一种稀土纳米探针及其制备方法和应用

1.本发明属于纳米医学材料领域，具体涉及一种稀土纳米探针及其制备方法和应用。


背景技术：

2.乳腺癌目前是肿瘤当中最常发生的类型其中之一，也是全球女性因病死亡的主要原因，三阴性乳腺癌(tnbc)是乳腺癌的一个亚型，预后极差，严重威胁着女性的生命。由于tnbc的高侵袭性限制了传统手术、放疗、化疗的效果，因此急需开发新型有效的治疗方法。小干扰rna(small interfering，sirna)介导的基因治疗，通过特异性沉默致癌靶基因的表达，其效果远优于传统药物，且细胞毒性低，在肿瘤治疗中受到了极大的关注。虽然，目前已经发现了多种sirna递送系统，但裸露的sirna的非特异性生物分布和转染效率较差，极大地阻碍了sirna在tnbc治疗中的进一步应用，开发精准的肿瘤靶向和足够的sirna递送工具仍是高效基因治疗的挑战。
3.荧光成像是以小分子物质或纳米材料作为介质的成像方式，具有方便快捷，易于被标记，操作简单等优点，是观察细胞和生物成像的优先选择。近年来，稀土荧光纳米探针具有荧光发射峰半峰宽很窄，以及良好的荧光稳定性优异的生物相容性等优点，以及其广泛的光谱可调范围和高灵敏度成像的能力而得到了广泛的开发和研究，用以精确定位。在这些可协调光谱范围内，近红外(nir)荧光成像因其深的穿透深度而被广泛用于肿瘤检测。更重要的是，近红外二区(nir
‑
ii)荧光具有比组织更高的组织穿透力和更低的自发荧光在第一个近红外窗口中发射的探针，从而实现高分辨率成像。将这种nir
‑
ii荧光探针用以构建在肿瘤部位特异性聚集的纳米探针将在精确的肿瘤定位中取得巨大进步，也是对于乳腺癌诊断的巨大推进。cn110804434a公开了一种可靶向识别肺鳞癌的稀土探针，所述稀土探针由具有近红外二区荧光成像元素的镧系氟氧化物对具有上转换发光元素的镧系氟氧化物进行包覆形成核壳结构，其结构通式为：reof:ln@reof:ln
′
，其中，re、ln和ln
′
均为镧系元素。cn111234819a公开了一种稀土掺杂纳米探针，为核壳结构镨掺杂氟化镥钠包覆氟化钇钠，其组成为：nalu1
‑
xf4:prx@nayf4，其中，nalu1‑
x
f4为基质，掺杂离子为pr；冒号“:”表示为镨掺杂；x为稀土离子掺杂摩尔比，x的范围为0.0005～0.05；nayf4为壳层，@表示nayf4包覆在nalu1‑
x
f4:pr
x
表面。cn108760692a公开了一种复合纳米探针及其用于活体比率成像检测的方法，该种复合纳米探针包含近红外有机荧光染料和近红外无机稀土纳米材料，其中，近红外有机荧光染料包含花菁类、罗丹明类或bodipy类探针分子，近红外无机稀土纳米材料包含核结构或核
‑
壳结构的稀土氟化物；在近红外光的激发下，有机荧光染料与稀土纳米材料都可以发射出近红外光，且互不干扰。当与特定物种相互作用后，有机荧光染料的发射峰位置或强度的大小会发生变化，而稀土纳米材料的发射峰不受影响，从而导致两个近红外发射峰的比率随特定物种的加入而发生规律性变化，以该比率变化为检测信号即可实现对特定物种的检测及成像功能。
4.虽然，目前已经发现了多种sirna递送系统，但裸露的sirna的非特异性生物分布
和转染效率较差，极大地阻碍了sirna在tnbc治疗中的进一步应用，上述现有技术中提供的纳米探针并不能精准响应并且传递sirna。
5.因此，开发一种可以精准响应的稀土纳米探针，是目前本领域急需解决的技术问题。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种稀土纳米探针及其制备方法和应用，所述稀土纳米探针为核壳结构，所述核壳结构依次包括核心、过渡层和壳层；所述核心的材料为naerf4；所述过渡层的材料为nayf4；所述壳层的材料为mno2，所述稀土纳米探针利用壳层的mno2能够被肿瘤细胞过表达的谷胱甘肽(gsh)所降解的特点，可以对肿瘤微环境产生智能响应，进而可以应用于sirna的传递，具有重要的研究价值。
7.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种稀土纳米探针，所述稀土纳米探针为核壳结构，所述核壳结构依次包括核心、过渡层和壳层；
9.所述核心的材料为naerf4；所述过渡层的材料为nayf4；所述壳层的材料为mno2。
10.本发明提供的稀土纳米探针(ernps@mno2)为核壳结构，依次包括核心、过渡层和壳层，所述核心的材料为naerf4；所述过渡层的材料为nayf4；所述壳层的材料为mno2，本发明利用mno2能够被肿瘤细胞过表达的谷胱甘肽(gsh)所降解生成mn
2+
的特点，使得到的稀土纳米探针可以对肿瘤微环境产生精准的智能响应，进而可作为纳米药物的载体，传递和释放sirna，具有重要的应用价值。
11.优选地，所述稀土纳米探针的粒径为20～30nm，例如21nm、22nm、23nm、24nm、25nm、26nm、27nm、28nm或29nm等。
12.第二方面，本发明提供一种如第一方面所述稀土纳米探针的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
13.(1)将铒离子、保护剂和第一溶剂混合，得到第一澄清溶液；将钠离子、氟离子和第二溶剂混合，得到第二澄清溶液；将钇离子、保护剂和第三溶剂混合，得到第三澄清溶液；
14.(2)将步骤(1)得到的第一澄清溶液和第二澄清溶液进行反应，去除第二溶剂、再反应，离心，得到naerf4核心；
15.(3)将步骤(1)得到的第三澄清溶液、步骤(2)得到的naerf4核心和步骤(1)得到的第二澄清溶液进行反应、去除第二溶剂、再反应，离心，得到ernps；
16.(4)将步骤(3)得到的ernps和葡萄糖溶液混合、反应，得到过渡材料；
17.(5)将步骤(4)得到的过渡材料和高锰酸钾进行反应，离心，得到所述稀土纳米探针。
18.本发明提供的稀土纳米探针的制备方法包括如下步骤：首先制备含有铒离子的第一澄清溶液、含有钠离子和氟离子的第二澄清溶液以及含有钇离子的第三澄清溶液；随后将第一澄清溶液和第二澄清溶液进行反应，得到naerf4核心；再将得到的naerf4核心、第二澄清溶液和第三澄清溶液进行反应，得到ernps(naerf4@nayf4)；随后经过水热法在ernps表面生成碳壳，得到过渡层材料(ernps@c)；最后，在经过强氧化反应，在ernps@c表面原位生长一层二氧化锰壳层(mno2)，这一步骤中ernps@c表面的c被消耗，最终得到了最外层包覆
有mno2的稀土纳米探针(ernps@mno2)；所述制备方法步骤简单，操作方面且合成的稀土纳米探针的均一性、分散性良好。
19.本发明提供的制备方法中，铒离子的原料可选用醋酸铒；钇离子的原料可选用醋酸钇；钠离子、氟离子的原料可选用氢氧化钠和nh4f，或者也可直接选用氟化钠。
20.需要说明的是，本发明所述稀土纳米探针可以在烧瓶、烧杯等容器中合成，但是所有用来合成稀土纳米探针的三口烧瓶或烧杯都必须用碱缸进行浸泡后，然后用自来水冲洗后经超纯水进行洗净，以保证表面的杂质被完全除尽。
21.优选地，步骤(1)所述保护剂包括油酸。
22.优选地，步骤(1)所述第一溶剂和第三溶剂包括十八烯。
23.优选地，以步骤(1)所述第一溶剂的体积为1ml计，所述铒离子的摩尔数为0.5～1mmol，例如0.55mmol、0.6mmol、0.65mmol、0.7mmol、0.75mmol、0.8mmol、0.85mmol、0.9mmol或0.95mmol等。
24.优选地，步骤(1)所述铒离子、保护剂和第一溶剂混合在氮气保护条件下进行。
25.优选地，步骤(1)所述铒离子、保护剂和第一溶剂混合的温度为110～130℃，例如112℃、114℃、116℃、118℃、120℃、122℃、124℃、126℃或128℃等。
26.优选地，步骤(1)所述铒离子、保护剂和第一溶剂混合的时间为10～30min，例如12min、14min、16min、18min、20min、22min、24min、26min或28min等。
27.优选地，步骤(1)所述第二溶剂包括甲醇。
28.优选地，以步骤(1)所述第二溶液的体积为1ml计，所述氟离子的摩尔数为0.3～0.5mmol，例如0.32mmol、0.34mmol、0.36mmol、0.38mmol、0.4mmol、0.42mmol、0.44mmol、0.46mmol或0.48mmol等。
29.优选地，以步骤(1)所述第二溶液的体积为1ml计，所述钠离子的摩尔数为0.2～0.4mmol，例如0.22mmol、0.24mmol、0.26mmol、0.28mmol、0.3mmol、0.32mmol、0.34mmol、0.36mmol或0.38mmol等。
30.优选地，以步骤(1)所述第一溶剂的体积为1ml计，所述钇离子的摩尔数为0.2～0.5mmol，例如0.23mmol、0.26mmol、0.29mmol、0.3mmol、0.33mmol、0.36mmol、0.39mmol、0.43mmol、0.46mmol或0.49mmol等。
31.优选地，步骤(1)所述钇离子、保护剂和第三溶剂混合在氮气保护条件下进行。
32.优选地，步骤(1)所述钇离子、保护剂和第三溶剂混合的温度为110～130℃，例如112℃、114℃、116℃、118℃、120℃、122℃、124℃、126℃或128℃等。
33.优选地，步骤(1)所述钇离子、保护剂和第三溶剂混合的时间为10～30min，例如12min、14min、16min、18min、20min、22min、24min、26min或28min等。
34.优选地，步骤(2)所述第一澄清溶液和第二澄清溶液的体积比为1:(1.5～2.5)，例如1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.1、1:2.2、1:2.3或1:2.4等。
35.优选地，步骤(3)所述第二澄清溶液和第三澄清溶液的体积比为1:(0.5～1.5)，例如1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3或1:1.4等。
36.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述反应的温度各自独立地为40～60℃，例如42℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃或58℃等。
37.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述反应的时间各自独立地为20～40min，例如22min、
24min、26min、28min、30min、32min、34min、36min或38min等。
38.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述去除第二溶剂均通过加热来进行。
39.优选地，所述加热的温度各自独立地为100～130℃，例如103℃、106℃、109℃、113℃、116℃或119℃等。
40.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述再反应均在氮气保护条件下进行。
41.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述再反应的温度各自独立地为280～310℃，例如283℃、286℃、289℃、293℃、296℃、299℃、303℃、306℃或309℃等。
42.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述再反应的时间各自独立地为1～2h，例如1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h或1.9h等。
43.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述再反应结束后均还包括冷却和加入乙醇的步骤。
44.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述离心的转速各自独立地为6000～7000rpm，例如6100rpm、6200rpm、6300rpm、6400rpm、6500rpm、6600rpm、6700rpm、6800rpm或6900rpm等。
45.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述离心的时间各自独立地为5～15min，例如6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min或14min等。
46.优选地，步骤(2)和步骤(3)所述离心结束后均还包括洗涤的步骤。
47.优选地，步骤(4)所述ernps和葡萄糖的质量为1:(1～3)，例如1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2、1:2.2、1:2.4、1:2.6或1:2.8等。
48.优选地，步骤(4)所述反应的温度为150～180℃，例如152℃、154℃、156℃、158℃、160℃、162℃、164℃、166℃或168℃等。
49.优选地，步骤(4)所述反应的时间为2～3h，例如2.1h、2.2h、2.3h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h或2.9h等。
50.优选地，步骤(5)所述过渡材料和高锰酸钾的质量比为1:(1～3)，例如1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2、1:2.2、1:2.4、1:2.6或1:2.8等。
51.优选地，步骤(5)所述反应的时间为30～60min，例如33min、36min、39min、40min、43min、46min、49min、53min、56min或59min等。
52.优选地，步骤(5)所述离心的转速为9000～11000rpm，例如9200rpm、9400rpm、9600rpm、9800rpm、10000rpm、10200rpm、10400rpm、10600rpm或10800rpm等。
53.优选地，步骤(5)所述离心结束后还包括洗涤的步骤。
54.作为本发明的优选技术方案，本发明提供的稀土纳米探针的制备方法包括如下步骤：
55.(1)将铒离子、保护剂和第一溶剂在110～130℃、氮气保护条件下混合10～30min，得到第一澄清溶液；将钠离子、氟离子和第二溶剂混合，得到第二澄清溶液；将钇离子、保护剂和第三溶剂在110～130℃、氮气保护条件下混合10～30min，得到第三澄清溶液；
56.(2)将步骤(1)得到的第一澄清溶液和第二澄清溶液按照体积比为1:(1.5～2.5)在40～60℃下反应20～40min、100～130℃加热的条件下去除第二溶剂、在280～310℃和氮气保护条件下再反应1～2h，加入乙醇，6000～7000rpm条件下离心5～15min，分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到naerf4核心；
57.(3)将步骤(1)得到的第三澄清溶液、步骤(2)得到的naerf4核心和步骤(1)得到的第二澄清溶液在40～60℃下反应20～40min、100～130℃去除第二溶剂、在280～310℃和氮
气保护条件下再反应1～2h，6000～7000rpm条件下离心5～15min，加入乙醇、分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到ernps；
58.(4)将步骤(3)得到的ernps和葡萄糖溶液混合，、150～180℃下反应2～3h，得到过渡材料；
59.(5)将步骤(4)得到的过渡材料和高锰酸钾反应30～60min，9000～11000rpm下离心，得到所述稀土纳米探针。
60.第三方面，本发明提供一种稀土荧光复合物，所述稀土荧光复合物包括如第一方面所述的稀土纳米探针和接枝在其表面的精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸短肽(rgd)。本发明提供的稀土荧光复合物(ernps@mno2‑
rgd)可通过如下方法制备得到：
61.(1)将10ml如本发明第一方面所述的稀土纳米探针加入10ml溶解有200mg聚醚酰亚胺(pei)的水溶液中，室温下剧烈搅拌24h后，10000rpm下离心10min，超纯水洗两次后，得到ernps@mno2‑
pei；
62.(2)按照mn:rgd质量比为1:(1～5)将ernps@mno2‑
pei(可通过icp测定ernps@mno2‑
pei的mn的含量)和rgd分散在10ml去离子水中，4℃下搅拌24h，离心收集，去离子水洗涤两次，得到所述稀土荧光复合物(ernps@mno2‑
rgd)。
63.优选地，所述稀土纳米探针中锰和精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸短肽质量比为1:(1～5)，例如1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4或1:4.5等。。
64.第四方面，本发明提供一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如第三方面所述的稀土荧光复合物和装载在其表面的sirna。
65.本发明提供的sirna装载稀土荧光复合物(ernps@mno2‑
sirna
‑
rgd)可通过如下方法制备得到，所述制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的ernps@mno2‑
rgd水溶液和10μl浓度为20μg ml
‑1的sirna(sis100a4水溶液)混合，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
66.本发明提供的sirna装载稀土荧光复合物，其表面二氧化锰被降解后，能够释放sirna，具有实现sirna介导基因治疗的潜力。
67.优选地，所述sirna和稀土纳米探针中锰质量比为1:(1～10)，例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8或1:9等。
68.第五方面，本发明提供一种如第四方面所述的sirna装载稀土荧光复合物在体外肿瘤微环境智能响应中的应用。
69.需要说明的是，本发明中sirna装载稀土荧光复合物用于肿瘤微环境智能响应的用途是非疾病诊断或治疗目的的。示例性地，在体外组织器官的培养过程中，可以采用sirna装载稀土荧光复合物对肿瘤微环境进行智能响应，从而对组织器官的生长状况进行监控。
70.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
71.(1)本发明提供的稀土纳米探针通过三层核壳结构的设计，利用高温热解法在最外层包覆了二氧化锰壳层，利用其二氧化锰能够被肿瘤细胞过表达的谷胱甘肽所降解生成mn
2+
的特点，使得所述稀土纳米探针可以对肿瘤微环境产生精准的智能响应，进而可作为纳米药物的载体。
72.(2)本发明提供的稀土纳米探针具有优异的近红外二区荧光，粒径均一且分散性
好。
73.(3)包括本发明提供的稀土纳米探针的sirna装载稀土荧光复合物，能够实现gsh响应且释放sirna，具有精准递送sirna实现基因治疗的潜力。
附图说明
74.图1为实施例1步骤(3)得到的ernps核壳结构的透射电子显微镜图；
75.图2为实施例1步骤(3)得到的ernps核壳结构稀土纳米粒子的近红外二区荧光发射图；
76.图3为实施例1得到的稀土纳米探针的透射电子显微镜图；
77.图4为实施例1得到的稀土纳米探针在不同gsh浓度下mn
2+
释放率折线图；
78.图5为应用例2～8和对比应用例4得到的sirna装载稀土荧光复合物的核酸电泳图；
79.图6为应用例1得到的sirna装载稀土荧光复合物在gsh存在下释放sirna的能力图。
具体实施方式
80.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
81.实施例1
82.一种稀土纳米探针，所述稀土纳米探针为核壳结构，所述核壳结构依次包括核心、过渡层和壳层；
83.所述过核心的材料为naerf4；所述过渡层的材料为nayf4；所述壳层的材料为mno2；
84.其制备方法包括如下步骤：
85.(1)将0.334g的er(ch3coo)3·
xh2o、4.5ml的油酸和15ml的1
‑
十八烯加入三口烧瓶中，排除空气，在120℃、氮气保护条件下混合20min，得到第一澄清溶液；将2.5mmol的naoh、4mmol的nh4f和10ml的甲醇溶液混合，得到第二澄清溶液；将0.5mmol的醋酸钇水合物、10.5ml的1
‑
十八烯和4.5ml的油酸加入另外的三口烧瓶中，排除空气，在120℃、氮气保护条件下混合20min，得到第三澄清溶液；
86.(2)将步骤(1)得到的第一澄清溶液和第二澄清溶液在50℃下反应30min、100℃下去除甲醇、进行抽气和换气3次，在300℃和氮气保护条件下再反应1.5h，降温到40℃，加入乙醇、6500rpm下离心10min，分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到naerf4核心；并将1mmol得到的naerf4核心分散在4ml的环己烷中备用；
87.(3)将步骤(1)得到的第三澄清溶液、步骤(2)得到的naerf4核心和步骤(1)得到的第二澄清溶液在50℃下反应30min、100℃去除甲醇、进行抽气和换气3次，在300℃和氮气保护条件下再反应1.5h，降温到40℃，加入乙醇、6500rpm下离心10min，分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到ernps；并将0.5mmol得到的ernps分散在2ml的环己烷中备用；
88.(4)将得到的ernps环己烷溶液加入等体积的乙醇后进行离心，然后再重新分散在盐酸溶液(ph＝1)中，并搅拌1h，在15000rpm下离心15min，用去离子水洗涤三次，并重新分散在去5ml的离子水中，加入0.1mmol l
‑1、9ml的葡萄糖溶液混合、在160℃、20ml高压釜中反
应2.5h，得到过渡材料；
89.(5)将步骤(4)得到的过渡材料以10000rpm离心10min，并重新分散在水溶液，加入10mg、10ml的高锰酸钾反应30min，1000rpm下离心10min，超纯水洗涤两次，得到所述稀土纳米探针。
90.采用透射电子显微镜(日立h
‑
7650)对实施例1步骤(3)得到的ernps核壳结构稀土纳米粒子进行测试，得到的ernps核壳结构稀土纳米粒子的透射电子显微镜图如图1所示，从图1可以看出，实施例1步骤(3)得到的ernps核壳结构稀土纳米粒子分布均匀，粒径均一，粒径约为17nm。
91.采用fls980荧光光谱仪对实施例1步骤(3)得到的ernps核壳结构稀土纳米粒子进行测试，用808nm激光激发测到ernps核壳结构稀土纳米粒子的近红外二区荧光发射图如图2所示，从图2可以看出：ernps核壳结构稀土纳米粒子在近红外二区具有较为优异的荧光发射强度。
92.采用透射电子显微镜(日立h
‑
7650)对实施例1得到的稀土纳米探针进行测试，得到的稀土纳米探针的透射电子显微镜图如图3所示，从图3可以看出：实施例1得到的稀土纳米探针的粒径为20nm。
93.采用电感耦合等离子光谱仪(icp)测试实施例1得到的稀土纳米探针在不同gsh浓度下mn
2+
释放率，得到的不同gsh浓度下mn
2+
释放率折线图如图4所示，从图4可以看出：实施例1得到的稀土纳米探针在gsh处理下，mn
2+
被很好的释放。
94.对比例1
95.一种稀土纳米探针，所述稀土纳米探针为核壳结构，所述核壳结构依次包括核心和壳层；
96.所述过核心的材料为naerf4；所述壳层的材料为nayf4；
97.其制备方法包括如下步骤：
98.(1)将0.334g的er(ch3coo)3·
xh2o、4.5ml的油酸和15ml的1
‑
十八烯加入三口烧瓶中，排除空气，在120℃、氮气保护条件下混合20min，得到第一澄清溶液；将2.5mmol的naoh、4mmol的nh4f和10ml的甲醇溶液混合，得到第二澄清溶液；将0.5mmol的醋酸钇水合物、10.5ml的1
‑
十八烯和4.5ml的油酸加入另外的三口烧瓶中，排除空气，在120℃、氮气保护条件下混合20min，得到第三澄清溶液；
99.(2)将步骤(1)得到的第一澄清溶液和第二澄清溶液在50℃下反应30min、100℃去除甲醇、进行抽气和换气3次，在300℃和氮气保护条件下再反应1.5h，降温到40℃，加入乙醇、6500rpm条件下离心10min，分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到naerf4核心；并将1mmol naerf4核心分散在4ml的环己烷中备用；
100.(3)将步骤(1)得到的第三澄清溶液、步骤(2)得到的naerf4核心和步骤(1)得到的第二澄清溶液50℃下反应30min、100℃去除甲醇、进行抽气和换气3次，在300℃和氮气保护条件下再反应1.5h，降温到40℃，加入乙醇、6500rpm条件下离心10min，分别用环己烷和乙醇溶液洗涤，得到所述稀土纳米探针。
101.应用例1
102.一种稀土荧光复合物，所述稀土荧光复合物包括稀土纳米探针(实施例1)和接枝在其表面的rgd；
103.其制备方法包括如下步骤：
104.(1)将10ml的稀土纳米探针(实施例1)加入10ml溶解有200mg聚醚酰亚胺(pei)的水溶液中，室温剧烈搅拌24h，10000rpm下离心10min，超纯水洗两次后，得到ernps@mno2‑
pei；
105.(2)按照mn:rgd质量比为1:2将ernps@mno2‑
pei(可通过icp测定其中mn的含量)和rgd分散在10ml去离子水中，4℃下搅拌24h，离心收集，去离子水洗涤两次，得到所述稀土荧光复合物。
106.应用例2
107.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
108.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:6，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
109.应用例3
110.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
111.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:1，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
112.应用例4
113.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
114.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:2，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
115.应用例5
116.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
117.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:3，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
118.应用例6
119.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
120.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:4，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
121.应用例7
122.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光
复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
123.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:8，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
124.应用例8
125.一种sirna装载稀土荧光复合物，所述sirna装载稀土荧光复合物包括如稀土荧光复合物(应用例1)和装载在其表面的sirna；
126.其制备方法包括：将锰含量为20μg ml
‑1的稀土荧光复合物(应用例1)的水溶液与10μl、20μg ml
‑1的sirna(sis100a4，上海生工生物科技有限公司)水溶液混合，保持其中sirna和mn的质量比为1:10，并在4℃下孵育30min，得到所述sirna装载稀土荧光复合物。
127.对比应用例1
128.一种稀土荧光复合物，其与应用例1的区别仅在于，采用对比例1得到的稀土纳米探针替换实施例1得到的稀土纳米探针，其他条件和制备方法均与应用例1相同。
129.对比应用例2
130.一种稀土荧光复合物，其与应用例2的区别仅在于，采用对比应用例1得到的稀土荧光复合物替换应用例1得到的稀土荧光复合物，其他条件和制备方法均与应用例2相同。
131.性能测试：
132.(1)核酸电泳：采用伯乐核酸电泳仪对应用例2～8和对比应用例2得到的sirna装载稀土荧光复合物进行测试，得到的核酸电泳图片如图5所示，图5中sirna:mn的质量比分别为1:0(对比应用例2)、1:1(应用例3)、1:2(应用例4)、1:3(应用例5)、1:4(应用例6)、1:6(应用例2)、1:8(应用例7)和1:10(应用例8)、从图5可以看出：sirna:mn的质量比为1:6时能够达到了完全装载效果。
133.(2)核酸电泳：采用伯乐核酸电泳仪对应用例2得到的sirna装载稀土荧光复合物进行测试，应用例2得到的sirna装载稀土荧光复合物释放sirna的能力如图6所示，从图6可以看出：在gsh存在下sirna能够得到释放。
134.申请人声明，本发明通过上述实施例来说明一种稀土纳米探针及其制备方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。