专利名称：水产养殖用复合微生态水悬浮剂的制作方法
技术领域：
本发明属于水产养殖中的生物技术领域，涉及一种复合微生态水悬浮剂，具体涉及一种水产养殖用复合微生态水悬浮剂。
背景技术：
水产微生态制剂，是利用鱼虾蟹等动物体内或养殖水体中的有益微生物或促进物质经特殊加工工艺而形成的活菌制剂。可用于水体中微生态调控、净化水质，能产生生物效应或生态效应，也可用于调整或维持动物肠道内微生态平衡，达到预防疾病、促进水产动物健康生长的目的。自二十世纪中叶以来，随着养殖业的发展，抗生素、喹乙醇、喹若酮等药物饲料添加剂在世界范围内得到广泛应用。该药物饲料添加剂在防治疾病、促进动物生长等方面作用十分明显，但由此产生的副作用以及引起病原菌产生的抗药性、毒性、“三致”(致畸、致癌、致突变)等弊端也逐渐显露出来。残毒、污染环境、威胁人类健康的问题现已成为世界各国养殖工作者和卫生工作者十分关注的热点。随着动物微生态制剂在畜牧等方面上的广泛应用，在水产业上的应用也越来越引起人们的重视，其良好的效果已被大量的实验和生产实践所证实。微生态制剂具有投入小、收益大、无残毒、无抗药性、不污染环境等优点，充分显示了利用微生态防治技术的优越性，它必然成为二十一世纪水产养殖业的发展方向。关于水产养殖用微生态制剂的研究和应用，国内外已进行了大量的研究工作，概括起来主要集中在利用单一菌剂或复合菌剂改善养殖水体水质，或防止水产动物的某些疾病，应用较广泛的剂型是粉剂、水剂，但由于粉剂在干燥过程中容易造成菌体的死亡，导致产品有效活菌数含量低，加上粉剂的生产工艺较为复杂，能耗高，而水剂在贮存过程中容易沉淀和变质，严重地影响使用效果。中国专利CN101717724A、CN101735951A、CN101878858A、 CN1498865A、CN101147529A, CN1594551A、CN101376877A、和 CN1016^157A 等分别公开了用于水产养殖水体净化、修复养殖水环境修复、净化水质的复合微生态制剂及制备方法，虽然这些方法除了具有可以降低养殖水体中的有机污染物、氨氮、亚硝酸盐、C0D、B0D含量等，还具有可以促进有益藻类繁殖、提高养殖体的抗病能力的功效，但这些专利产品为固体制剂或液体制剂，存在生产工艺复杂、产品菌种存活率低、沉淀、能耗和成本高、使用效果不稳定等缺点。本发明技术将饮料生产技术引入水产用微生态水悬浮剂的生产，可以有效地减少产品沉淀的发生，降低菌体的死亡率及生产成本等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种水产养殖用复合微生态水悬浮剂，该制剂能有效分解养殖水体中的大分子有机物，降低水体中氨氮、硝态氮含量，且具有生产工艺简单、成本和能耗低、有效活菌数高、适应性强、易于批量生产的特点，解决了目前市场上水产用微生态制剂存在的产品质量不稳定、使用效果不理想、有效活菌数存活率低、产品沉淀及生产成本高等问题。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是一种水产养殖用复合微生态水悬浮剂，该悬浮剂按重量百分比是由以下组分混合后用胶体磨粉碎至粒径为2-5 μ m 而成枯草芽孢杆菌发酵液10-25%、纳豆芽孢杆菌发酵液15-30%、侧胞芽孢杆菌发酵液 20-35%、丁酸梭状芽孢杆菌发酵液5-15%、酵母菌发酵液5-10%、抑菌剂5-6. 5%、稳定剂 0. 45-0. 65 %、分散剂 0.1-0.3%，pH 值为 4. 5-5. 5。上述抑菌剂为NaCl或(NH4) 2S04中的一种或两种。上述稳定剂为羧甲基纤维素钠、 黄原胶或瓜尔胶中的一种或几种。上述分散剂为三聚磷酸钠、或焦磷酸钠中的一种或两种。本发明中用到的菌种均为现有技术，保藏号分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) :ACCC11062、CGMCC2548、或 CGMCC1222 ；侧胞芽孢杆菌(Bacillus lateraporus) :CGMCC1755或CGMCC9701 ；纳豆芽孢杆菌(Bacillussubtilis natto) =CCTCC M207147、CGMCC 0724 或 ATCC 6051 ；丁酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum) JSMCB 或 ATCC 25755 ；酵母属酵母菌(Saccharomyces SP.) CGMCC 1147、CGMCC 0702 或 CGMCC 0133。本发明中用到的菌种的发酵液的制备也为现有技术，其中枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌发酵液的制备按每IOOmL水加2_4g玉米淀粉、 1-2. 5g豆饼粉、0. 05-0. 3gKH2P04、0. 05-0. 15g MgSO4 ·7Η20、0· 05-0. 15gMnS04 ·Η20、0· 1-0. 3g CaC03、及 0. 15-0. 35g 豆油的比例将玉米淀粉、豆饼粉、KH2PO4, MgSO4 · 7H20、MnSO4 · H2O, CaCO3、及豆油溶于水中，调节pH值为7. 2-7.6，在121-123 °C灭菌25-30分钟，冷却至 30-40°C，再分别以2-5体积％的接种量分别接入活化的枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，在 30-37°C条件下培养48-7池，分别得到枯草芽孢杆菌发酵液和纳豆芽孢杆菌发酵液；侧胞芽孢杆菌发酵液的制备按每IOOmL水加2_4g葡萄糖、l_2g豆饼粉、 0. 05-0. 2g ΚΗ2Ρ04、0· 05-0. 15gMgS04 · 7Η20、0· 05-0. 15gMnS04 · H20,0. 1-0. 3gCaC03、及 0. 15-0. 35g豆油的比例将葡萄糖、豆饼粉、KH2P04、MgS04 ·7Η20、Μι^04 'H2CKCaCOy及豆油溶于水中，调节ΡΗ7. 5-7. 8，在121-123°C下灭菌20-25分钟，冷却至30_40°C，再以2_4体积％ 的接种量接入活化的侧胞芽孢杆菌，在30-35°C条件下培养48-7池，得到侧胞芽孢杆菌发酵液；丁酸梭状芽孢杆菌发酵液的制备按每IOOmL水加3_5g葡萄糖、l_2g胰蛋白胨、0. 1-0. 3g (NH4)2SO4^O. 3-0. 5g Κ2ΗΡ04、0· 05-0. Ig MgSO4 · 7Η20、0· 01-0. 05gMnS04 · H2O, 0. 08-0. 12g NaHCO3,及 0. 1-0. 3g CaCO3 的比例将葡萄糖、胰蛋白胨、(NH4)2S04、K2HPO4, MgSO4 · 7H20、MnSO4 · H2O, NaHC03、及 CaCO3 溶于水中，调节 pH7. 2-7. 4，在 121_123°C下灭菌 25-30分钟，冷却至30-40°C，再以3_5体积％的接种量接入活化的丁酸梭状芽孢杆菌，在 35-40°C条件下培养36-4 ，得到丁酸梭状芽孢杆菌发酵液；酵母菌发酵液的制备按每IOOmL水加2_3g葡萄糖、l_2g豆饼粉、 0. 5-1. 5g (NH4)2SO4^O. 1-0. 3g ΚΗ2Ρ04、0· 05-0. 15g MgSO4 · 7H20、及 0. 1-0. 3g CaCO3 的比例将葡萄糖、豆饼粉、(NH4)2SCV KH2PO4, MgSO4 · 7H20、及CaCO3溶于水中，在121_123°C下灭菌 20-25分钟，冷却至20-30°C，再以5_8体积％的接种量接入活化的酵母菌，在下培养，得到酵母菌发酵液；与现有技术相比，本发明具有以下优点1、本发明的水产养殖用复合微生态水悬浮剂能持久使养殖水体中的有机污染物、氨氮、硝态氮、COD和BOD的含量明显降低。2、本发明方法所使用的菌种包括了好养菌和厌氧菌，既可降低好氧水体环境中各种有害物质的含量，也可降降解如底泥等厌氧环境中残留的饲料及水产动物的粪便，从而改善水质。3、本发明方法与固体发酵产品和液体发酵产品相比，具有生产工艺简单、能耗低、 菌种死亡率低、进入水体后启动快、产品质量稳定、不产生沉淀、无三废和易于规模化生产等特点。4、本发明方法采用的丁酸梭状芽孢杆菌，可抑制肠道有害菌，促进有益菌生长；减少肠内氨、胺含量(这两种物质会损害肝功能)；产生多种维生素，如维生素K等；产生多种酶类，与化肥或水产用有机肥料联合使用时，能提高饲料利用率，促进动物生长。
具体实施例方式首先，分别制备枯草芽孢杆菌发酵液、纳豆芽孢杆菌发酵液、侧胞芽孢杆菌发酵液、丁酸梭状芽孢杆菌发酵液、及酵母菌发酵液，其中枯草芽孢杆菌发酵液、及纳豆芽孢杆菌发酵液的制备取玉米淀粉3g、豆饼粉 1. 5g、KH2PO4O. lg、MgSO4 · 7H20 0. lg、MnSO4 · H2O 0. 08g、CaCO3O. 2g、豆油 0. 2g 溶于 IOOmL 水中，调节PH7.5，在122°C条件下灭菌观分钟，冷却至35°C后，以3% (V/V)的接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，在35°C条件下培养60h，得到枯草芽孢杆菌发酵液；取玉米淀粉3g、豆饼粉 1. 5g、KH2PO4O. lg、MgSO4 · 7H20 0. lg、MnSO4 · H2O 0. 08g、 CaCO3O. 2g、豆油0. 2g溶于IOOmL水中，调节pH7. 5，在122°C条件下灭菌观分钟，冷却至 35°C后，以4% (V/V)的接种量分别接入活化的纳豆芽孢杆菌，在35°C条件下培养60h，得到纳豆芽孢杆菌发酵液。侧胞芽孢杆菌发酵液的制备取葡萄糖3g、豆饼粉1. 5g, KH2PO4O. 13g、MgS04 · 7H20 0. lg、MnSO4 · H2O 0. lg、CaCO3O. 2g、豆油 0. 25g 溶于 IOOmL 水中，调节 pH7. 6，在 122°C条件下灭菌22分钟，冷却至35°C后，以3% (V/V)的接种量接入活化的侧胞芽孢杆菌，在32°C条件下培养60h，得到侧胞芽孢杆菌发酵液。丁酸梭状芽孢杆菌发酵液的制备取葡萄糖4g、胰蛋白胨1. 5g、(NH4)2SO4O. 2g、 K2HPO4O. 4g、MgSO4 · 7Η20· 08g、MnSO4 · H2O 0. 02g、NaHCO3O. lg、CaCO3O. 2g 溶于 IOOmL 水中， 调节pH7.3，在121°C条件下灭菌30分钟，冷却至30°C，以4% (V/V)的接种量接入活化的丁酸梭状芽孢杆菌，在36°C条件下培养46h，得到丁酸梭状芽孢杆菌发酵液。酵母菌发酵液的制备取葡萄糖2. 5g、豆饼粉1. 5g、(NH4)2SO4O. 8g、KH2PO4O. 15g、 MgSO4 · 7Η20· lg、CaCO3O. 2g溶于IOOmL水中，在121°C条件下灭菌25分钟，冷却至25°C，以 7% (V/V)的接种量接入活化的酵母菌，在条件下培养36h，得到酵母菌发酵液。实施例1 按重量百分比取枯草芽孢杆菌发酵液16. 5%、纳豆芽孢杆菌发酵液20%、侧胞芽孢杆菌发酵液27.2%、丁酸梭状芽孢杆菌发酵液23 %、酵母菌发酵液7 %、抑菌剂5. 6 %、稳定剂0. 5%、分散剂0. 2 %，用稀盐酸调节pH4. 6后，用胶体磨粉碎至粒径为3. 5 μ m，即得成
P
ΡΠ O实施例2
取枯草芽孢杆菌发酵液10 %、纳豆芽孢杆菌发酵液30 %、侧胞芽孢杆菌发酵液 30 %、丁酸梭状芽孢杆菌发酵液15%、酵母菌发酵液9. 45 %、抑菌剂5 %、稳定剂0. 45 %、分散剂0. 1 %，用稀盐酸调节pH5. 0后再用胶体磨粉碎至胶体粒径为2. 5 μ m，即得成品。实施例3 取枯草芽孢杆菌发酵液25 %、纳豆芽孢杆菌发酵液16 %、侧胞芽孢杆菌发酵液 23. 55%,丁酸梭状芽孢杆菌发酵液20%、酵母菌发酵液8%、抑菌剂6. 5%、稳定剂0. 65%、 分散剂0. 3 %，用稀盐酸调节pH5. 5后再用胶体磨粉碎至胶体粒径为5 μ m即得成品。实施例4 取本发明产品300_500mL，倒入IOkg用开水溶化的1 %的红糖水中，搅拌均勻，在 37-40°C下活化1-2小时，于1亩养殖池塘中(水深1. 0-1. 5米)均勻泼洒，每15天左右使用一次；或在化肥(每次每亩施用^ig)或水产用有机肥料(每次每亩施用IOKg)施用2-3 天后，按上述方法施用本发明产品1000-1500mL。以没有泼洒本发明产品、施有同量化肥、及施有同量水产用有机肥料的同面积的养殖池塘作为对照，其他饲养条件不变。结果表明本发明产品与化肥联合使用，鲤鱼、草鱼、鳊鱼、及鲢鱼分别较单施化肥时增产7. 1 %、12. 7%、5. 9%和6% ；与水产用有机肥料使用，鲤鱼、草鱼、鳊鱼、及鲢鱼分别较单施水产用有机肥料时增产13. 7%,8. 3%,6. 2%和31. 8%；池塘内有机污染物、氨氮、 亚硝态氮、和COD的含量与不使用本产品的对照相比，降解率分别提高67. 3%,34. 17%, 7. 31%和 53. 65%。
权利要求
1.一种水产养殖用复合微生态水悬浮剂，其特征在于该悬浮剂按重量百分比由以下组分混合后用胶体磨粉碎至粒径为2-5μπι而成枯草芽孢杆菌发酵液10-25%、纳豆芽孢杆菌发酵液15-30 %、侧胞芽孢杆菌发酵液20-35 %、丁酸梭状芽孢杆菌发酵液5-15 %、 酵母菌发酵液5-10%、抑菌剂5-6. 5%、稳定剂0. 45-0. 65%、分散剂0. 1-0.3%, ρΗ值为 4· 5 5· 5 ο
2.如权利要求1所述的水产养殖用复合微生态水悬浮剂，其特征在于所述抑菌剂为 NaCl或(NH4)2SO4中的一种或两种。
3.如权利要求1所述的水产养殖用复合微生态水悬浮剂，其特征在于所述稳定剂为羧甲基纤维素钠、黄原胶或瓜尔胶中的一种或几种。
4.如权利要求1所述的水产养殖用复合微生态水悬浮剂，其特征在于所述分散剂为三聚磷酸钠、或焦磷酸钠中的一种或两种。
全文摘要
本发明公开了一种水产养殖用复合微生态水悬浮剂，其是以枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、侧胞芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和酵母菌发酵液为有效成分，调节pH值后添加稳定剂、抑菌剂、分散剂，经过胶体磨粉碎后，得到的一种对水体环境无公害、安全、储存期长的水产用复合微生态悬浮剂。其可以有效降低水产养殖水体中的有机污染物、氨态氮、亚硝态氮和COD的含量，改善水产养殖环境。本发明水产养殖用复合微生态水悬浮剂可单独使用，也可与化肥和水产用有机肥料联合使用。其生产过程简单、设备投资小、无污染、产品货架期长，对水产健康养殖和水产可持续发展具有重要的意义。
文档编号C02F3/34GK102517237SQ20111045287
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月30日 优先权日2011年12月30日
发明者兰时乐, 李立恒, 毛小伟, 肖调义, 许宝红, 邓元元 申请人:湖南农业大学