一种增强水稻耐盐能力的方法
【专利摘要】本发明公开了一种增强水稻耐盐能力的方法，将编码OsKEA1基因的3465bp 的全长CDNA序列片段通过Spel和PacI插入到改造过带有Ubiquitin 启动子的用于转化水稻的双元载体pCAMBIA1300 中，构建得到p1300:ProUbiquitin:OsKEA1 载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法转化到野生型水稻9522 （WT）的愈伤中，即得到过表达转基因植株，将转基因植株提取RNA反转录后，以ACTIN 作为内参，用OsKEA1基因的特异引物做RT?PCR。本发明与现有技术相比，能够使得转基因植株中OsKEA1基因表达水平远远高于野生型的水平，过表达OsKEA1植株的OsKEA1的含量显著高于野生型，利用分子生物学的手段改造植物，不但大幅增强了植物耐盐能力、提高了作物的产量，而且成功率高、耗时短，能够有效快速地选育新品种。
【专利说明】
一种増强水稻耐盐能力的方法
技术领域
[0001 ]本发明具体涉及一种增强水稻耐盐能力的方法。
【背景技术】
[0002]中国盐渍土地总面积惊人，主要分布在新疆、河西走廊、柴达木盆地、河套平原、银川平原、黄淮海平原、东北平原西部，以及滨海地区。在中国的盐碱耕地中，大约73%属轻度盐碱化，对农业生产影响不严重，其余27%为中强度盐碱化。尽管对于土壤盐碱化的治理是一个重要的课题，正在被越来越多的人员研究和重视，但是目前土壤盐碱化仍然有越来越严重的趋势，且短时间内难以扭转。
[0003]不同的植物对于盐碱的耐受能力有所差异，植物体内也可能存在一些对于抵抗环境胁迫有效的基因。鉴于传统的育种方法筛选的成功率低，耗时长，开发一些新的选育技术是重要的，通过分析和鉴定出与植物抵抗环境胁迫有效的基因来对植物进行改造或筛选。
[0004]尽管目前已经鉴别出一些抗逆相关的基因，然而还需要通过大量的努力进一步开发和寻找新的基因，从而可为植物品种的改良提供更多、更有效的途径。
【发明内容】
[0005]发明目的:为了克服现有技术中存在的不足，提供一种利用分子生物学的手段改造植物、增强植物耐盐能力、提高作物产量的增强水稻耐盐能力的方法。
[0006]技术方案:为实现上述目的，本发明提供一种增强水稻耐盐能力的方法，将编码OsKEAl基因的3465bp的全长CDNA序列片段通过Spel和PacI插入到改造过带有Ubiquitin启动子的用于转化水稻的双元载体PCAMBIA1300中，构建得到pl300: ProUbiquitin:OsKEAl载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法转化到野生型水稻9522 (WT)的愈伤中，SP得到过表达转基因植株，将转基因植株提取RNA反转录后，以ACTIN作为内参，用OsKEAl基因的特异引物做RT-PCR。
[0007]水稻的基因OsKEAl编码的多肽能够参与叶绿体钾离子外排，平衡叶绿体钠离子和pH，是在盐碱胁迫条件下维持植物有效光合作用所必需的，将OsKEAl基因应用于水稻的培育中，可以选育出具有耐盐碱胁迫能力的水稻品种。
[0008]有益效果:本发明与现有技术相比，能够使得转基因植株中OsKEAl基因表达水平远远高于野生型的水平，过表达OsKEAl植株的OsKEAl的含量显著高于野生型，利用分子生物学的手段改造植物，不但大幅增强了植物耐盐能力、提高了作物的产量，而且成功率高、耗时短，能够有效快速地选育新品种。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
[0010]实施例一:过表达OsKEAl转基因水稻的获得将编码OsKEAl基因的3465bp的全长CDNA序列片段通过Spel和PacI插入到改造过带有Ubiquitin启动子的用于转化水稻的双元载体PCAMBIA1300中，构建得到pl300:ProUbiquitin: OsKEAl载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法转化到野生型水稻9522(WT)的愈伤中，即得到过表达转基因植株，将转基因植株提取RNA反转录后，以ACTIN作为内参，用OsKEAl基因的特异引物做RT-PCR。
[0011]结果证明转基因植株中OsKEAl基因表达水平远远高于野生型的水平，进一步利用免疫印迹分析实验证明了过表达OsKEAl植株的OsKEAl的含量显著高于野生型。
[0012]实施例二:过表达OsKEAl (Ov-OsKEAl)对于水稻的耐盐能力
在培养箱水培条件(光强为10mol photons m-2 s_l)下，在正常的培养基(1/2的MS培养基)中额外添加25mM的NaCl，培养3周后，观察生长表型。
[0013]结果发现，过表达转基因水稻的生长明显好于野生型，证明在水稻中过表达OsKEAl能够增强水稻的耐盐能力，为选育耐盐水稻品种提供了很好的基础。
[0014]实施例三:过表达OsKEAl (Ov-OsKEAl)对于水稻大田产量的影响
在大田栽培条件下，比较测定单株水稻种子产量，统计结果发现，在三个转基因株系中，除了一个过表达转基因株系的单株产量比野生型略有增加以外，其他两个过表达转基因株系的单株产量均高于野生型的20%左右。
[0015]证明在水稻中过表达OsKEAl能够提高水稻的单株产量，为选育高产水稻品种提供良好基础。
[0016]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出:对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种增强水稻耐盐能力的方法，其特征在于:将编码OsKEAl基因的3465bp的全长⑶NA序列片段通过Spel和PacI插入到改造过带有Ubiquitin启动子的用于转化水稻的双元载体PCAMBIA1300中，构建得到pl300: ProUbiquitin: OsKEAl载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法转化到野生型水稻9522 (WT)的愈伤中，即得到过表达转基因植株，将转基因植株提取RNA反转录后，以ACTIN作为内参，用OsKEAl基因的特异引物做RT-PCR。
【文档编号】C12N15/82GK106047923SQ201610419743
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】时楠, 蒋小勤
【申请人】宜兴小蚂蚁农产品专业合作社