一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法。该测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％。该方法既可以快速检测饲料用植酸酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用植酸酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本发明的方法对植酸酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用植酸酶的研究、生产和应用。
【专利说明】
一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及饲料领域中一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法。
【背景技术】
[0002] 植酸酶是目前饲料工业中应用最广的单体酶，也是一种很成熟的饲料酶，约占整 个饲料酶产值的30%左右。植酸酶可水解饲料中的植酸，使其释放出可利用的磷，从而减少 单胃动物饲料中无机磷的使用量，也可以减少动物粪便中的磷对环境的污染。因此无论从 社会效益和经济效益来看，植酸酶都是一种很好的饲料添加剂，也是一种极有发展前途的 饲料用酶。
[0003] 随着植酸酶在饲料中的广泛应用，对植酸酶酶活力评价方法的需求也越来越迫 切。长期以来，植酸酶酶活力的分析测定一直是饲料工业领域中很有争议的话题，现有分 析方法所提供的分析数据的实用性和重复性都不理想。目前，植酸酶酶活力的评价主要以 植酸钠为底物，所用植酸钠纯度高而且易溶于水，但是饲料成分相对比较复杂，所含植酸盐 基本上都是不溶于水的化合物，而且这些化合物通常与饲料原料中的其它成分（主要是蛋 白、纤维和金属离子）相互交联在一起，组成结构复杂的鳌合物，因此纯化的植酸钠不能模 拟植酸酶在体内作用时所面对的复杂底物成分。动物饲养试验虽然直观，可靠性也比较好， 但是试验的时间太长（至少需要2个月），成本很高，在实际生产过程中很难推广，与科研过 程中的快速分析要求相差甚远。
[0004] 另外，植酸酶还有很多同工酶，它们对酸碱环境的适应性、对温度的耐受性以及对 动物消化道环境的抗逆性都有差异，用目前标准的实验室分析方法是很难区别的，而实际 生产应用却很需要这些数据。
[0005] 因此，探索并建立一种更为科学、客观和简便评价植酸酶酶活力的体外检测方法 是迫切需要的。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是如何快速、更符合实际地测定饲料用植酸酶的酶活 力。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法。
[0008] 本发明所提供的一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测 定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液； 将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述 待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉 的质量百分含量为彡〇· 01% (如〇· 01% )。
[0009] 上述方法中，所述含有待测饲料用植酸酶的液体可为含有待测饲料用植酸酶的缓 冲溶液或含有待测饲料用植酸酶的离体动物消化液。所述含有待测饲料用植酸酶的缓冲溶 液可用所述待测饲料用植酸酶和醋酸-醋酸钠缓冲溶液配制，所述含有待测饲料用植酸酶 的离体动物消化液可用所述待测饲料用植酸酶和所述离体动物消化液配制。所述离体动物 消化液具体可为离体动物胃液或离体动物肠液，所述离体动物胃液具体可为离体猪胃液， 所述离体动物肠液具体可为离体猪小肠液或离体鸡小肠液。
[0010] 上述方法中，所述酶解反应液中，所述植酸酶的浓度可为0. 196-0. 500mg/mL，具体 可为0· 196mg/mL或0· 500mg/mL ;所述麦麸的浓度可为19. 6-25. Omg/mL，具体可为19. 6mg/ mL或25. Omg/mL;所述植酸酶与所述麦麸的质量比可为1 :(50-100),具体可为1:100或 1:50。
[0011] 上述方法中，所述酶解反应的反应温度可为37-41. 5°C，具体可为37°C。
[0012] 上述方法中，所述酶解反应液的pH值可为2. 4-5. 8,具体可为5. 3-5. 8、2. 4-5. 5、 2· 4、5· 3、5· 5或5. 8 ;所述酶解反应时间可为10-100min，具体可为10-90min、90-100min、 10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min 或 100min〇
[0013] 上述方法中，所述无机磷可为磷酸。
[0014] 上述方法中，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸可按照下述用于测定饲料 用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法制备。
[0015] 为解决上述技术问题，本发明还提供了上述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸 的制备方法。
[0016] 本发明所提供的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法，包括如下步 骤：将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后的麦麸中加入淀粉酶得到淀 粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀粉酶酶解后的麦麸；向所述淀粉酶酶解后的麦 麸中加入糖化酶得到糖化酶反应体系，进行糖化酶酶解反应，获得糖化酶酶解后的麦麸；将 所述糖化酶酶解后的麦麸进行清洗，得到所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸。
[0017] 上述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法中，所述糊化反应可为在 95-KKTC反应10-15min，具体可为在98°C反应12min。
[0018] 所述淀粉酶反应体系中，所述淀粉酶可为α -淀粉酶；所述α -淀粉酶和所述糊化 后的麦麸的配比可为40000U a -淀粉酶：(8. 74-12) kg以干重计的所述糊化后的麦麸，所述 a -淀粉酶和所述糊化后的麦麸的配比具体可为40000U a -淀粉酶：8. 74kg以干重计的所 述糊化后的麦麸；所述淀粉酶酶解反应可为在65-70°C反应25-30min，具体可为在65°C反 应 30min。
[0019] 所述a -淀粉酶的一个酶活力单位是指在60°c和pH值为6. 0的条件下，每小时水 解可溶性淀粉产生出1 μ mol麦芽糖所需要的a -淀粉酶的量。
[0020] 所述α-淀粉酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为 107658305。
[0021] 所述糖化酶反应体系中，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麦麸的配比可为 1600000U糖化酶：（8. 74-12) kg以干重计的所述淀粉酶酶解后的麦麸，所述糖化酶和所述 淀粉酶酶解后的麦麸的配比具体可为1600000U糖化酶：8. 74kg以干重计的所述淀粉酶酶 解后的麦麸；其中所述淀粉酶酶解后的麦麸的质量以所述糊化后的麦麸的干重计；所述糖 化酶酶解反应可为在95-100°C反应30-90min，具体可为在95°C反应60min。
[0022] 所述糖化酶的一个酶活力单位是指在40°C和pH值为4. 6的条件下，每小时水解可 溶性淀粉产生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0023] 所述糖化酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为1003301。
[0024] 所述清洗用水进行，所述清洗的次数可为3-4次，具体可为3次。
[0025] 上文中，所述麦麸为大麦麸。
[0026] 本发明所提供的上述方法在鉴别饲料用植酸酶酶活力中的应用也属于本发明的 保护范围。
[0027] 实验证明，本发明的测定饲料用植酸酶酶活力的方法能够直观、简便，客观全面 地测定饲料用植酸酶的酶活力。本发明的测定饲料用植酸酶酶活力的方法，以淀粉含量 <0.01 %的麦麸为底物，既可以快速检测饲料用植酸酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快 速检测饲料用植酸酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本发 明的方法对植酸酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用植酸酶的研究、生产和应用。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0029] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0030] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0031] 下述实施例中的植酸酶A为巩义市益康生物科技有限公司的产品（5000型），植 酸酶B为河南集美化工产品有限公司的产品（PW5型），植酸酶C为江苏奕农生物工程有 限公司的产品（植酸酶5000)，植酸酶D为江苏远方中汇生物科技有限公司的产品（植酸 酶5000)，植酸酶X为上海纪亭实业有限公司的产品（植酸酶5000)，植酸酶Y为苏州厚 金化工有限公司的产品（植酸酶5000)，植酸酶Z为广州全奥化工产品有限公司的产品 (CAS37288-11)。
[0032] 下述实施例中的a-淀粉酶为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录 号为107658305 ;该a -淀粉酶的一个酶活力单位是指在60°C和pH值为6. 0的条件下，每 小时水解可溶性淀粉产生出1 μ mol麦芽糖所需要的a -淀粉酶的量。
[0033] 下述实施例中的糖化酶为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为 1003301 ;该糖化酶的一个酶活力单位是指在40°C和pH值为4. 6的条件下，每小时水解可 溶性淀粉产生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0034] 实施例1、用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备
[0035] 称取10kg普通商品麦麸，用60kg清水在常温（20-30°C )浸泡24h,清洗其中的泥 渣和其它可溶性杂物，撇除漂浮的皮壳和麦秸等粗纤维。用清水反复清洗3次，然后再过 滤、挤压，获得洁净的麦麸，麦麸中含水量为65%。将获得的麦麸分批平摊在托盘上，挑除 其中没有破碎的麦粒，得到麦麸原料，该麦麸原料的干重为8. 74kg。在容量为100L的不锈 钢容器中，加入8. 74kg上述麦麸原料，再加入45kg蒸馏水，然后通蒸汽加热升温至98°C， 保温12min，充分糊化麦麸中残留的淀粉。糊化结束后冷却至65°C，加入10g淀粉液化酶 (a -淀粉酶，酶活为4000u/g)，反应30min。然后逐步加热至95°C，再加入20g糖化酶（酶 活为80000u/g)，反应60min，以充分糖化残留的淀粉成为溶解于水的葡萄糖和麦芽糖。糖 化结束后自然冷却至室温（20-30°C )，过滤，挤压，获得滤渣，再用蒸馏水清洗滤渣3次，以 充分滤除残留的葡萄糖和麦芽糖，获得纯净的麦麸，麦麸中的含水量为65%，重量为22kg。 把含水量为65%的22kg麦麸分批平摊在托盘上进行常温（20-30°C)气流干燥24h，得到用 于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸7. 6kg。以干重计，该用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦 麸中淀粉质量百分含量为〇. 01 %。
[0036] 将该用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸分装在密封的容器中，于4°C冰箱中保 存备用。
[0037] 实施例2、饲料用植酸酶在醋酸-醋酸钠缓冲溶液中的酶活力测定
[0038] 醋酸-醋酸钠缓冲溶液的配制：在5000mL蒸馏水中加入4. 5mL冰醋酸和34. 85g 无水醋酸钠，搅拌l〇min，使醋酸钠彻底溶解得到醋酸-醋酸钠缓冲溶液，该醋酸-醋酸钠缓 冲溶液中醋酸根离子的浓度为〇. lmol/L，pH值为5. 5。
[0039] 含有饲料用植酸酶A的缓冲溶液的配制：向烧杯中加入1. 000g粉状饲料用植酸酶 A，然后加入50mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，磁力搅拌30min后转移到100mL容量瓶中， 并用上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至l〇〇mL，配置成质量百分浓度为1 %的饲料用植酸酶 A的缓冲溶液。
[0040] 取9个500mL的三角瓶，依次编号为1、2、3、4、5、6、7、8和9，分别向每个三角瓶中 加入250mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，再向每个三角瓶中分别加入50g实施例1的用于 测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸，在37°C恒温水浴中放置30min，然后再向9个三角瓶中按 编号从1至9的顺序依次分别加入5mL质量百分浓度为1 %的饲料用植酸酶A的缓冲溶液， 分别得到1-9号饲料用植酸酶A的酶解反应液。
[0041] 将9个装有饲料用植酸酶A的酶解反应液的三角瓶放置在37°C恒温水浴中，按照 编号顺序从1-9号三角瓶中（与加入饲料用植酸酶A溶液的顺序一致），每隔10min抽取一 个三角瓶（第l〇min抽取1号三角瓶，第20min抽取2号三角瓶，第30min抽取3号三角瓶， 第40min抽取4号三角瓶，第50min抽取5号三角瓶，第60min抽取6号三角瓶，第70min抽 取7号三角瓶，第80min抽取8号三角瓶，第90min抽取9号三角瓶），将三角瓶中的酶解反 应后的溶液在相对离心力为2000g条件下离心3min获得酶解反应后的上清液，依次得到1 号三角瓶中的酶解反应后的上清液，2号三角瓶中的酶解反应后的上清液，3号三角瓶中的 酶解反应后的上清液，4号三角瓶中的酶解反应后的上清液，5号三角瓶中的酶解反应后的 上清液，6号三角瓶中的酶解反应后的上清液，7号三角瓶中的酶解反应后的上清液，8号三 角瓶中的酶解反应后的上清液和9号三角瓶中的酶解反应后的上清液。取4mL酶解反应后 的上清液，加入4mL钥酸铵溶液，采用钥酸铵比色法依次测定1-9号三角瓶中所获得酶解反 应后的上清液中磷酸的浓度，结果如表1所示。
[0042] 表1、醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH值为5. 5)中植酸酶A的酶活力测定结果
[0044] 本实施例中饲料用植酸酶A的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为5. 5的条件 下，每分钟从实施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中释放出1 μ mol无机磷所需 要的饲料用植酸酶A的量。
[0045] 实施例3、饲料用植酸酶在离体猪胃液中的酶活力测定
[0046] 在屠宰场收集30个猪胃（猪的体重在95_130kg之间），收集猪胃内的内容物，混 合均匀，用8层医用纱布挤压过滤混匀后的猪胃内容物，收集过滤液，获得2000mL猪胃食糜 过滤液，然后将猪胃食糜过滤液在l〇〇〇rpm条件下离心lmin,获得1600mL猪胃食糜过滤液 上清液并进行pH值测定，pH值为2. 4,作为分析饲料用植酸酶酶活力的离体猪胃液。
[0047] 取4个500mL三角瓶，分别加入0. lg饲料用植酸酶A、饲料用植酸酶B、饲料用植 酸酶C和饲料用植酸酶D (都是粉状酶），每个三角瓶中只加入一种酶，将只加入饲料用植 酸酶A的三角瓶编号为A，将只加入饲料用植酸酶B的三角瓶编号为B，将只加入饲料用植 酸酶C的三角瓶编号为C，将只加入饲料用植酸酶D的三角瓶编号为D ;再分别向编号为A、 B、C和D的三角瓶中各加入200mL上述作为分析饲料用植酸酶酶活力的离体猪胃液，磁力 搅拌2min后在37°C恒温水浴保温2min，使得饲料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶A的 离体猪胃液，含有植酸酶B的离体猪胃液，含有植酸酶C的离体猪胃液和含有植酸酶D的离 体猪胃液。向含有植酸酶A的离体猪胃液，含有植酸酶B的离体猪胃液，含有植酸酶C的离 体猪胃液和含有植酸酶D的离体猪胃液中依次（间隔为30秒）加入5g实施例1的用于测 定饲料用植酸酶酶活力的麦麸，获得饲料用植酸酶A的酶解反应液、饲料用植酸酶B的酶解 反应液、饲料用植酸酶C的酶解反应液和饲料用植酸酶D的酶解反应液。在37°C恒温水浴 中反应30min，获得饲料用植酸酶A的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶B的酶解反应后的 溶液、饲料用植酸酶C的酶解反应后的溶液和饲料用植酸酶D的酶解反应后的溶液。将饲 料用植酸酶A的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶B的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶C 的酶解反应后的溶液和饲料用植酸酶D的酶解反应后的溶液依次在相对离心力为2000g条 件下离心3min，获得饲料用植酸酶A的酶解反应后的上清液、饲料用植酸酶B的酶解反应 后的上清液、饲料用植酸酶C的酶解反应后的上清液和饲料用植酸酶D的酶解反应后的上 清液，收集上述各种饲料用植酸酶的酶解反应后的上清液。取4mL酶解反应后的上清液，加 入4mL钥酸铵溶液，采用钥酸铵比色法依次测定饲料用植酸酶A的酶解反应后的上清液中 磷酸的浓度、饲料用植酸酶B的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度、饲料用植酸酶C的酶解 反应后的上清液中磷酸的浓度和饲料用植酸酶D的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度，结 果如表2所示。
[0048] 表2、离体猪胃液中四种饲料用植酸酶的酶活力测定结果
[0049]
[0050] 本实施例中饲料用植酸酶的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为2. 4的条件下， 每分钟从实施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中释放出1 μ mol无机磷所需要 的饲料用植酸酶的量。
[0051] 表2中根据四种饲料用植酸酶在相同实验条件下释放磷酸的量表明，饲料用植酸 酶C的功效最显著。
[0052] 实施例4、饲料用植酸酶在离体猪小肠液中的酶活力测定
[0053] 在屠宰场收集20副猪小肠（猪的体重在95_130kg之间），收集猪小肠道内的内容 物，混合均匀。用纱布包埋挤压过滤混匀后的猪小肠内容物，收集过滤液，获得2000mL猪小 肠食糜过滤液。将获得的猪小肠食糜过滤液存放在一个塑料桶中，4°C冰箱中存放24h，然后 在相对离心力为2000g条件下离心2min，获得1600mL猪小肠食糜过滤液上清液并进行pH 值测定，pH值为5. 3,作为分析饲料用植酸酶酶活力的离体猪小肠液。
[0054] 取3个500mL三角瓶，分别加入0. lg饲料用植酸酶X、饲料用植酸酶Y和饲料用 植酸酶Z，每个三角瓶中只加入一种酶，将只加入饲料用植酸酶X的三角瓶编号为X，将只加 入饲料用植酸酶Y的三角瓶编号为Y，将只加入饲料用植酸酶Z的三角瓶编号为Z ;再分别 向编号为X、Y和Z的三角瓶中各加入200mL上述作为分析饲料用植酸酶酶活力的离体猪 小肠液，在37°C恒温水浴保温5min，使得饲料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶X的离体 猪小肠液，含有植酸酶Y的离体猪小肠液和含有植酸酶Z的离体猪小肠液。向含有植酸酶 X的离体猪小肠液，含有植酸酶Y的离体猪小肠液和含有植酸酶Z的离体猪小肠液中依次 加入5g实施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸，获得饲料用植酸酶X的酶解反应 液、饲料用植酸酶Y的酶解反应液和饲料用植酸酶Z的酶解反应液。在37°C恒温水浴中反 应lOOmin，获得饲料用植酸酶X的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶Y的酶解反应后的溶液 和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的溶液。将饲料用植酸酶X的酶解反应后的溶液、饲料用 植酸酶Y的酶解反应后的溶液和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的溶液依次在相对离心力为 2000g条件下离心3min，获得饲料用植酸酶X的酶解反应后的上清液、饲料用植酸酶Y的酶 解反应后的上清液和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的上清液，收集上述各种饲料用植酸酶 的酶解反应后的上清液。取4mL酶解反应后的上清液，加入4mL钥酸铵溶液，采用钥酸铵比 色法依次测定饲料用植酸酶X的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度、饲料用植酸酶Y的酶 解反应后的上清液中磷酸的浓度和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度， 结果如表3所示。
[0055] 表3、离体猪小肠液中三种饲料用植酸酶的酶活力测定结果
[0056]
[0057] 本实施例中饲料用植酸酶的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为5. 3的条件下， 每分钟从实施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中释放出1 μ mol无机磷所需要 的饲料用植酸酶的量。
[0058] 表3中根据三种饲料用植酸酶在相同实验条件下释放磷酸的量表明，饲料用植酸 酶X的功效最显著。
[0059] 实施例5、饲料用植酸酶在离体肉鸡小肠液中的酶活力测定
[0060] 在肉鸡屠宰加工厂收集屠宰的肉鸡小肠500个（肉鸡的体重在2. 5-3. 0kg之间）， 收集肉鸡小肠道内的内容物，混合均匀，放置在一个不锈钢保温桶中（隔层中加入冰水）。 放置3h后，用8层医用纱布挤压过滤混匀后的肉鸡小肠内容物，收集过滤液，获得1300mL 肉鸡小肠内容物过滤液，放置在玻璃试剂瓶中，在4°C条件下静止存放24h，然后在相对离 心力为3000g条件下离心3min，获得llOOmL肉鸡小肠内容物过滤液上清液并进行pH值测 定，pH值为5. 8,放置在玻璃试剂瓶中，作为分析饲料用植酸酶酶活力的离体肉鸡小肠液。
[0061] 取3个500mL三角瓶，分别加入0. lg饲料用植酸酶X、饲料用植酸酶Y和饲料用植 酸酶Z，每个三角瓶中只加入一种酶，将只加入饲料用植酸酶X的三角瓶编号为X，将只加入 饲料用植酸酶Y的三角瓶编号为Y，将只加入饲料用植酸酶Z的三角瓶编号为Z ;再分别向 编号为X、Y和Z的三角瓶中各加入200mL离体肉鸡小肠液，在37°C恒温水浴保温5min，使 得饲料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶X的离体肉鸡小肠液，含有植酸酶Y的离体肉鸡 小肠液和含有植酸酶Z的离体肉鸡小肠液。向含有植酸酶X的离体肉鸡小肠液，含有植酸 酶Y的离体肉鸡小肠液和含有植酸酶Z的离体肉鸡小肠液中依次加入（间隔为30s) 5g实 施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸，获得饲料用植酸酶X的酶解反应液、饲料用 植酸酶Y的酶解反应液和饲料用植酸酶Z的酶解反应液。在37°C恒温水浴中反应60min， 获得饲料用植酸酶X的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶Y的酶解反应后的溶液和饲料用 植酸酶Z的酶解反应后的溶液。将饲料用植酸酶X的酶解反应后的溶液、饲料用植酸酶Y 的酶解反应后的溶液和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的溶液依次在相对离心力为2000g条 件下离心3min，获得饲料用植酸酶X的酶解反应后的上清液、饲料用植酸酶Y的酶解反应后 的上清液和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的上清液，收集上述各种饲料用植酸酶的酶解反 应后的上清液。取4mL酶解反应后的上清液，加入4mL钥酸铵溶液，采用钥酸铵比色法依次 测定饲料用植酸酶X的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度、饲料用植酸酶Y的酶解反应后 的上清液中磷酸的浓度和饲料用植酸酶Z的酶解反应后的上清液中磷酸的浓度，结果如表 4所示。
[0062] 表4、离体肉鸡小肠液中三种饲料用植酸酶的酶活力测定结果
[0065] 本实施例中饲料用植酸酶的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为5. 8的条件下， 每分钟从实施例1的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中释放出1 μ mol无机磷所需要 的饲料用植酸酶的量。
[0066] 表4中根据三种饲料用植酸酶在相同实验条件下释放磷酸的量表明，饲料用植酸 酶X的功效最显著。
【主权项】
1. 一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶 活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液 进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶 的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为 彡 0· 01%〇2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应的反应温度为37-41. 5°C。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应液的pH值为2. 4-5. 8。4. 根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述用于测定饲料用植酸酶 酶活力的麦麸的制备方法包括将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后的 麦麸中加入淀粉酶得到淀粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀粉酶酶解后的麦麸； 向所述淀粉酶酶解后的麦麸中加入糖化酶得到糖化酶反应体系，进行糖化酶酶解反应，获 得糖化酶酶解后的麦麸；将所述糖化酶酶解后的麦麸进行清洗，得到所述用于测定饲料用 植酸酶酶活力的麦麸。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述糊化反应在9 5-100°C反应 10_15min〇6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述淀粉酶酶解反应在65-70°C反应 25-30min〇7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述糖化酶酶解反应在95-100°C反应 30-90min〇8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述清洗用水进行，所述清洗的次数为 3-4 次。9. 权利要求4至8中任一所述的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法。10. 权利要求1-9中任一所述方法在鉴别饲料用植酸酶酶活力中的应用。
【文档编号】C12Q1/34GK105986005SQ201510044028
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年1月28日
【发明人】蒋慧
【申请人】北京晟亚育达生物科技有限公司