一种从紫草根中提取紫草素的方法
【专利摘要】本发明公开一种从紫草根中提取紫草素的方法，属于紫草素制备技术领域。本发明首先将新鲜紫草根埋于土壤中，用微生物丰富且呈弱酸性的沼气池上清液浇灌，随后将紫草根切片，蒸煮研磨后得紫草根浆料，加入果胶酶、纤维素酶，恒温搅拌后进行灭酶处理，灭酶结束，加入乙醇以及尿素，过滤得滤液，并将滤液加热沸腾后迅速加入干冰，抽滤去滤液，用去离子水洗涤滤饼，干燥后，即可得到紫草素。本发明操作简便，无需昂贵设备，且整个制备过程中无有毒有机溶剂，在节约成本的同时使得制得的紫草素产率高，副产物少，可应用于工业化的大规模生产。
【专利说明】
一种从紫草根中提取紫草素的方法
技术领域
[0001]本发明公开一种从紫草根中提取紫草素的方法，属于紫草素制备技术领域。
【背景技术】
[0002]紫草，别名:硬紫草、软紫草。是中国药典收录的草药，药用来源为紫草科植物新疆紫草、紫草或内蒙紫草的干燥根。紫草根中最重要的是紫草萘醌类化合物，主要包括紫草素，乙酰紫草素，β，β-二甲基丙烯酰紫草素，异戊酰紫草素，异丁酰紫草素等，其中β，β-二甲基丙烯酰紫草素含量最高，乙酰紫草素次之，紫草素含量最低。紫草萘醌类化合物已被美国国家癌症研究所确定为具有抗肿瘤活性的物质，具有广发的生物活性包括:抗菌、抗艾滋病、促进烧伤创口愈合、抗肿瘤等，备受研究者关注。紫草素是这类化合物的典型代表。
[0003]紫草素有抗癌、抗炎、抗菌等作用。临床用于治疗急、慢性肝炎、肝硬化(腹水)。皮肝科用于治疗扁平疣、银肩病，局部应用治疗烧伤和促进伤口愈合。滴眼剂用于治疗单疱病毒性角膜炎，对上皮型树枝状和浅实质层树枝状角膜炎有一定疗效。油剂用于治疗婴儿皮炎、湿疹、阴道炎、子宫颈炎等。也可以添加牙膏中可防治牙龋和牙龈炎。
[0004]目前紫草素提取方法有超临界CO2萃取的方法、溶机溶剂提取法。
[0005]超临界CO2萃取法设备成本高，较难工业化大生产；溶机提取法紫草素提取过程快，但收率低，杂质多，其他紫草素酯化衍生物无法利用。
【发明内容】
[0006]本发明主要解决的技术问题:针对目前常用方法在提取紫草素的过程中出现的，常使用有毒有机溶剂，虽有利于加快提取紫草素的过程，但设备昂贵，且导致副产物多，产品纯度不高的现状，提供了一种从紫草根中提取紫草素的方法。该方法首先将新鲜紫草根埋于土壤中，用微生物丰富且呈弱酸性的沼气池上清液浇灌，随后切片，蒸煮研磨后得紫草根浆料，加入果胶酶、纤维素酶，恒温搅拌后进行灭酶处理，灭酶结束，加入乙醇以及尿素，过滤得滤液，并将滤液加热沸腾后迅速加入干冰，抽滤去滤液，用去离子水洗涤滤饼，干燥后，即可得到紫草素。本发明操作简便，无需昂贵设备，且整个制备过程中无有毒有机溶剂，在节约成本的同时使制得的紫草素产率高，副产物少，可应用于工业化的大规模生产。
[0007 ]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)选取6?8棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔6?Sh喷洒一次，保持土壤含水率为68?76%，10?12天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为I?3mm薄片；
(2)收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在85?95°C条件下，蒸煮20?30min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入200?260mL去离子水，得紫草根浆料；
(3)依次称取0.06?0.08g果胶酶和0.03?0.05g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根楽料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至380?460r/min，加热升温至40?48°C，恒温搅拌反应30?36min，随后加热升温至80°C，灭酶处理5?8min;
(4)待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为580?640r/min，在搅拌状态下，加入100?200mL质量浓度为40?50%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为22?28%尿素溶液，调节pH至8.6?8.8，继续搅拌混合25?35min，过滤，除去滤渣，得滤液；
(5)量取160?180mL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾16?20min，停止加热，并迅速加入20?30g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于70?85°C真空干燥箱中，干燥处理2?4h，即得紫草素。
[0008]本发明制得的紫草素为紫色片状结晶或结晶性粉末;纯度为95?98%;熔点147?149°C;旋光度+138° (苯)；不溶于水，溶于乙醇、有机溶剂和植物油；易溶于碱水，遇酸又沉淀析出。
[0009]本发明的应用方法是:按固液比1:50?1:60，将本发明制得的紫草素和生理盐水充分混合均匀，以肌肉注射的方式对肝炎患者进行注射治疗，其中每次注射量为2?4mg，每日或隔日注射I次，一般以10?20次为一个疗程，待一个疗程结束，肝炎患者可明显感觉身体好转，效果极其显著。
[0010]本发明的有益效果是:
(1)本发明操作简便，无需昂贵设备，且整个制备过程中无有毒有机溶剂，属于绿色环保工艺；
(2)本发明在节约成本的同时使得制得的紫草素产率高，副产物少，可应用于工业化的大规模生产。
【具体实施方式】
[0011]首先选取6?8棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔6?Sh喷洒一次，保持土壤含水率为68?76%，10?12天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为I?3mm薄片;然后收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在85?95°C条件下，蒸煮20?30min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入200?260mL去离子水，得紫草根浆料；随后依次称取0.06?0.08g果胶酶和0.03?0.05g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根浆料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至380?460r/min，加热升温至40?48°C，恒温搅拌反应30?36min，随后加热升温至80°C，灭酶处理5?Smin;待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为580?640r/min，在搅拌状态下，加入100?200mL质量浓度为40?50%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为22?28%尿素溶液，调节pH至8.6?8.8，继续搅拌混合25?35min，过滤，除去滤渣，得滤液;最后量取160?180mL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾16?20min，停止加热，并迅速加入20?30g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于70?85 °C真空干燥箱中，干燥处理2?4h，即得紫草素。
[0012]实例I
首先选取6棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔6h喷洒一次，保持土壤含水率为68%，10天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为Imm薄片;然后收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在85°C条件下，蒸煮20min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入200mL去离子水，得紫草根浆料；随后依次称取0.06g果胶酶和0.03g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根浆料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至380r/min，加热升温至40°C，恒温搅拌反应30min，随后加热升温至80°C，灭酶处理5min;待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为580r/min，在搅拌状态下，加入10mL质量浓度为40%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为22%尿素溶液，调节pH至8.6，继续搅拌混合25min，过滤，除去滤渣，得滤液;最后量取160mL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾16min，停止加热，并迅速加入20g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于70°C真空干燥箱中，干燥处理2h，即得紫草素。
[0013]本实例操作简便，使用时，按固液比1:50，将本发明制得的紫草素和生理盐水充分混合均匀，以肌肉注射的方式对肝炎患者进行注射治疗，其中每次注射量为2mg，每日或隔日注射I次，一般以10次为一个疗程，待一个疗程结束，肝炎患者可明显感觉身体好转，效果极其显著。
[0014]实例2
首先选取7棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔7h喷洒一次，保持土壤含水率为73%，11天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为2mm薄片;然后收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在90°C条件下，蒸煮25min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入250mL去离子水，得紫草根浆料；随后依次称取0.07g果胶酶和0.04g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根浆料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至420r/min，加热升温至45°C，恒温搅拌反应33min，随后加热升温至80°C，灭酶处理7min;待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为620r/min，在搅拌状态下，加入150mL质量浓度为45%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为25%尿素溶液，调节pH至8.7，继续搅拌混合30min，过滤，除去滤渣，得滤液;最后量取170mL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾18min，停止加热，并迅速加入25g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于80°C真空干燥箱中，干燥处理3h，即得紫草素。
[0015]本实例操作简便，使用时，按固液比1:55，将本发明制得的紫草素和生理盐水充分混合均匀，以肌肉注射的方式对肝炎患者进行注射治疗，其中每次注射量为3mg，每日或隔日注射I次，一般以15次为一个疗程，待一个疗程结束，肝炎患者可明显感觉身体好转，效果极其显著。
[0016]实例3 首先选取8棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔Sh喷洒一次，保持土壤含水率为76%，12天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为3mm薄片;然后收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在95°C条件下，蒸煮30min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入260mL去离子水，得紫草根浆料；随后依次称取0.0Sg果胶酶和0.05g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根浆料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至460r/min，加热升温至48°C，恒温搅拌反应36min，随后加热升温至80°C，灭酶处理Smin;待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为640r/min，在搅拌状态下，加入200mL质量浓度为50%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为28%尿素溶液，调节pH至8.8，继续搅拌混合35min，过滤，除去滤渣，得滤液;最后量取ISOmL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾20min，停止加热，并迅速加入30g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于85°C真空干燥箱中，干燥处理4h，即得紫草素。
[0017]本实例操作简便，使用时，按固液比1:60，将本发明制得的紫草素和生理盐水充分混合均匀，以肌肉注射的方式对肝炎患者进行注射治疗，其中每次注射量为4mg，每日或隔日注射I次，一般以20次为一个疗程，待一个疗程结束，肝炎患者可明显感觉身体好转，效果极其显著。
【主权项】
1.一种从紫草根中提取紫草素的方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)选取6?8棵新鲜紫草根，将其完全埋入避光环境的土壤中，随后用稻草覆盖于土壤表面，再用喷壶将沼气池上清液均匀喷洒至稻草表面，每隔6?Sh喷洒一次，保持土壤含水率为68?76%，10?12天后，挖出紫草根，经人工反复清洗，去除表面污物后，将其切成厚为I?3mm薄片； (2)收集上述所得紫草根薄片，将其转入蒸锅中，在85?95°C条件下，蒸煮20?30min，出料，并将蒸煮后的紫草根薄片均匀平铺与石磨磨盘上，在研磨过程中混入200?260mL去离子水，得紫草根浆料； (3)依次称取0.06?0.08g果胶酶和0.03?0.05g纤维素酶，加入盛有上述所得紫草根楽料的烧杯中，随后将烧杯置于数显测速恒温磁力搅拌器上，调节转速至380?460r/min，加热升温至40?48°C，恒温搅拌反应30?36min，随后加热升温至80°C，灭酶处理5?8min; (4)待灭酶结束，将盛有紫草根浆料的烧杯静置，自然冷却至室温，再将其置于磁力搅拌器上，设定转速为580?640r/min，在搅拌状态下，加入100?200mL质量浓度为40?50%乙醇溶液，随后滴加质量浓度为22?28%尿素溶液，调节pH至8.6?8.8，继续搅拌混合25?35min，过滤，除去滤渣，得滤液； (5)量取160?180mL上述所得滤液，将其转入不锈钢容器中，加热使滤液沸腾16?20min，停止加热，并迅速加入20?30g干冰，待干冰完全溶解后，抽滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至洗涤液呈中性为止，随后将滤饼置于70?85°C真空干燥箱中，干燥处理2?4h，即得紫草素。
【文档编号】A61P1/16GK105949045SQ201610484289
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】郭迎庆, 张明, 许博伟
【申请人】郭迎庆