一种从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法
【专利说明】一种从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法
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技术领域本发明属于熊果酸提取技术领域，具体涉及一种从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法。
[0002]【背景技术】木瓜(Fructus Chaenomelis)为《中国药典》2010年版(一部)收载品种，是蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles spec1sa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实。味酸、温，归肝、脾经。具有平肝舒筋，和胃化湿的功效。主治湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，暑湿吐泻，转筋挛痛，脚气水肿等症。随着中药药理学研究的深入，发现木瓜具有多种生理活性，已报道的主要药理活性成分包括三萜类、有机酸类、黄酮类以及鞣质等。主要的三蔽类成分为五环三蔽类化合物，包括齐墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、3-0-乙酰基熊果酸(3-0-acetylursolicacid)、3_0-乙酰坡模醇酸(3-0-acetyl pomolicacid)和桦木酸(betulinic acid)等。木瓜中的其它成分，有机酸种类较多，主要有苹果酸(malic
acid)、绿原酸(chlorogenic acid)、咖啡酸(coffeic acid)、梓檬酸(citric acid)、莽草酸(shikimate)、奎宁酸(quinic acid)、曲酸(ko jic acid)、琥?白酸(succinicacid)、乙酸(acetic acid)、正葵酸(n-caproic acid)、棕榈酸(palmitic acid)、亚麻酸(顺-9，12-十八碳二稀酸，linolenic acid)、硬脂酸(stearic acid)、绿原酸甲酯(chlorogenic acid methyl ester)、绿原酉爱乙酉旨(chlorogenic acid ethylester)、绿原酸丁酯(chlorogenic acid-n-butyl)等等。黄酮类成分主要为槲皮素等。縣质类成分主要为原儿茶酸(protocatechuic acid)、没食子酸(gallic acid)等。木瓜中富含的熊果酸也称乌索酸，乌苏酸，广泛存在于特定科属的叶和果实中，具有清热、抗炎、强心、降血糖、降血脂、抑制变态反应、利胆和退黄等活性，为保肝良药，可用于预防和治疗肝病、风湿、霍乱、痢疾、肠炎、脚气等疾病。近年来随着化妆品、保健品产业的发展，齐墩果酸和熊果酸又应用于美容护肤化妆品、保健品行业中。鉴于其独特的临床效果、重要的经济价值及广泛的应用前景，一种从天然植物中采取经济、快速、适合于工业化生产的提取熊果酸的方法就显得尤为重要。中国专利公告号为CN103054972和CN102276682的专利都公开了提前熊果酸的方法，但在提取纯度和提取工艺步骤上还是存在一定弊端。
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【发明内容】
本发明的目的是提供一种可经济、快速、适合于工业化生产的从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法，以弥补现有技术的不足。
[0004]为了实现上述目的，本发明一种从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法，按下述步骤进行:
1)将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，并切成丝在30-65°C下干燥0.5-2.5h后备用；
2)将步骤I)制得的干木瓜丝加入9-11倍量的浓度为70-90%的乙醇置于回流装置内并加热至70-90°C进行回流蒸煮，回流反应时间为0.5-1.5h，重复回流提取三次，将三次提取的滤液合并备用；
3)将步骤2)提取的滤液于70-90°C的温度加热0.25-0.75h去除乙醇，得稀浸膏；
4)将浸膏放入搅拌罐中，加入1-3倍量的蒸馏水充分搅匀，置于2-6°C的冷藏环境中静置沉淀7-9h后滤除上清液；
5)在步骤4)剩余的沉淀物中加入1-2倍量的乙醇搅拌至充分溶解，缓慢滴入浓度为8-12%的NaOH并不断搅拌，调节pH值为8_9后停止滴入，放入15-30微米滤网的过滤器中过滤；
6)在步骤5)提取的滤液中加入0.25-0.75倍量的活性炭加热至70-90°C回流20-40分钟后，自然冷却至15-25°C过滤得滤液备用；
7)向滤液中缓慢滴入浓度为1-2%的盐酸并不断搅拌，调节pH值为5-6后停止滴入，并加热至70-85°C回收乙醇，待自然冷却至15-25°C时，加入等量的蒸馏水过滤静置沉淀；
8)滤除液体，将沉淀物在0°C的温度中减压至700-800汞柱，减压时间为0.5-lh ;
9)将减压后的沉淀物于40-50°C的温度中干燥l_3h后，粉碎得到粗提取物；
10)将步骤9)所得粗提取物用石油醚和丙酮的混合液进行洗脱，洗脱时以2-3倍柱体积的石油醚和丙酮的混合液以每小时1-2倍柱体积的流速进行洗脱，石油醚和丙酮的比例为 5:1 ;
11)将洗脱液在45-65°C干燥l_2h即得。
[0005]本发明提供的提取方法可得到有效成分含量较高的提取物，熊果酸的纯度在90%以上，可直接用于药物制剂的制备。
[0006]本发明一种从鲜木瓜果实中提取熊果酸的方法，主要经过洗净切丝干燥、回流提取、过滤沉淀、精滤、活性炭吸附、减压干燥、硅胶柱色谱分离、洗脱液过滤烘干的步骤，可以快速、安全的提取熊果酸，经济性好，适合于工业化生产的需要，无需大型设备，用硅胶柱色谱进行洗脱，提取时间短，生产效率高，可保证熊果酸最大限度的快速游离出来，得到高纯度的熊果酸晶体；而且该提取方法工艺步骤简单，条件温和，具有广阔的工业应用价值，适宜于大规模生产。
【具体实施方式】
[0007]
实施例一
将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，并切成丝在60°C的环境下干燥Ih后备用；将干木瓜丝加入10倍量的浓度为80%的乙醇置于回流装置内并加热至75°C进行回流蒸煮，回流反应时间为1.5h，重复回流提取三次，将三次提取的滤液合并备用；将提取的滤液于80°C的温度加热0.5h去除乙醇，得稀浸膏；将稀浸膏放入搅拌罐中，加入2倍量的蒸馏水充分搅匀20分钟，置于4°C的冷藏环境中静置沉淀Sh后滤除上清液；在剩余的沉淀物中加入1.5倍量的乙醇搅拌至充分溶解，缓慢滴入浓度为10%的NaOH并不断搅拌，调节pH值为8.5后停止滴入，并放入精密过滤器中过20微米进行精滤；之后，在滤液中加入0.5倍量的活性炭加热至80°C回流提取35分钟后，自然冷却至20°C过滤，得滤液备用；向滤液中缓慢滴入浓度为1%的盐酸并不断搅拌，调节PH值为5.5后停止滴入，并加热至80°C回收乙醇，待自然冷却至20°C时，加入等量的蒸馏水过滤静置沉淀；滤除液体，将沉淀物在0°C的温度中减压至750汞柱，减压时间为0.5h ;将减压后的沉淀物于45°C的温度中干燥1.5h后，粉碎得到粗提取物；将所得粗提取物用石油醚-丙酮(5:1)的混合液进行洗脱，洗脱时以2.5倍柱体积的石油醚和丙酮的混合液以每小时1.5倍柱体积的流速进行洗脱；将洗脱液在55°C干燥Ih后即得。
[0008]熊果酸含量的测定采用双波长薄层扫描法
取实施