索非布韦的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及Sofosbuvir的制备方法。
【背景技术】
[0002] 丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（HCV)感染引起 的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等传播，据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约 为3 %，估计约1. 8亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3. 5万例。丙型肝炎呈全球性 流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC)。 未来20年内与HCV感染相关的死亡率（肝衰竭及肝细胞癌导致的死亡）将继续增加，对患 者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。
[0003] HCV病毒体呈球形，直径小于80nm(在肝细胞中为36~40nm，在血液中为 36-62nm)，为单股正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。HCV仅有 Huh7,Huh7. 5,Huh7. 5. 1三种体外细胞培养系统，黑猩猩可感染HCV，但症状较轻。HCV-RNA 大约有9500 -lOOOObp组成，5'和3'非编码区（NCR)分别有319-341bp，和27-55bp，含 有几个顺向和反向重复序列，可能与基因复制有关。在5'非编码区下游紧接一开放的阅 读框（0RF)，其中基因组排列顺序为5' -C-El-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3'，能编码一长度 大约为3014个氨基酸的多聚蛋白前体，后者可经宿主细胞和病毒自身蛋白酶作用后，裂解 成10种病毒蛋白，包括三种结构蛋白，即分子量19KD的核衣壳蛋白（或称核心蛋白，Core) 和两种糖蛋白（分子量为33KD的El蛋白，分子量72Kd的E2蛋白），p7编码一种膜内在蛋 白，其功能可能是一种离子通道。非结构蛋白部分则包括NS2,NS3，NS4A，NS5A和NS5B，非 结构蛋白对比病毒的生活周期非常重要。NS2和NS3具有蛋白酶活性，参与病毒多聚蛋白 前体的切割。此外，NS3蛋白还具有螺旋酶活性，参与解旋HCV-RNA分子，以协助RNA复制， NS4的功能尚不清楚。NS5A是一种磷酸蛋白，可以与多种宿主细胞蛋白相互作用，对于病毒 的复制起重要作用。而NS5B则具有RNA依赖的RNA聚合酶活性，参与HCV基因组复制。
[0004] 在治疗前应明确患者的肝脏疾病是否由HCV感染引起，只有确诊为血清HCVRNA阳 性的丙型病毒性肝炎患者才需要抗病毒治疗。抗病毒治疗目前得到公认的最有效的方案 是：长效干扰素PEG-IFNa联合应用利巴韦林，也是现在EASL已批准的慢性丙型病毒性肝 炎治疗的标准方案（S0C)，其次是普通IFNα或复合IFN与利巴韦林联合疗法，均优于单用 IFNa。聚乙二醇（PEG)干扰素a(PEG-IFNa)是在IFNa分子上交联无活性、无毒性的 PEG分子，延缓IFNa注射后的吸收和体内清除过程，其半衰期较长，每周1次给药即可维持 有效血药浓度。
[0005] 直接作用抗病毒药物（DAA)蛋白酶抑制剂博赛匹韦（B0C)或特拉匹韦（TVR)，与干 扰素联合利巴韦林的三联治疗，2011年5月在美国开始批准用于临床，推荐用于基因型为1 型的HCV感染者，可提高治愈率。博赛匹韦（B0C)饭后，每天三次（每7-9小时），或特拉匹 韦（TVR)饭后（非低脂饮食），每日三次（每7-9小时）。期间应密切监测HCVRNA，若发生 病毒学突破（血清HCVRNA在最低值后上升>1log)，应停用蛋白酶抑制剂。
[0006] 2013年FDA批准吉利德公司Sofosbuvir作为联合抗病毒治疗方案的一部分，用于 治疗慢性丙肝感染。Sofosbuvir是一种丙型肝炎病毒复制所必需的HCVNS5BRNA-依赖 RNA聚合酶的抑制剂。Sofosbuvir是一类核苷氨基磷酸酯（S)-异丙基-2- ((S) - (((2R，3R，4 R，5R) -5- (2, 4-二氧-3, 4-二氢嘧啶-1 (2H)-基）-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基） 甲氧基）（苯氧基）膦酰基）氨基）丙酸酯的新型制备方法，此类核苷氨基磷酸酯为RNA-依 赖性RNA病毒复制的抑制剂，并且可用作HCVNS5B聚合酶抑制剂、HCV复制的抑制剂，以及 用于治疗哺乳动物中丙型肝炎的感染。
[0007] 该药是一种核苷酸前药在细胞内进行代谢形成药理学活性尿嘧啶类似物三磷酸 (GS-461203)，通过NS5B聚合酶可掺入至HCVRNA和作用如同链终止物。在一个生化分析 中，GS-461203抑制来自HCV基因lb，2a，3a和4a型重组NS5B的聚合酶活性，有IC50值范 围从0. 7至2. 6μM。GS-461203不是人类DNA和RNA聚合酶的抑制剂也不是线粒体RNA聚 合酶的抑制剂。
[0008] 吉利德公司表示，Sovaldi可以单用也可与利巴韦林联合使用。作为一种传统的 抗感染药，利巴韦林适用于伴有2型和3型基因感染的患者治疗，属于这两种基因型的感 染者约占美国丙肝患者的近30%，而70%则归于1型基因感染者，在美国占比最大，且干 扰素治疗不适用于该类患者，但对于此次的新型抗感染药而言，Sovaldi联用利巴韦林和 干扰素能起到一定的治疗效果。另外，虽然属于4型基因的感染者占比极小，但上述的三 药联合方案仍可用于该类型感染的治疗。据多项研究结果表明，相较于目前的治疗方案， 吉利德的这种抗感染药在清除率占优的同时，不良反应也较少。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种式（I)化合物的制备方法，式（I)化合物的tf-NMR 数据如附图1所示。
[0010]
[0011] P#表示手性磷原子
[0012] (1)使原料A和原料B在合适的路易斯酸和碱的作用下反应以获得化合物C的混 合液；其中原料A结构式中的LG代表离去基团；
[0013] (2)将化合物C的混合液进行后处理以得到纯净的化合物C，
[0014]
[0015] 优选的，所述后处理包括色谱分析、萃取、结晶、打浆。
[0016] 优选的，所述离去基团LG选自苯酚类，羟基吡啶类，羟基喹啉类，羟基三唑类，咪 唑类或萘酚类化合物的离去基团。
[0017] 更优选的，当离去基团LG为苯酚类时，所述离去基团选自五氟苯氧基，4-硝基苯 氧基，2, 4-二硝基苯氧基或4-氯苯氧基。
[0018] 更优选的，当离去基团LG为羟基吡啶类时，所述离去基团选自2-羟基-6-氯吡 陡，2-羟基氣啦陡，2 -羟基氣啦陡，3-羟基氣啦陡，4-羟基氣啦陡或 3-溴-5-羟基吡啶。
[0019] 优选的，该反应使用的溶剂是无水THF。
[0020] 优选的，所述路易斯酸基本是无水的。
[0021 ] 更优选的，所述路易斯酸选自氯化锌、溴化锌、氯化铝或氯化镁。
[0022] 优选的，反应所使用的碱基本是无水的。
[0023] 更优选的，所述碱选自N，N-二异丙基乙基胺（DIEA)、1，8-二氮杂双环[5.4.0] 十一碳-7-烯（DBU)、三乙胺、叔丁醇钾或N-甲基吗啉。
[0024] 优选的，原料A:原料比B:路易斯酸：碱的摩尔比约为1. 4-2. 2 :1 :1. 2-1. 8 : 1. 2-1. 8,优选 2 :1 :1. 6 :1· 6。
[0025] 优选的，所述反应的温度控制在45-60 °C。
[0026] 进一步优选的，本发明的制备方法具体包括：
[0027] (1)将原料A、原料B、路易斯酸和碱一起投入到反应瓶中，再加入适量无水THF，油 浴内反应至少20小时；
[0028] 反应完成后，降至室温；
[0029] 加入适量乙酸乙酯稀释反应液，加入适量饱和NH4C1溶液淬灭，萃取，有机相用适 量稀酸洗，萃取，有机相用碱洗，萃取，有机相用缓冲溶液洗，萃取，有机相用适量盐水洗，旋 干有机相，得到化合物C的第一粗品；
[0030] 在得到的化合物C的第一粗品中加入适量二氯甲烷/甲苯=1/1的混合溶液析 晶，过滤，得到化合物C的第二粗品；
[0031] 在得到的化合物C的第二粗品中加入适量乙酸乙酯/二氯甲烷=1/5的混合溶液 打浆，得到纯的化合物C。
[0032] 优选的，所述缓冲液为碱金属碳酸盐/碱金属碳酸氢盐的缓冲液。
[0033] 进一步优选的，本发明的制备方法包括：
[0034] 将原料A、原料B、路易斯酸和碱一起投入到反应瓶中，再加入10V无水THF，放置在 55°C的油浴内反应20小时；
[0035] 用TLC检测，反应完成，自然降温到室温；
[0036] 加入20V乙酸乙酯稀释反应液，加入20V饱和NH4C1溶液淬灭，萃取，有机相用20V 稀盐酸（0. 5N)洗，萃取，有机相用2V饱和碳酸氢钠洗，萃取，有机相用2X20V碳酸钠（5 % ) 和碳酸氢钠（5% )缓冲溶液洗，萃取，有机相用2X20V食盐水洗，旋干有机相，得到C的第 一粗品（油状物）；
[0037] 在得到的C的第一粗品中加入10V二氯甲烷/甲苯=1/1的混合溶液析晶，过滤， 得到C的第二粗品（白色固体）；
[0038] 在得到的C的第二粗品中加入10V乙酸乙酯/二氯甲烷=1/5的混合溶液打浆， 得到纯的C。
[0039] 本发明通过摸索影响化合物C制备的各种影响因素，首创性的利用路易斯酸以及 常用的有机碱作为反应助剂来制备索非布韦，该反应是路易斯酸通过配位来活化磷氧双 键，降低P*手性中心的空间位阻，利于原料A中卤代羟基吡啶基团的离去，剩下的片段与原 料B发生了亲核取代反应。现有技术曾使用2. 1当量的叔丁基氯化镁和原料B在0°C下反 应，形成亲核力较强的氧负离子，再发生亲核取代反应生成成品。
[0040] 与现有技术路线相比，本发明有以下优势：
[0041] 1)反应条件温和，过程易控，避开了使用叔丁基氯化镁那样易燃易爆的强碱，降低 了反应的危险性；
[0042] 2)生产成本低，相比于现有技术的工艺，本发明使用的路易斯酸和有机碱价格低 廉，易得；
[0043] 3)操作简单，本发明只需将各原料在常温下加在一起再加热反应即可，即"一锅 煮"法，相比于现有技术在低温下分步投料更简便高效；
[0044] 4)本发明后处理简单，无须中和过量的强碱，单位产品排放的废弃物少。综上所 述，本方法能够达到反应温和、成本低、操作简单及环境友好的效果。
[0045] 在此基础上，发明人进一步的研究，发现通过对化合物A离去基团的筛选能够更 好地促进化合物C的制备效果，发明人最终选定了多种