[0001]
本发明涉及醌氧化还原酶1（hnqo1）检测技术领域，更具体地说是用于hnqo1选择性检测的小分子荧光发探针的设计与合成。
背景技术：
[0002]
醌氧化还原酶1（hnqo1）是一种胞浆黄素双电子还原酶，通过对潜在致癌物进行解毒和对某些抗肿瘤前药进行生物活性化，在细胞质中起着不可替代的作用。与同一来源的正常组织相比，hnqo1活性通常在多种人类肿瘤中高表达，包括结直肠癌、肺癌和乳腺癌。因此，hnqo1被认为是一种潜在的癌症生物标志物，其含量与癌症的发生和发展有关。然而，目前还没有有效的敏感工具来检测hnqo1活性的微量变化，尤其是在癌症的早期。因此，开发一种超灵敏、高选择性的hnqo1在活体细胞和体外活动的时空监测工具具有非常重要的意义，它将有助于疾病的早期诊断，全面了解癌症的发病机制和相关药物的开发。
[0003]
本文采用一种新的香豆素-双氰基异氟尔酮杂环化合物（cdci-oh）作为荧光团，通过与醌丙酸反应得到近红外荧光探针cdci-hnqo1。该探针具有快速响应、高选择性和高灵敏度、在710nm处有明显的近红外荧光开启信号变化和显著斯托克斯位移。探针在人体hnqo1检测和体内显像方面具有很大的潜力，有望用于早期癌症诊断和病理学研究。
技术实现要素：
[0004]
265 mg醌丙酸添加到8 ml无水dmf中，然后，将混合物在氮气保护下室温搅拌5小时，去除溶剂后，经硅胶柱层析纯化并经旋蒸蒸干，得到荧光探针cdci-hnqo1；（2）荧光探针分析检测hnqo1：采用离心法从健康人血液中提取人血清，然后用pbs缓冲液（0.01m，ph=7.4）将人血清稀释100倍，以通过添加不同浓度的hnqo1制备样品。探针cdci-hnqo1分别与不同浓度样品孵育15分钟，随后进行荧光强度检测。
[0005]
本发明的有益效果：（1）本发明成本低廉、实验操作简单，反应条件容易控制；（2）相比于传统的大型仪器，荧光探针检测易于操作进行；（3）荧光探针自身由于分子内电荷转移被抑制，显示出微弱的荧光，在与hnqo1混合反应后生成供电子基羟基，与吸电子基氰基恢复分子内电荷转移从而恢复荧光团荧光，在近红外区域产生较强的荧光发射。
具体实施方式
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下面对本发明的详细实施例进行说明：一种选择性检测醌氧化还原酶1的荧光探针的设计与合成。
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下面对本发明的详细实施例进行说明：一种选择性检测醌氧化还原酶1的荧光探针的设计与合成，其特征是包括以下步骤：实施例1
1.用于hnqo1选择性荧光探针的设计与合成，其特征是包括以下步骤：（1）近红外荧光探针cdci-hnqo1的合成：
①
. 分别称取186 mg(3,5,5-三甲基环己-2-烯亚基)丙二腈、190 mg 7-羟基-3-醛基香豆素、0.5 ml哌啶和0.5 ml乙酸于3 ml无水乙醇中充分混合并加热回流4 h，冷却至室温后，过滤混合物，并在浓缩滤液。粗产物经硅胶柱层析纯化并经旋蒸蒸干，得到砖红色粉末状cdci-oh；
②
.将245 mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、52 mg4-二甲基氨基吡啶、304 mg cdci-oh和265 mg醌丙酸添加到8 ml无水dmf中，然后，将混合物在氮气保护下室温搅拌5小时，去除溶剂后，经硅胶柱层析纯化并经旋蒸蒸干，得到荧光探针cdci-hnqo1；（2）荧光探针分析检测hnqo1：采用离心法从健康人血液中提取人血清，然后用pbs缓冲液（0.01m，ph=7.4）将人血清稀释100倍，以通过添加不同浓度的hnqo1制备样品。探针cdci-hnqo1分别与不同浓度样品孵育15分钟，随后进行荧光强度检测。