专利名称：使用标记组合在心脏疾病的情况下作出预后判断的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于诊断心肌梗塞特别是在EKG中无ST抬高的心肌梗塞(NSTEMI)和/或对急性冠状动脉综合征进行危险度分层(riskstratification)的方法，通过对所要调查研究的患者进行至少3种标记的测定。此外，本发明提供了用于实行所述诊断方法的试剂盒。
已知多种标记可用于诊断冠状动脉疾病如NSTEMI和急性冠状动脉综合征，例如肌钙蛋白T、C反应蛋白(CRP)和脑钠尿肽(BNP)。这些标记之一的浓度升高与发生缺血事件包括死亡的可能性升高相关。这在例如以下文献中有所描述Hamm等(New Engl.J.Med.327(1992)，146-150)，Hamm等(New Engl.J.Med.340(1999)，1823-1629)，Heeschen等(The Lancet354(1999)，1757-1962)，Klootwijk和Hamm(The Lancet353，Suppl.II(1999)，10-15)，Wei等(Circulation88(1993)，1004-1009)，De Lemos(New Engl.J.Med.345(2001)，1014-1021)。在DeWinter等(Cardiovasc.Res.42(1999)，240-245)和De Winter等(Cl in.Chem.46(2000)，1597-1603)中，已经确定CRP和肌钙蛋白I或肌钙蛋白T是用于对急性冠状动脉综合征患者进行危险度分层的2个独立的标记。
然而，使用1种或2种标记的已知诊断方法的缺点在于不能成功地识别所有高危患者。因此本发明所基于的目标是发展一种用于诊断心肌梗塞和/或用于对急性冠状动脉综合征进行危险度分层的方法，所述方法可更好地识别高危患者。
该目标是这样实现的对所要调查研究的患者进行至少3种标记的测定，其中测定至少1种神经激素标记，至少1种缺血标记和至少1种炎症标记。
令人惊奇的是，已发现神经激素标记、缺血标记和炎症标记代表3组独立的危险度指示物，因此，当用于识别危险度增高和/或预后不良的患者时，根据本发明通过结合这3组标记，可产生累积增加的敏感性和特异性并因此得到更高的预测价值和更高的诊断有效性。而对于接受测试的患者，这可更好地指示合适的治疗措施。
由此产生的优点是当存在心脏疾病特别是在EKG中无ST抬高的心肌梗塞(NSTEMI)时，与包括测定个别标记的现有诊断方法相比，可以识别并适当处理更多的危险度增高和/或预后不良的患者。根据本发明在判断预后时将3种不同的标记组合的结果是可以进一步减少死亡和其它心脏并发症病例的发生数。
本发明的方法包括测定至少3种标记，其中测定至少1种神经激素标记，至少1种缺血标记和至少1种炎症标记。
神经激素标记可以选自例如心房(A-型)钠尿肽(ANP)、脑(B-型)钠尿肽(BNP)或其各自前肽的N-末端片段NT-ProANP和NT-ProBNP。优选ProBNP作为神经激素标记。
可以测定例如肌钙蛋白T或肌钙蛋白I作为缺血标记。特别优选测定肌钙蛋白T作为缺血标记。
炎症标记可以选自例如C反应蛋白(CRP)、白介素特别是IL-6和粘着分子如VCAM和ICAM。优选测定CRP或IL-6作为炎症标记。
优选这样进行本发明的组合测定，在取自待调查研究的患者的一个或多个样本中进行所述标记的平行测定。优选同时或紧接着在1次或多次测试中研究取自患者的一个或多个样本例如血液或血清样本。特别优选对单一一份患者样本进行测定。
组合的标记测定原则上可以基于任何已知的方法进行，使用普通的商业测定。例如可以使用自动化分析仪进行测定。或者，也可以使用快速测定，例如在急诊室、在病房或重症监护室、在救护车或医生办公室中应用，或作为患者自我测试。
所述标记的测定通常通过免疫测定的方法实现，使用针对所述标记的抗体。关于检测C反应蛋白作为炎症标记，参见例如Liuzzo等(N.Engl.J.Med.331(1994)，417-424)，Kuller等(Am.J.Epidem.144(1996)，537-547)，Price等(J.Immunol.Methods.99(1987)，205-211)或Eda等(J.Clin.Lab.Anal.12(1998)，137-144)。用于检测C反应蛋白的特别优选的测试是免疫浊度测定，例如Roche Diagnostics GmbH，Mannheim的Tina-Quant-Test。
检测BNP或NT-ProBNP作为神经激素标记在例如以下文献中有所描述Richards等(Circulation97(1998)，1921-1929)，Struthers(Eur.Heart J.20(1999)，1374-1375)，Hunt等(Clin.Endocrinol.47(1997)，287-296)，Talwar等(Eur.Heart J.20(1999)，1736-1744)，Darbar等(Am.J.Cardiol.78(1996)，284-287)以及EP-A-0 648 228和WO 00/45176。特别优选的测试是电化学发光免疫测定，例如Roche Diagnostics GmbH，Mannheim的“ECLIA”测试形式。
关于对作为缺血标记的实例肌钙蛋白T的测定，参见Katus等(Mol.Cell.Cardiol.21(1989)，1349-1353)，Hamm等(N.Engl.J.Med327(1992)，146-150)，Ohmann等(N.Engl.J.Med.335(1996)，1333-1334)，Christenson等(Clin.Chem.44(1998)，494-501)和多种其它出版物，以及EP-A-0394819。用于检测肌钙蛋白T的特别优选的测试是电化学发光免疫测定，例如Roche Diagnostics GmbH，Mannheim的Elecsys肌钙蛋白T和Elecsys肌钙蛋白T STAT测试形式。
本发明的另一方面是用于诊断急性冠状动脉综合征的试剂盒，其包含用于测定至少3种标记的检测试剂，其中在每种情况下存在至少一种对神经激素标记的检测试剂，在每种情况下存在至少一种对缺血标记的检测试剂，和在每种情况下存在至少一种对炎症标记的检测试剂。
所述试剂盒优选设计成适于进行标记的平行测定，特别是适于对单一一份患者样本进行测定。有利的是使用用于此目的的检测试剂，从而可使用单一的测试形式(例如Enzymun测试、电化学发光测试、浊度测定或在试验条上进行的快速测定)测定全部3种标记。
所述试剂盒可用于识别危险度增高和/或预后不良的急性冠状动脉综合征患者。所述试剂盒可设计成适于在自动化分析仪上进行测定或适于进行快速测定。
本发明将通过以下实施例作进一步解释。
实施例实施例1对500名急性冠状动脉综合征(NSTEMI)患者进行3种标记-肌钙蛋白T、NT-ProBNP和CRP的调查研究。用Roche DiagnosticsGmbH，Mannheim的肌钙蛋白T STAT-Test测定肌钙蛋白T，用RocheDiagnostics GmbH，Mannheim的Tina-QuantCRP Test测定CRP，并用Roche Diagnostics，Mannheim的ECLIA Test测定NT-ProBNP。根据制造商的使用说明进行各测定。
所有3个参数均能区分30天预后不良(死亡和心肌梗塞)的患者和30天无事件发生的患者。
图1显示了对于肌钙蛋白T(TnT)的曲线。
图2显示了对于NT-ProBNP的曲线。
图3显示了对于CRP的曲线。
此外，通过多变量分析确定了所述3个参数彼此独立。
图4显示了NT-ProBNP值与肌钙蛋白T值之间的相关性。可以看出某些被调查研究的患者仅有其中一个参数的值增高。
实施例2对1848名患者进行了三种标记-肌钙蛋白T、NT-ProBNP和CRP的调查研究。使用来自Roche的分别的ELISA测试测定所有3个参数。实施例1的结果可以提到证实。对于肌钙蛋白T测定(检出限0.01pg/L)，采用0.1pg/L的截断值(区分阳性和阴性)，对于NT-ProBNP测定(检出限5ng/L)，采用400ng/L的截断值。对于CRP测定(检出限0.5mg/L)，采用15.0mg/L的截断值。NT-ProBNP值非常重要，特别是对于短期预后，例如对于随后72小时的进程。
图5显示了NT-ProBNP值与肌钙蛋白T值之间的相关性。
图6显示了对于所有患者(a)或对于NSTEMI患者(b)的30天随访结果，即死亡或心肌梗塞(MI)的百分比与参数NT-ProBNP和肌钙蛋白T以及其组合的关系。
使用的缩写NSTEMI无ST段抬高的心肌梗塞VCAMvc粘附分子ICAMic粘附分子ECLIA电化学发光免疫测定
权利要求
1.用于诊断心肌梗塞和/或对急性冠状动脉综合征进行危险度分层的方法，其中对所要调查研究的患者进行至少3种标记的测定，在每种情况下测定至少1种神经激素标记，至少1种缺血标记和至少1种炎症标记。
2.权利要求1的方法，其中神经激素标记选自A-型钠尿肽(ANP)、pro-ANP的N-末端片段(NT-ProANP)、B-型钠尿肽(BNP)和pro-BNP的N-末端片段(NT-ProBNP)。
3.权利要求2的方法，其中测定NT-ProBNP作为神经激素标记。
4.权利要求1的方法，其中缺血标记选自肌钙蛋白T和肌钙蛋白I。
5.权利要求4的方法，其中测定肌钙蛋白T作为缺血标记。
6.权利要求1的方法，其中炎症标记选自C反应蛋白(CRP)、白介素如IL-6和粘着分子如VCAM或ICAM。
7.权利要求6的方法，其中测定CRP和/或IL-6作为炎症标记。
8.权利要求1-7之一的方法，用于识别危险度增高和/或预后不良的患者。
9.权利要求1-8之一的方法，其中进行标记的平行测定。
10.权利要求1-9之一的方法，其中对单一一份患者样本进行测定。
11.权利要求1-10之一的方法，其中在自动化分析仪上进行测定。
12.权利要求1-10之一的方法，其中将所述测定作为快速测定进行。
13.用于诊断心肌梗塞和/或对急性冠状动脉综合征进行危险度分层的试剂盒，其包含用于测定至少3种标记的检测试剂，其中在每种情况下存在至少一种对神经激素标记的检测试剂，在每种情况下存在至少一种对缺血标记的检测试剂，和在每种情况下存在至少一种对炎症标记的检测试剂。
14.权利要求13的试剂盒，用于进行所述标记的平行测定。
15.权利要求13或14的试剂盒，用于对单一一份患者样本进行测定。
16.权利要求13-15之一的试剂盒，用于在自动化分析仪上进行测定。
17.权利要求13-16之一的试剂盒，用于将所述测定作为快速测定进行。
18.权利要求13-17之一的试剂盒用于识别危险度增高和/或预后不良的急性冠状动脉综合征患者的用途。
全文摘要
本发明涉及用于诊断心肌梗塞特别是在EKG中无ST抬高的心肌梗塞(NSTEMI)和/或对急性冠状动脉综合征进行危险度分层的方法，通过对所要调查研究的患者进行至少3种标记的测定。此外，本发明提供了用于实行所述诊断方法的试剂盒。
文档编号G01N33/53GK1459633SQ03131429
公开日2003年12月3日 申请日期2003年5月14日 优先权日2002年5月14日
发明者C·哈姆, E·施帕努特 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司