一株对老挝拟棘天牛具有致病力的绿僵菌菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物防治领域，涉及一种绿僵菌菌株及其应用，具体地说是涉及一株 对老挝拟棘天牛具有高致病力的绿僵菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 老扭拟棘天牛AfeacanisteJaoseasis(Breuning, 1965)comb.nov.，曾命名 为短长角天牛JaoseasisBreuning，2015年Huang等将其归到拟棘天 牛属命名为老挝拟棘天牛。该虫是壳斗科植物罗浮栲、甜楮等上的一种重要 蛀干害虫，发生严重的一株树有上百头幼虫群聚蛀食树干边材，在树干或韧皮部来回蛀害， 造成大量的水分和营养物质输送中断，且其可与红腹柄天牛/We>ra?aiMii 共同发生，寄主植物一旦遭受危害，轻者会引起风折，严重的将造成整株死亡。 由于该天牛生活的隐蔽性，在危害初期，不易被发现，加大了监测和防治难度，一旦出现明 显的被害状，已失去有利的防治时机，树木再难恢复生机。目前该虫在福建德化戴云山自然 保护区等地已造成严重危害。而在自然保护区等特殊生态区位，为避免环境污染，保护生物 多样性，不宜采取过多的化学防治。因此，探寻适宜的无公害防治手段显得十分必要与迫 切。
[0003] 绿僵菌是目前应用最为广泛的杀虫真菌之一，因其具有寄主范围广、致病力强，效 果好，对人、畜、作物无毒害，在农林害虫的防治上应用十分广泛。然而，绿僵菌寄主范围虽 广，但研究发现不同地理、寄主来源的菌株对靶标害虫的致病力差异十分显著，不同菌株对 靶标害虫的致死中时（LT5。）可相差数倍，甚至数十倍，因此，针对不同害虫筛选出致病力强 的菌株是利用绿僵菌生物防治害虫的基础。因此，本发明提供了一株对老挝拟棘天牛幼虫 具有高致病力的绿僵菌菌株，并进行了林间应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一株对老挝拟棘天牛幼虫具有高致病力的绿僵菌菌株及其 应用。
[0005] 一株绿僵菌，为金龟子绿僵菌FJMa200902菌株，已于 2015年3月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（ChinaGeneral MicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路 1 号院3号；保藏编号：CGMCCNo. 10642。
[0006]该金龟子绿僵菌FJMa200902具有以下特征： 该菌株从福建省泉州市鲤城区松林中采集的天牛僵虫体上分离得到。保存方式为低温 斜面保存。在PPDA培养基上25 ±1°C下生长5天，菌落直径32mm，15天达64mm。菌落初期 为白色，质地绒毛状或棉絮状，逐渐扩大；孢子深绿色粉末状，呈环形分布；孢子分布较均 匀，菌落边缘孢子呈绿色。菌丝分枝，有格，无色光滑，宽2. 3ym~3. 2ym，分生孢子梗单生 或分枝，分枝顶端具2~5个柱状的产孢细胞，其上产生向基式的分生孢子链。分生孢子单细 胞，长椭圆形，表面光滑，大小为4. 8~6. 8ymX1. 9-2. 9ym。最佳生长温度范围为24~28°C。
[0007] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供用于防治老挝拟棘天牛幼虫的菌剂。
[0008] 本发明所提供的菌剂具体为分生孢子悬浮液，其浓度为107孢子/ml。
[0009] 本发明所提供菌剂的有效成分是上述金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae) FJMa200902的分生孢子。
[0010] 本发明所提供的菌剂中的分生孢子来源于以上述金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae)FJMa200902菌株为菌种经固体发酵培养得到。
[0011] 本发明所提供的或所述菌剂可用于防治老挝拟棘天牛幼虫。
[0012] 本发明提供的金龟子绿僵菌FJMa200902具有如下有 益效果： 生产性状好，产孢能力强，同时对老挝拟棘天牛幼虫的致病力强，采用浓度为1〇7孢子/ml的孢子悬浮液浸渍法接种8天后，幼虫死亡率达100%，致死中时（LT5。)为3. 6天，感染率 为100% ;使用该菌株为菌种，经液体发酵，接种于麦麸、谷壳和米粉组成的固体培养基进行 固体发酵8~10天，产孢量可达8X109孢子/g发酵产物，配制成孢子悬浮液喷洒在寄主植 物树干上，能显著降低老挝拟棘天牛幼虫种群数量，虫口减退率达80%以上。适合在老挝拟 棘天牛发生林分中应用。
[0013] 菌种名称：金龟子绿僵菌 学名-.Metarhiziumanisopliae菌株编号：FJMa200902 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 保藏机构简称：CGMCC 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 保藏日期：2015年3月19日 保藏中心登记入册编号：CGMCCNo. 10642。
【附图说明】
[0014] 图1为金龟子绿僵菌FJMa200902菌株在PPDA培养基上25± 1°C下培养15天的 菌落形态图。
[0015] 图2为老挝拟棘天牛幼虫和老挝拟棘天牛幼虫被绿僵菌FJMa200902感染症状。
[0016]
【具体实施方式】
[0017]以下结合具体实施例，对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，这些实施例用于 理解而不是限制本发明的范围。
[0018] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0019] 下述实施例中所用的试剂、材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0020] 下述实施例中的PPDA培养基是指蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基的英文缩写， 其具体配方为每l〇〇〇ml水中含有马铃薯200g(切块煮熟后过滤，取滤液)，葡萄糖20g，蛋 白胨l〇g，琼脂20g。
[0021] 实施例1 金龟子绿僵菌ani^OjC^iaeOFJMaSOOgO〗的形态学 将分离纯化的绿僵菌菌株在直径为90mm的平板PPDA培养基上使用点接法接种后，于 25土 1°C条件下培养，4-5天后挑取菌丝制片在显微镜下观察菌株的菌丝和分生孢子梗形 态；10-12天后挑取成熟分生孢子制片观察分生孢子的形态与大小。15天左右观察记录菌 落形态特征。该菌株菌落质地棉絮状，菌落初期为白色，逐渐扩大，其上产生暗绿色分生孢 子并成轮环状、射线状分布。菌丝分枝，有格，无色光滑，宽2. 3ym~3. 2ym，分生孢子梗单 生或分枝，分枝顶端具2~5个柱状的产孢细胞，其上产生向基式的分生孢子链。分生孢子单 细胞，长椭圆形，表面光滑，大小为4. 5~6. 8ymX1. 8-2. 9ym。
[0022] 金龟子绿僵菌（ifetarAizii/a? FJMa200902 已于 2015 年 3 月 19 日保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，登记入册编号为CGMCC No.10642。
[0023] 实施例2 绿僵菌（ifcterAiziwa?ani^OjC^iaeOFJMaSOOgO〗的生物学特性 用点滴法将金龟子绿僵菌（ifeterAiziwa? FJMa200902接种于PPDA平板 培养基中央，置于25土rc培养箱中培养，用十字交叉法每天测量1次菌落直径，每处理设 3个平板(重复)，共观察15天。同时记录开始产孢时间，第15天(产孢基本结束）用直径为 1. 5cm的打孔器，于菌落中心至边缘1/2处打取小菌碟，取出菌碟置于含30mL的0. 3%。吐 温-80无菌水的锥形瓶内，振荡使孢子充分分散并适当稀释，血球计数板测定孢子浓度并 换算成单位面积的产孢量。每个平板测定3块菌碟，取其平均值作为1个重复的孢子数。
[0024]表 1 金龟子绿僵菌FJMa200902 生物学特性
由表1可见，金龟子绿僵菌（aniso/^iaeOFJMaSOOgO〗菌落生长较快，5天 菌落直径为32mm，15天菌落直径达64mm，生长4天后菌落上开始出现绿色孢子，产孢量为 1. 4X10s孢子/cm2。
[0025] 实施例3 金龟子绿僵菌afliso/^iaeOFJMaSOOgO〗对老挝拟棘天牛幼虫的致病力 测定 配制一定量的〇. 03%吐温-80溶液，然后高温灭菌，冷却后备用。从PPDA平板上刮取 一定量金龟子绿僵菌（#eFJMa200902孢子置于上述溶液中，配制 成107孢子/mL的孢子悬浮