本发明涉及一种木奶果提取物的制备方法，属于植物提取技术领域。
背景技术：
木奶果(Baccaurea ramiflora Lour.)，又称水赖、麦穗、蒜瓣果，属大戟科木奶果属，为常绿乔木或灌木，分布于印度、马来西亚、泰国、缅甸、越南及中国西南部。其果实富含总糖、维生素C、挥发油及人体所需的多种微量元素等，具体成分含量为：可食率为49.2％、含水分84.7％、脂肪0.06％、淀粉0.47％、纤维0.29％、VC1.57mg/100g、可滴定酸1.99％、总糖11.87％。同时，果肉多汁、酸甜可口，解暑去热，是良好的饮品及酸味添加剂；果核姹紫嫣红，是天然的食用色素；果皮色黄易剥，含有酚类、抗菌类等多种功能性物质。
随着木奶果应用的深入，木奶果越来越吸引本领域科研人员的关注。文献[张容鹄，夏义杰，窦志浩等人，木奶果果皮多酚提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究，(J)，热带作物学报，2016，37(5)：1009-1016]公开了一种木奶果果皮多酚的提取工艺：木奶果果皮粉末→按比例与乙醇混合→水浴恒温振荡→离心→过滤→浓缩→冷冻干燥→定容→测定A760
→计算含量。该提取的成分比较单一、木奶果中的许多有效成分未能保留如总糖，挥发油等，而且提取率和效率偏低。
技术实现要素：
针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出了一种木奶果提取物的制备方法。
一种木奶果提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将风干的木奶果果实洗净、消毒，粉碎成100～120目，并在60℃条件下干燥15～20min后，加入木奶果果实干燥后重量5～10倍的60～80％乙醇搅拌，搅拌5～10min后用胶体磨研磨30～40min；
2)将步骤1)所得的料液保持在温度40～50℃，并调节pH为4～6，同时加入占木奶果果实干燥后重量0.2～0.4％的复合酶酶解1～2h，其中，复合酶是由3～5重量份纤维素酶和2～4重量份果胶酶混合而成；
3)将步骤2)所得的酶解液于100～110℃保持6～10min灭菌后，置于超声频率40～50kHz，温度30～40℃下进行超声提取，提取10～20min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；
4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量8～10倍的80～90％乙醇搅拌，搅拌10～15min后用胶体磨研磨40～60min，并置于超声频率40～50kHz，温度40～60℃下进行超声提取，提取15～20min，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；
5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量8～10倍的70～90％乙醇搅拌，搅拌20～25min后用胶体磨研磨40～60min，并加热到80～90℃，回流提取1～2h，过滤，得到滤液3和滤渣3，备用；
6)在步骤5)所得的滤渣3中加入滤渣3重量6～8倍的水搅拌，搅拌20～25min后用胶体磨研磨40～60min，并加热到90～100℃，提取40～60min，过滤，得到滤液4，备用；
7)合并滤液1、2、3、4，并将滤液置于4000～5000转/min的离心机上离心5～10min，过滤，得到木奶果提取液1，备用；
8)先将占木奶果提取液1 0.3～0.5重量份的聚乙二醇加热50～60℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.2～0.4重量份的明胶、0.03～0.05重量份的壳聚糖和步骤7)所得的木奶果提取液1搅拌均匀，最后于-5～5℃冷藏1～2d，过滤除去沉淀，得到木奶果提取液2，备用；
9)将步骤8)所得的木奶果提取液2依次通过孔径为0.1～1μm的微滤膜、孔径为0.01～0.2μm的超滤膜进行纯化，得到木奶果提取液3，备用；
10)将步骤9)所得的木奶果提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用20～30％乙醇水溶液、40～60％乙醇水溶液洗柱，收集40～60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到木奶果提取物。
进一步，
步骤2)中，将步骤1)所得的料液保持在温度45℃，并调节pH为5，同时加入占木奶果果实干燥后重量0.3％的复合酶酶解1.5h，其中，复合酶是由4重量份纤维素酶和3重量份果胶酶混合而成。
进一步，
步骤4)中，在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量9倍的85％乙醇搅拌，搅拌12min后用胶体磨研磨50min，并置于超声频率45kHz，温度50℃下进行超声提取，提取18min，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用。
进一步，
步骤8)中，先将占木奶果提取液1 0.4重量份的聚乙二醇加热55℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.3重量份的明胶、0.04重量份的壳聚糖和步骤7)所得的木奶果提取液1搅拌均匀，最后于0℃冷藏1.5d，过滤除去沉淀，得到木奶果提取液2，备用。
进一步，
步骤10)中，将步骤9)所得的木奶果提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到木奶果提取物。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明采用胶体磨研磨、纤维素酶和果胶酶酶解技术、超声提取技术、乙醇回流、水提技术以及滤膜和聚酰胺柱纯化技术等，使木奶果保留许多有效成分如多酚、总糖和挥发油等，且能提高木奶果有效成分的提取率和效率。其中，多次胶体磨研磨，提高了细胞破碎率，且粒度均匀，从而提高提取效率；滤膜和聚酰胺柱纯化技术，提高了除杂率，从而提高提取物纯化率。
2、本发明采用整个木奶果的果实(包括果皮、果肉、果核)来提取木奶果，使木奶果提取物的有效成分更加丰富，同时达到了合理利用原料的目的，避免浪费。
3、本发明在木奶果提取液中加入聚乙二醇、明胶和壳聚糖，并结合冷藏处理，减少了木奶果提取物中多酚、总糖和挥发油等有效成分因氧化、挥发等因素而导致的损失，同时，也延长了木奶果提取物的贮存期。
具体实施方式
实施例1
一种木奶果提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将风干的木奶果果实洗净、消毒，粉碎成120目，并在60℃条件下干燥18min后，加入木奶果果实干燥后重量8倍的70％乙醇搅拌，搅拌8min后用胶体磨研磨35min；
2)将步骤1)所得的料液保持在温度45℃，并调节pH为5，同时加入占木奶果果实干燥后重量0.3％的复合酶酶解1.5h，其中，复合酶是由4重量份纤维素酶和3重量份果胶酶混合而成；
3)将步骤2)所得的酶解液于105℃保持8min灭菌后，置于超声频率45kHz，温度35℃下进行超声提取，提取15min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；
4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量9倍的85％乙醇搅拌，搅拌12min后用胶体磨研磨50min，并置于超声频率45kHz，温度50℃下进行超声提取，提取18min，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；
5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量9倍的80％乙醇搅拌，搅拌22min后用胶体磨研磨50min，并加热到85℃，回流提取1.5h，过滤，得到滤液3和滤渣3，备用；
6)在步骤5)所得的滤渣3中加入滤渣3重量7倍的水搅拌，搅拌22min后用胶体磨研磨50min，并加热到95℃，提取50min，过滤，得到滤液4，备用；
7)合并滤液1、2、3、4，并将滤液置于4500转/min的离心机上离心8min，过滤，得到木奶果提取液1，备用；
8)先将占木奶果提取液1 0.4重量份的聚乙二醇加热55℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.3重量份的明胶、0.04重量份的壳聚糖和步骤7)所得的木奶果提取液1搅拌均匀，最后于0℃冷藏1.5d，过滤除去沉淀，得到木奶果提取液2，备用；
9)将步骤8)所得的木奶果提取液2依次通过孔径为1μm的微滤膜、孔径为0.2μm的超滤膜进行纯化，得到木奶果提取液3，备用；
10)将步骤9)所得的木奶果提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到木奶果提取物。
实施例2
一种木奶果提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将风干的木奶果果实洗净、消毒，粉碎成100目，并在60℃条件下干燥15min后，加入木奶果果实干燥后重量5倍的60％乙醇搅拌，搅拌5min后用胶体磨研磨30min；
2)将步骤1)所得的料液保持在温度40℃，并调节pH为4，同时加入占木奶果果实干燥后重量0.2％的复合酶酶解1h，其中，复合酶是由3重量份纤维素酶和2重量份果胶酶混合而成；
3)将步骤2)所得的酶解液于100℃保持6min灭菌后，置于超声频率40kHz，温度30℃下进行超声提取，提取10min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；
4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量8倍的80％乙醇搅拌，搅拌10min后用胶体磨研磨40min，并置于超声频率40kHz，温度40℃下进行超声提取，提取15min，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；
5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量8倍的70％乙醇搅拌，搅拌20min后用胶体磨研磨40min，并加热到80℃，回流提取1h，过滤，得到滤液3和滤渣3，备用；
6)在步骤5)所得的滤渣3中加入滤渣3重量6倍的水搅拌，搅拌20min后用胶体磨研磨40min，并加热到90℃，提取40min，过滤，得到滤液4，备用；
7)合并滤液1、2、3、4，并将滤液置于4000转/min的离心机上离心5min，过滤，得到木奶果提取液1，备用；
8)先将占木奶果提取液1 0.3重量份的聚乙二醇加热50℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.2重量份的明胶、0.03重量份的壳聚糖和步骤7)所得的木奶果提取液1搅拌均匀，最后于-5℃冷藏1d，过滤除去沉淀，得到木奶果提取液2，备用；
9)将步骤8)所得的木奶果提取液2依次通过孔径为0.1μm的微滤膜、孔径为0.01μm的超滤膜进行纯化，得到木奶果提取液3，备用；
10)将步骤9)所得的木奶果提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用20％乙醇水溶液、40％乙醇水溶液洗柱，收集40％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到木奶果提取物。
实施例3
一种木奶果提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)将风干的木奶果果实洗净、消毒，粉碎成120目，并在60℃条件下干燥20min后，加入木奶果果实干燥后重量10倍的80％乙醇搅拌，搅拌10min后用胶体磨研磨40min；
2)将步骤1)所得的料液保持在温度50℃，并调节pH为6，同时加入占木奶果果实干燥后重量0.4％的复合酶酶解2h，其中，复合酶是由5重量份纤维素酶和4重量份果胶酶混合而成；
3)将步骤2)所得的酶解液于110℃保持10min灭菌后，置于超声频率50kHz，温度40℃下进行超声提取，提取20min，过滤，得到滤液1和滤渣1，备用；
4)在步骤3)所得的滤渣1中加入滤渣1重量10倍的90％乙醇搅拌，搅拌15min后用胶体磨研磨60min，并置于超声频率50kHz，温度60℃下进行超声提取，提取20min，过滤，得到滤液2和滤渣2，备用；
5)在步骤4)所得的滤渣2中加入滤渣2重量10倍的90％乙醇搅拌，搅拌25min后用胶体磨研磨60min，并加热到90℃，回流提取2h，过滤，得到滤液3和滤渣3，备用；
6)在步骤5)所得的滤渣3中加入滤渣3重量8倍的水搅拌，搅拌25min后用胶体磨研磨60min，并加热到100℃，提取60min，过滤，得到滤液4，备用；
7)合并滤液1、2、3、4，并将滤液置于5000转/min的离心机上离心10min，过滤，得到木奶果提取液1，备用；
8)先将占木奶果提取液1 0.5重量份的聚乙二醇加热60℃，至全部熔融，冷却到室温，然后依次加入0.4重量份的明胶、0.05重量份的壳聚糖和步骤7)所得的木奶果提取液1搅拌均匀，最后于5℃冷藏2d，过滤除去沉淀，得到木奶果提取液2，备用；
9)将步骤8)所得的木奶果提取液2依次通过孔径为1μm的微滤膜、孔径为0.2μm的超滤膜进行纯化，得到木奶果提取液3，备用；
10)将步骤9)所得的木奶果提取液3通过聚酰胺柱层析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分别用30％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液洗柱，收集60％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即可得到木奶果提取物。
另外，申请人对实施例1～3和背景技术(文献)制备的提取物进行多酚、总糖和挥发油测定，测定结果如表1所示。
表1提取物的多酚、总糖和挥发油测定结果
当然，上面只是本发明优选的具体实施方式作了详细描述，并非以此限制本发明的实施范围，凡依本发明的原理、构造以及结构所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围内。