专利名称：高酶活家蚕基因工程饲用植酸酶制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于转基因物质，尤其是畜禽用转基因酶制剂制造领域。
中国专利CN99103564公开了一种应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶的基因工程方法，用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因，并使其处于多角体蛋白基因启动子的控制下，再将此重组质粒与野生型BmNPV-DNA共转染于家蚕细胞，通过体内同源重组得到带有外源植酸酶基因的重组病毒，再利用多角体蛋白基因的启动子启动植酸酶基因，并将此重组家蚕核型多角体感染家蚕，在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白。但如何将家蚕基因工程植酸酶生产在较大的工业化程度上实现，或者更具体地说在畜禽用转基因酶制剂工业中高产量、低成本的生产出具有商业竞争力的产品仍是需要解决的问题。在产品储运过程中，制剂的酶活量不可避免会出现不同程度的降低。
本发明的目的是，生产一种家蚕基因工程植酸酶制剂，使之能改善现有技术的不足，使之具有良好的酶活稳定性，在成品储运过程中具有较低的酶活日损失率。
本发明的目的使通过如下的方法实现的。
家蚕基因工程植酸酶工业化感染控制方法，应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶，用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因，并使其处于多角体蛋白基因启动子的控制下，再将此重组质粒与野生型BmNPV-DNA共转染于家蚕细胞，通过体内同源重组得到带有外源植酸酶基因的重组病毒，再利用多角体蛋白基因的启动子启动植酸酶基因，并将此重组家蚕核型多角体感染家蚕，在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白，将目标病蚕经匀浆后与一定细度的麸皮吸附，再经烘干—粉碎—过筛后标定酶活的工艺得到商业化产品，成品制剂中含有抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ。
制剂中加入适量抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ后，酶活日损失率与4℃下保存的产品相当，且可较大地降低前10天中酶的活性损失率，比未加EMQ产品酶活日损失率低0.18％(4℃下)-0.33％(室温下)/天，使成品储运过程中具有较低的酶活日损失率，为基因工程植酸酶制剂能在较大的时间和空间范围内实现商业化应用提供了保障。
如下图1为室温下酶活随时间的变化图。
以其中0.9EMQ加入量为例，室温下保存30天，酶活损失19.6％，日损失0.66％/天。前10天日损失0.55％，中间10天日损失1.45％，后10天日损失0.055％。
加入EMQ后，30天后酶活损失16.0％，日损失0.53％。前10天日损失0.22％，中间10天日损失1.37％，后10天日损失0.048％。
以蚕蛹为实验样本也得到基本一致的结果由此可见，采用本发明，在加工后的半成品中加入适量EMQ后得到的饲用基因工程植酸酶制剂，可在相当的时间内较大地降低酶的活性损失率，为基因工程植酸酶制剂能在较大的时间和空间范围内实现商业化应用提供了有利的条件。
权利要求
1.高酶活家蚕基因工程植酸酶制剂，应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶，用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因，并使其处于多角体蛋白基因启动子的控制下，再将此重组质粒与野生型BmNPV-DNA共转染于家蚕细胞，通过体内同源重组得到带有外源植酸酶基因的重组病毒，再利用多角体蛋白基因的启动子启动植酸酶基因，并将此重组家蚕核型多角体感染家蚕，在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白；将目标病蚕经匀浆后与一定细度的麸皮吸附，再经烘干—粉碎—过筛后标定酶活的工艺得到商业产品，其特征在于，成品制剂中含有抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ。
2.根据权利要求1所述之高酶活家蚕基因工程植酸酶制剂，其特征在于，所述抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ的加入量为0.5-1.0％。
3.根据权利要求1或2所述之高酶活家蚕基因工程植酸酶制剂，其特征在于，所述抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ的加入量为0.8％。
全文摘要
本发明涉及应用重组BmNPV载体－家蚕宿主表达系统生产植酸酶,将特定重组家蚕核型多角体感染家蚕,在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白;将目标病蚕经匀浆后与一定细度的麸皮吸附,再经烘干—粉碎—过筛后标定酶活的工艺得到商业化产品,其成品制剂中含有抗氧化剂乙氧基喹啉EMQ。本发明产品具有成品保存酶活损失小的优点,比常规产品日酶活损失率低0.18%(4℃下)－0.33%(室温下)/天。
文档编号A61K38/43GK1383893SQ0110739
公开日2002年12月11日 申请日期2001年4月30日 优先权日2001年4月30日
发明者陈英, 石钰, 秦俭 申请人:四川华神集团股份有限公司