绣线菊阿替生素A（spiratisanin A）及其制备方法和在药物上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化合物和药物学领域，具体地，涉及一种新的化合物绣线菊阿替 生素 A(spiratisanin A)，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及该化合 物及其药物组合物在制备治疗肿瘤的药物方面的应用。
【背景技术】
[0002] 粉花绣线菊（Spiraea japonica)为蔷薇科（Rosaceae)绣线菊属（Spiraea)直立 灌木，高可达1. 5米；原产日本和朝鲜半岛，中国大部地区有引种栽培。该植物的特征性化 学成分为二萜类化合物
[0003] 肿瘤是指细胞在致瘤因素作用下，基因发生改变，失去对细胞生长的正常调控，导 致异常增生。肿瘤可分为良性和恶性肿瘤两大类，后者生长迅速，可转移到身体其它部位， 破坏正常器官结构和功能，威胁生命。
[0004] 对肿瘤的治疗手段主要包括外科手术、放射疗法、化学疗法。近年随着纳米分子 医学和分子生物学技术的突飞猛进，肿瘤发生机制的阐述、抗肿瘤靶点的寻找、新型抗肿瘤 药物的开发以及治疗手段的创新和综合运用都有了长足的进步，肿瘤患者生存时间明显延 长。但是，严重威胁人类生命健康的占恶性肿瘤90%以上的实体瘤的治疗尚未达到满意的 疗效，仍有大量肿瘤患者因对治疗无反应或耐药而最终导致治疗失败。因此，发现并开发新 型抗肿瘤药物仍然是人们所要持续面对的问题。
[0005] 现有技术中未见本发明所涉及的式（I)化合物绣线菊阿替生素 A(spiratisanin A)及其作为有效成分在治疗肿瘤方面的报道，以及该化合物具有抗肿瘤活性的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种具有药用价值的绣线菊阿替生素 A(spiratisanin A) 〇
[0007] 本发明的另一目的是提供一种从粉花绣线菊（Spiraea japonica)植物体中提取 本发明化合物的方法。
[0008] 本发明的进一步目的是提供一种以式I化合物为活性成分的用于治疗和预防肿 瘤的药物组合物，及该化合物和组合物在制备治疗肿瘤的药物方面的应用。
[0009] 为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
[0010] 用于治疗肿瘤的药物，其中含有治疗肿瘤有效量的式I化合物及可药用载体和/ 或赋形剂。
[0011]
[0012] 本发明化合物绣线菊阿替生素 A(spiratiSanin A)可以转化为药学上可接受的衍 生物。如通过酯的水解反应，去掉肉桂酰基，得到化合物母核，或继续在母核上引入其他的 化学基团（如香豆酰基，阿魏酰基，异阿魏酰基）；羟基可采用公知方法进行酰化（如甲酰 化，乙酰化、苯甲酰化、磺酰化）、卤化、氧化或者脱水引入双键。
[0013] 本发明化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药 物组合物含有〇. 1~99%，优选为0. 5~90%的本发明化合物，其余为药物学上可接受的 盐，或对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0014] 所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以 及药物制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经 口服和注射（静注、肌注）两种形式给药。
[0015] 口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。
[0016] 注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。
[0017] 为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的式I化合物的生物活性结果来 说明它在医药领域中的应用。
[0018] MTT法细胞活性检测：
[0019] MTT 全称为 3-(4,5-dimethylthiazol_2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细 胞色素 C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan)，甲臜的含量可以用 酶标仪在570nm处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光 密度OD值推测出活细胞的数目。
[0020] 实验方法：
[0021] 1.接种细胞：用含10%胎牛血清的培养液（DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞悬 液，以每孔10000-20000个细胞接种到96孔板，每孔体积100 μ 1，贴壁细胞提前12小时接 种培养。
[0022] 2.加入待测化合物溶液（固定浓度40 μ M初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在 50 %附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛），每孔终体积200 μ 1，每种处理均设3个复 孔。
[0023] 3.显色：37摄氏度培养48小时后，每孔加 MTT溶液20 μ 1。继续孵育4小时，终 止培养，小心吸弃孔内培养上清液100 μ 1以避免细胞丢失，每孔加20%的SDS 100 μ 1，过 夜孵育（温度37°C )，使结晶物充分融解。
[0024] 4.比色：选择595nm波长，酶联免疫检测仪（Bio-Rad 680)读取各孔光吸收值，记 录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法（Reed and Muench法）计算化合物的1(：5。值。
[0025] 实验结果见表1 :
[0026] 表L绣线菊阿替生素 A(spiratiSanin A)对肿瘤细胞株的半数生长抑制浓度 IC50UM)
[0028] 上述试验结果表明，绣线菊阿替生素 A(spiratisanin A)具有显著的抗肿瘤活性， 特别是对乳腺癌、肝癌的抑制活性已超过临床抗肿瘤药物顺铂。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合实施例进一步对本发明的实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限 于此。
[0030] 实施例1 :
[0031] 本发明化合物的制备方法和结构表征：
[0032] L制备方法：
[0033] 6. 5kg粉花绣线菊干燥全草经粉碎后用95 %乙醇室温下提取3次，每次提取3至4 天，合并提取液，减压浓缩，得到250g浸膏。所得浸膏再经硅胶柱层析分离，以石油醚/丙 酮溶剂体系进行梯度洗脱，在石油醚/丙酮（10:1)洗脱段得一组分。该组分进一步经硅胶 (氯仿/甲醇60:1洗脱）、S印hadex LH-20 (氯仿/甲醇1:1洗脱）和中压制备（甲醇/水 85%洗脱）柱层析分离，得到绣线菊阿替生素 A(spiratisanin A)纯品10mg。
[0034] 2.结构表征：
[0035] 白色粉末；分子式 C29H4〇03;ES頂S(pos.) :m/z 459[M+Na] +;HRES頂S:m/z 459. 288 I [M+Na] + (459.2875calcd for C29H40O3Na); [af -43.3 (c 0.13, CHCh 十 McOH (2:1)]; UV(MeOH) Anax:217,222(sh)，277nm;IR(KBr) vnax 3441，2954, 2922, 2868, 2851，1708, 1637 ，1450, 1310, 1272, 1203, 1175, 1045, 979, 768CHT1;核磁共振波谱数据见表 2。
[0036] 表2.绣线菊阿替生素 A(spiratisanin A)的核磁共振波谱数据（⑶Cl3中测定）
[0037]
[0040] 实施例2 :
[0041] 片剂：实施例1所得化合物10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg ;
[0042] 制备方法：将化合物、乳糖、淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干 燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，其中化合物含量10mg。
[0043] 实施例3 :
[0044] 胶囊剂：实施例1所得化合物100mg，淀粉100mg，硬脂酸镁适量；
[0045] 制备方法：将化合物与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，将所得混合物 装入硬明胶胶囊。
[0046] 实施例4 :
[0047] 安瓿剂：实施例1所得化合物2mg，氯化钠 IOmg ;
[0048] 制备方法：将化合物和氯化钠溶解于适量的注射用水中，过滤，所得溶液在无菌条 件下装入安瓿瓶中。
【主权项】
1. 下述结构式I化合物：2. 权利要求1所述的式I化合物的制备方法，该方法包括W下步骤： 取粉花绣线菊（Spiraea japonica)植物体，用乙醇或甲醇或其它有机溶剂提取，所得 提取物反复用硅胶和Se地edex LH-20柱层析W及中压制备等方法分离，得到绣线菊阿替生 素 A (spiratisanin A)(式 I 化合物）。3. 用于治疗肿瘤的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的式I化合物 及可药用载体。4. 权利要求1所述的式I化合物在制备治疗和预防肿瘤的药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种新的具有药用价值的绣线菊阿替生素A(spiratisanin？A)(式I化合物)，及从粉花绣线菊(Spiraea？japonica)植物体中提取本发明化合物的方法，同时提供一种以式I化合物为活性成分的用于治疗和预防肿瘤的药物组合物，及该化合物及其药物组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。
【IPC分类】C07C67/48, A61P35/00, A61K31/216, C07C69/618
【公开号】CN105541631
【申请号】CN201510700064
【发明人】任福才, 王飞, 王丽霞, 魏国柱, 李香梅, 姜先俊
【申请人】云南西力生物技术股份有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年10月26日