且运用本发明方法制得的菌落，易形成单菌落，挑菌方便。本发明利用划线平板法进行光合细菌接种，方法简单，容易操作，重复性高，易形成单菌落。
[0009]D.用接种环挑取单菌落，反复步骤C的方法分离培养，得到纯的光合细菌。
[0010]本发明分离纯化光合细菌的方法操作简单，试验重复性好，挑菌方便，易形成单菌落。本发明使用厌氧袋提供低氧条件，无需投入厌氧设备，节约了科研成本。
[0011]作为优选，步骤A中分离培养基组分和配比为=CH3COONa 2?5g，CH3CH2COONa0.2 ?0.5g，NaCl 0.5 ?3g，NH4Cl I ?3g，MgCl20.1 ?0.3g，NaHCO3I ?2.5g，K2HPO40.1 ?lg，CaCl20.01?0.2g，酉孝母膏0.05?0.2g，无水乙醇0.1?1ml，琼脂15?25g，蒸馈水100ml ο该配比的分离培养基，易形成单菌落，挑菌方便；且方法简单，容易操作，重复性高。
[0012]作为优选，步骤B中，划线接种采用五区划分法。
[0013]作为优选，五区划分法，包括以下步骤:将蘸有菌悬液的接种环伸入平板内划3?5条平行线，灼烧接种环冷却后，接种环蘸取菌悬液从第一区划线末端开始向第二区划线，重复上述过程完成第三区、第四区、第五区划线，第三区、第四区、第五区的划线均与第一区的划线不相连。
[0014]作为优选，步骤C中，厌氧袋为内置吸氧试剂的透明塑料袋，且厌氧袋为不透气厌氧袋。
[0015]作为优选，厌氧袋内设有氧气指示剂。
[0016]作为优选，步骤C中，光照采用钨丝灯、太阳光、日光灯中的一种或两种。
[0017]作为优选，步骤C中，光合细菌培养过程中，温度控制在25?35°C，光照强度控制在1000?5000Lx，培养时间为2?7天。
[0018]与现有技术相比，本发明的有益效果为:本发明利用划线平板法进行光合细菌接种，在密闭、低氧和透明的厌氧袋进行光照培养，方法简单，容易操作，重复性高，易形成单菌落，且费用相对较低，节约了科研成本。
【具体实施方式】
[0019]实施例1
[0020]用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法，包括以下步骤，
[0021]A.配制光合细菌分离培养基，灭菌后浇成平板；
[0022]B.用灼烧后的接种环蘸取菌悬液，划线接种于平板上；
[0023]C.将平板装入厌氧袋中，置光照下倒置培养，获得光合细菌菌落；
[0024]D.用接种环挑取单菌落，反复步骤C的方法分离培养，得到纯的光合细菌。
[0025]实施例2
[0026]用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法，包括以下步骤，
[0027]A.配制光合细菌分离培养基，灭菌后浇成平板；
[0028]B.用灼烧后的接种环蘸取菌悬液，划线接种于平板上；
[0029]C.将平板装入厌氧袋中，置光照下倒置培养，获得光合细菌菌落；
[0030]D.用接种环挑取单菌落，反复步骤C的方法分离培养，得到纯的光合细菌。
[0031]步骤A 中分离培养基组分和配比为:CH3C00Na 2g，CH3CH2COONa 0.2g，NaCl 0.5g，NH4Cl lg，MgCl20.lg，NaHCO3Ig,K2HPO40.lg，CaCl20.01，酵母膏 0.05g，无水乙醇 0.1ml，琼脂15g，蒸饱水 1000ml。
[0032]步骤B中，划线接种采用五区划分法。五区划分法，包括以下步骤:将蘸有菌悬液的接种环伸入平板内划3条平行线，灼烧接种环冷却后，接种环蘸取菌悬液从第一区划线末端开始向第二区划线，重复上述过程完成第三区、第四区、第五区划线，第三区、第四区、第五区的划线均与第一区的划线不相连。
[0033]步骤C中，厌氧袋为内置吸氧试剂的透明塑料袋，且厌氧袋为不透气厌氧袋。步骤C中，光照采用25W钨丝灯。步骤C中，光合细菌培养过程中，温度控制在25°C，光照强度控制在lOOOLx，培养时间为5天。
[0034]实施例3
[0035]用厌氧产气袋分离纯化光合细菌的方法，包括以下步骤，
[0036]A.配制光合细菌分离培养基，灭菌后浇成平板；
[0037]B.用灼烧后的接种环蘸取菌悬液，划线接种于平板上；
[0038]C.将平板装入厌氧袋中，置光照下倒置培养，获得光合细菌菌落；
[0039]D.用接种环挑取单菌落，反复步骤C的方法分离培养，得到纯的光合细菌。
[0040]步骤A 中分离培养基组分和配比为:CH3C00Na 2g，CH3CH2COONa 0.2g，NaCl 0.5g，NH4Cl lg，MgCl20.lg，NaHCO3Ig,K2HPO40.lg，CaCl20.01，酵母膏 0.05g，无水乙醇 0.1ml，琼脂15g，蒸饱水 1000ml。
[0041]步骤B中，划线接种采用五区划分法。五区划分法，包括以下步骤:将蘸有菌悬液的接种环伸入平板内划3条平行线，灼烧接种环冷却后，接种环蘸取菌悬液从第一区划线末端