检测膀胱移行细胞癌的非侵入性体外方法

专利名称：：检测膀胱移行细胞癌的非侵入性体外方法
技术领域：
：本发明涉及一种通过尿分析来检测个体的尿中的膀胱移行细胞癌的存在的非侵入性体外方法，以及衍生自所挑选的蛋白质的肽序列的用途和实现该方法的一种试剂盒。
背景技术：
：膀胱癌是最常见的尿道癌症；它也是在男性中第四常见和在妇女中第八常见的癌症。它包括很大范围的多种组织学类型的肿瘤包括膀胱移行细胞癌(BTCC，90%),扁平上皮癌(7W，腺癌(2%)和未分化癌(1%)。肿瘤的等级和阶段是BTCC的最佳预后指标。依照世界卫生组织(WHO)随着分化状态的减少和侵袭性的增加，膀胱肿瘤在细胞形态学上被分级为从Gl(低度恶性)到G3(高度恶性)。根据阶段或浸润性，BTCC类被分类为表面乳头状的(Ta和Tl)，肌层浸润性的(T2到T4)，或不常见的原位癌或原位肿瘤(TIS)。低度恶性肿瘤通常被限制在黏膜或渗入表面层(Ta和Tl阶段)。多数高度恶性肿瘤至少在Tl阶段(侵入固有层)就被查出。大约75%被诊断的膀胱癌病例是在浅表的。剩余的25%在诊断时是肌层浸润性的。浅表BTCC的患者预后良好，但是复发的风险有70%。尽管风险这么高，Ta肿瘤倾向于是低度恶性的，并且仅有10-15%在2年内将发展到肌层浸润性的。然而发展到T2阶段的Tl肿瘤的该百分比更高(30-50%)。目前，对个体的膀胱癌的最佳诊断系统是通过膀胱镜检察和尿道切片^r查法或是通过切除术，都以侵入性的过程为代表。可变形的膀胱镜使技术的侵袭性较小，但它依然是侵入性的和高度令人不快的，仍然需要某种形式的麻醉。BTCC诊断的主要非侵入性技术是通过对尿中细胞进行形态检查以鉴别新成型细胞。因此，目前用细胞学监测已确诊的和经过治疗的膀胱癌患者。虽然尿细胞学能检测出膀胱镜检察不出的原位肿瘤，以及位于膀胱上端或尿道上部，即输尿管、骨盆和肾脏的肺瘤，但是几项研究表明，细胞学在膀胱癌诊断上的敏感性非常低，对50%的肿瘤漏诊。细胞学的发现少，并且可能与易反应或退化过程相混淆。细胞学研究要求专家，单独评估，这延迟了结果的可用性并且进一步导致主观性和最后结果的分歧。实际上，还没有可用于诊断膀胱癌的高灵敏度和特异性的非侵入性方法(BomanH.etal.,JUrol2002,167:80—83)。为了改进非侵入性的癌症检测已经做了许多努力。在肿瘤细胞表达镨上的最新进展通过蛋白组技术、高分辨率二维电泳法和质镨分析使识别作为膀胱癌的肿瘤标记的候选蛋白质成为可能，如核基质蛋白NMP22(SolowayM.S.etal.,JUrol1996,156:363-367),透明质酸和透明质酸酶(PhamHT.etal.，CancerRes1997,57:778—783),基底膜复合体(BTA，PodeD.etal.，JUrol1999，161:443—446)，癌胚抗原(CEA,HalimA.B.etal.,lntJBiolMarkers1992;7:234-239)，尿溶蛋白II(WuX.R.etal.，CancerRes1998;58:1291-1297)，离散因子/肝细胞生长因子(SF/HGF，GohjiK.etal.,JClinOncol2000;18:2963-2971)，角蛋白质/细胞角蛋白家族，如细胞角蛋白20(Buchumenskyv.etal.,JUrol1998,160:1971—1974),细月包角蛋白18(Sanchez-CarbayoM.etal.，ClinCa腦rRes2000,6:3585-3594)，乳房肺瘤8—Ka蛋白(MAT-8,MorrisonB.W.,JBiolChem1995，270:2176—2182)和端粒酵(LeeD.H.etal.,ClinicalCancerResearch1998,4:535-538)。MemonA.A.等(CancerDetectPrev2005，29:249-255)确定了在膀胱癌的细胞系和切片中有七种差异表达的蛋白质。然而没有使用对照做比较。Langbein,S.等(TechnolCancerResTreat2006，67-71)公开了用2D-PAGE和SELDI-T0F-MS技术的膀胱癌患者的切片检查的蛋白谱。RasmussenH.H,等(JUrol1996，155:2113-2119)/〉布了存在于膀胱癌患者尿中表达最高的蛋白质的一个数据库。CeNsJ.E.等(电泳法，1999,300-309)描述了存在于膀胱癌患者的切片检查中蛋白质的一个数据库。然而，因为作者没有给出健康样品对肿瘤样品中蛋白质的定量差异图语，在这些参考文献中没有一篇确定了标记。此外，没有已在临床试验上被证明能用于预测膀胱癌的预后和程度的标记(MiyakeH.etal.，JUrol2002,167:1282—1287)。
发明内容本发明提供了一种涉及与BTCC相关蛋白质的高灵敏度，有效快速的非侵入性体外方法。它进一步涉及一种通过尿样分析来诊断、预后和监视BTCC的方法。本发明出人意料地通过尿分析为BTCC的检测提供膀胱癌生物标记。本发明的一种优选具体实施方式涉及通过尿分析检测BTCC的40种膀胱癌生物标记，它们对BTCC的检测、诊断、预后和监视有重要价值。氨基酰化酶-1(ACY1)是一种催化酰化L-氨基酸水解为L-氨基酸和酰基基团的细胞液同型二聚体的锌结合酶，被假定在酰化氨基酸代谢分解和抢救中起作用。ACYl被确定为属于染色体3p21.1,该区域减少小细胞肺癌(SCLC)的纯质性，并且有报告它在SCLC细胞系和肿瘤中的表达减少或检测不到。ACYl是锌结合酶一个新家族的第一个成员。醛类还原酶(AKR1A1)属于醛基/酮基还原酶家族，它涉及生物源的和外来的醛的减少并且实际上存在于每个组织中。醛缩酶B(ALDOB),也称果糖1-磷酸酰醛缩酶，在肝脏、肾脏和脑中产生。它对于果糖的降解是必要的。a-淀粉酶(AMY)类癌，胰a-淀粉酶和a-淀粉酶1A属于糖基水解酶13家族并且水解在低聚糖和多聚糖中的1，4-a-糖苦键，并且因此是催化饮食中淀粉和糖朊的消化的第一步。人的染色体有一个在唾液腺或胰腺中高水平表达的几个淀粉酶基因的群。膜联蛋白IV(AMA4)属于钙依赖性磷脂结合蛋白的膜联蛋白家族。虽然它们的作用仍然不明确，膜联蛋白家族的几个成员在与膜相关的内吞和内吞通路中相关连。在上皮细胞中ANXA4几乎被专有表达。载脂蛋白A-1(AP0A1)属于载脂蛋白Al/A4/E家族，并且其参予了胆固醇排泄从组织到肝脏的反向运输，并且这是通过其作为卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的一个辅助因子而促进胆固醇从组织外流。胆绿素还原酶A(BIEA)属于gfo/idh/moca家族和胆绿素还原酶亚族，并降低开放式四吡咯，胆绿素IXoc的y-亚甲基桥，其随着NADH或NADPH的伴随氧化作用被变为胆红素。黄素还原酶(BLVRB)催化从还原的吡咬核苷酸到黄素以及亚甲蓝、吡咯喹啉对苯二酮、核黄素或高铁血红蛋白的电子转移。BLVRB可能是在保护细胞避免从氧化损伤或在调控的铁代谢中的一个成员。在肝脏中，它将胆绿素转换成胆红素。它主要在肝脏和红血球中表达，在心脏、肺、肾上腺和大脑中以较低的水平表达。组织蛋白酶D(CATD)是一种属于肽酶Al家族的酸蛋白酶并激活细胞内蛋白质降解。它涉及几种疾病发病原理例如膀胱癌(0zerE.，etal.，Urology199954:50-5andloachimE.,etal.，AnticancerRes2002，22:3383—8)乳&泉癌，还可能涉及老年痴呆症。组织蛋白酶D被合成为一个不活泼的52kDa的前体，由二个14kDa(CATDH)和一个34kDa(CATDK)的多肽形成。不活泼的肽通过N-末端的解朊作用激活形成48kDa酶化活if夭蛋白质。补体C3前体(C03)在补体系统的活化中起到关键作用。其通过C3转化酶的处理是两条补体通路中的关键反应。C03与尿殖肿瘤有关(DunzendorferU.，et.al，EurUrol1980，6:232-6)。细胞液非特异性的二肽酶(CPGL1)属于肽酶M20A家族并且也称为组织力几肽酶和肽酶A。它是非特异性的二肽酶而不是一种有选择性的肌肽酶。a-烯醇化酶(ENOA)是一种多功能的酶，它也在多种过程例如生长控制，耐缺氧和过敏反应的糖酵解中起到一部分作用。它在血管内和细胞周围的纤维蛋白溶解酶系统中可能也起作用，由于它能作为几种细胞类型如白血球和神经元的细胞表面的受体和纤溶酶原活化剂。哺乳动物的烯醇化酶由3个同工酶亚基，a,P和Y组成，能形成细胞型且非特异性发展的同型二聚体或异型二聚体。ENOA与神经细胞质膜上的PLG的相互作用并促进它的活化。它^皮用作许多肿瘤的一个诊断标记，并且，其异型二聚体形式，a/v，作为心脏骤停后缺氧脑伤的一个标记。它与膀胱癌有关(lczkowskiLA.,et.al,病理组织学，1999，35:150-6)。铁蛋白轻链(FRIL)属于铁蛋白家族并且是在原核生物和真核中主要的细胞内贮存铁的蛋白质。它由24个亚基的重的和轻的铁蛋白链组成。在铁蛋白亚基构成上的变化能影响不同组织的铁吸收率和释放率。铁蛋白的主要功能是在可溶的和无毒的状态下贮存铁。RabGDP解离抑制剂p(GDIB)属于rabgdi家族并调控rab家族成员的GDP/GTP交换反应，ras超级家族的小GTP结合蛋白，涉及细胞器之间的分子膜泡运输。GDIB被普遍表达。血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPX3)属于谷胱甘肽过氧化物酶家族并通过还原的谷胱甘肽催化过氧化氢、有机氩过氧化物和油脂过氧化物的还原反应并起到保护细胞对抗氧化损伤的功能。人的血浆谷胱甘肽过氧化物酶被证实是一种含竭的酶。GPX3表达显示出组织特异性。谷胱甘肽合成酶(GSHB)对许多生物功能是重要的，包括保护细胞免受来自自由基的氧化损伤，对外来异物的解毒和膜转运。凝溶胶蛋白(GSN40和GSN80)是一种钩调控的，调整肌动蛋白的蛋白质，结合在肌动蛋白单体或细丝的正末端，防止单体交换(端基封闭或加帽反应)。它能促进单体装配入细丝(成核现象)，也能切断现有的细丝。另外，该蛋白质结合在肌动蛋白和纤维连接蛋白上。虽然它未被描述为生物标记，即，它在健康个体中的表达水平未被比较并且未被对癌症患者定量，但是它已与膀胱癌相l关系(Rasmussen，H.H.etal.，JUrol1996,155:2113—2119;HagaLHokkaidolgakuZasshi2003年，78:29-37;CelisAetal.,Electrophoresis1999，20:355-61)。谷胱甘肽硫转移酶(GSTP1)属于通过催化许多疏水和亲电的化合物与还原型谷胱甘肽结合而成为解毒中一个重要角色的一个酶家族。细胞质异柠檬酸盐脱氢酶(IDHC)属于异杵檬酸盐和异丙基苹果酸脱氬酶家族并且催化异柠檬酸盐的氧化去羰基形成a-酮戊二酸盐。膜泡整蛋白VIP36前体(LMAN2)是细胞内凝集素的早期分泌通路中一个角色。与N-乙酰基-D-半乳糖胺和高甘露糖型聚糖相互作用，并且也可结合到0-连接的聚糖。它涉及高甘露糖类聚糖的糖蛋白的转运和排列。淋巴细胞抗原6复合体，位点6G6E(LY6G6E)属于淋巴细胞抗原6超级家族。这个家族的成员富含半胱氨酸，通常为GPI锚定的细胞表面蛋白，有确定的或想象的免疫相关作用。它的特定功能是未知的。甘露聚糖结合的凝集素丝氨酸蛋白酶2，前体(MASP2)属于肽酶sl家族并且据推测在甘露糖结合凝集素的胰蛋白蛋白酶(MBL)补体活化功能通路的启动中扮演一个重要的角色。在活化后它乂人C4裂解为C4A和C4B。尼克酰胺乙酰乙酸水解酶(MDC)属于nadC/modD家族并且是从色氨酸到NAD的从头合成通路中的一个中介，并且是通过神经元中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的超刺激的一种潜在的内生兴奋毒素。大脑中NADC水平的升高与神经退^f于性失调如癫痫症、老年痴呆症和亨廷顿病的发病才几理相关。它还未与癌症相l关系。NapsinA(NAPSA)属于肽酶al家族并且它在肾脏中以最高水平表达，在肺中以适度水平表达并且在脾脏和脂肪组织中以低水平表达。它可能涉及肺细胞表面活化剂前体的处理。增生扩散相关蛋白质2G4(PA2G4)是在核定位时显示细胞周期特异性变化的单链DNA结合蛋白质，属于肽酶m24c家族。当蛋白质在回应有丝分裂原刺激下表达时，它可能属于维护增生扩散细胞的细胞周期活动的细胞周期管理蛋白质或复制蛋白质的一个大家族。致癌基因DJ1(PARK7)在胰腺、肾脏、骨骼肌、肝脏、睾丸和心脏中被高度表达并且对雄激素受体依赖的转录起到正调节。它能作为氧化还原功能敏感型伴侣和作为氧化压力的传感器。它防止SNCA的聚合并且保护神经元以防氧化压力和细胞死亡。多(rc)-结合蛋白1(PCPB1)是优选与低聚dC结合的单链核酸结合蛋白。它能在细胞核和细胞质之间穿梭。它在骨骼肌、胸腺和外周血液白细胞中大量表达，在前列腺、脾脏、睾丸、卵巢、小肠、心脏，肝脏，肾上腺和曱状腺中所观察到的表达较低。程序性细胞死亡6相互作用蛋白(PDC6I)在脑、心脏、胎盘、肺、肾脏、胰腺、肝脏、骨骼肌和耳蜗中被表达，并且可能在凋亡和细胞增殖的调节中扮演一个角色。它与PDCD6/ALG-2和SH3KBP1相互作用。溶酶体酸性磷酸酶前体(PPAL)属于组氨酸酸性磷酸酶家族并且水解正;粦酸的单酯为醇和磷酸盐。抗氧化蛋白2(PRDX2)属于ahpc/tsa家族并且涉及细胞的氧化还原调节。它通过还原硫氧还蛋白系统提供的等同物来还原过氧化物。它不能从谷氧还蛋白接受电子。它在消灭新陈代谢时产生的过氧化物中可能扮演一个重要角色。它能通过调控细胞内的H202浓度参与增长因子和ot-肿瘤坏死因子的信号发生的联级反应。它能提高天然杀伤(NK)细胞的活性。谷氨酰胺酰肽环转移酶(QPCT)对焦谷氨酰肽生物合成负责。它偏向酸性并且在谷氨酸N末端附有色氨酸残基。血浆维生素A结合蛋白质(RETBP)属于泪液蛋白家族并且是维生素A的(维生素A醇)在血液中的特异性载体。它将肝脏贮存的维生素A运送到外周组织。血浆中RBP维生素A复合体与甲状腺素蛋白相互作用，以防止它通过肾脏小球时过滤的损失。维生素A的缺乏阻碍了翻译后结合蛋白的分泌并且导致了其对表皮细胞的传输和供应的缺乏。硒结合蛋白质(SBP1)属于硒结合蛋白质的家族。硒是一种显示出潜在抗癌特性的基本营养素；硒的缺乏可能导致某些神经疾病，有人提出硒在防止癌症和神经疾病上的功能也能由硒结合蛋白调节。磷酸化应激诱导蛋白1(STIPl)是调节分子伴估HSC70和HSP90(HSPCA和HSPCB)的结合的一种4妄头蛋白。转醛醇酶(TALDO)属于转醛醇酶家族并且是为核酸合成提供核糖-5-磷酸盐以及为油脂生物合成提供NADPH的非氧化性戊糖磷酸盐通路的一种关键酶。这条通路也能维护还原状态的谷胱甘肽进而在氧自由基下保护巯基基团和细胞的完整性。甲状腺素蛋白(TTHY,旧称前白蛋白)是脊推动物血液中发现的3种曱状腺激素结合蛋白质之一。它产生于肝脏并在血液中循环，在那儿它与维生素A和甲状腺素相结合。WD重复蛋白1(WDR1)属于wd重复aipl家族并且与ADF/丝切蛋白家族蛋白质一起导致肌动蛋白细丝的解聚。癌症可以通过分析测试尿样中的至少一种膀胱癌生物标记的表达才莫式而查出。因此，检测尿检样品中的至少一种差异表达的蛋白质并与正常尿比较可用来指示BTCC。尿液样品的组成差异很大。所以，为了计算总蛋白含量的不同和消除样品与样品之间的偏差，标准化是关键。在尿中含量恒定的对照蛋白质的表达水平，可由于信号水平的标准化。文献中有许多这些非易变蛋白质的例子。在本发明中，铁传递酶显示为非易变蛋白质。本发明中识别代表性膀胱癌的蛋白质或生物标记包括，但不限于TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP(也在40种膀胱癌生物标记中被提到)。本发明一方面涉及一种非侵入性的体外方法，包括a)检测和定量存在于一个来自个体的尿检样品中的一种或多种生物标记；和b)比较a)中测试尿样得到的表达测量值与正常尿的对应标准值，其中a)中得到的测量值与正常尿的对应标准值相比的变化指示了BTCC。该方法适用于检测BTCC的存在，4企测这种癌症的阶|殳或严重程度的筛选。此外，该方法也被用于外科切除术后估计疾病的缺乏，建立这种癌症诊断和预后和/或监测对患有这种癌症的个体给药的治疗效果。发明另一方面涉及应用一种或多种来源于尿中存在的生物标记的肽序列，通过尿分析检测BTCC的存在，确定这种癌症的阶4爻或严重程度，在外科切除术后估计缺乏疾病，建立该癌症诊断和预后和/或监测对患有所述癌症的个体给药的治疗效果。发明另一方面涉及应用一种或多种来自40种膀胱癌生物标记的核苷酸或肽序列，或它们的转录或翻译前的产物，单独或任意结合，用筛选的方式来鉴别，发现并评估治疗BTCC的药物。发明还提供了直接针对这种膀胱癌生物标记的抗体。这些抗体能以适用于一种特殊用途的多种形式被提供，包括，例如，以可溶的形式，固定在基质上，或与一种药学上可接受的载体相结合。发明另一方面涉及前定义的执行该方法的试剂盒包括l)至少一种尿中的癌症生物标记的特异性识别抗体和2)—种适于包装的载体。发明另一方面涉及与BTCC参考表达谙，包括一种或多种膀胱癌生物标记表达的^t式。不同的BTCC参考表达谱可能建立并可能与不同的癌症阶段相关。本发明目的使用了以下定义术语"癌症"是指以异常或无序的细胞成长为典型特征的，能够侵略相邻组织并传播到远处器官的疾病。术语"癌"是指由异常或无序的细胞长成的组织。术语"过渡膀胱细胞癌"或它的简称"BTCC"是指其中任一种在膀胱上皮细胞中恶性增生性的失调。术语"肿瘤"是指一种从新塑造过程引起的任何组织的异常大量增生，不论它是良性的(非癌)或恶性的(癌)。术语"膀胱癌蛋白质或生物标记，，是指有在BTCC中差异表达的蛋白质，即，来自一个健康个体的尿的与来自一个BTCC患者的尿的相比在表达上的不同的蛋白质。本发明中包括的差异表达的蛋白质组中的蛋白质，包括选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、E醒、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP的所有40种生物标记，还有当二种不同尿样，一种来自一个健康个体且一种来自移行细胞癌的患者，相比较时，比率变化至少为二倍的尿样中任何蛋白质量化使用了图像分析软件如ProgenesisPG220软件。这里描述的膀胱癌生物标记可以是任意长度的并进一步包括从原生蛋白质获得的附加序列和/或异种序列，任何转录的或转录后的变异，以及所有与所述序列有至少95%同一性的序列，其中同一性被定义为二个字列之间残基相同的百分比。那些本领域普通技术人员所知的这些其它部分或变异也可用于癌症的治疗和检测中。术语"测量一种或多种生物标记"意味确定一种或多种生物标记的存在，然而术语"定量一种或多种生物标记"意味一种或多种生物标记表达存在的值(例如作为强度值)。术语"BTCC的指示"意味着在测试尿样中一种或多种生物标记的测量中找到的变异与正常尿对应的标准值相比作为BTCC存在的证明。术浯"变异，，是指在蛋白质的表示上的水平的一个变化。术语"差异表达的蛋白质"是指BTCC患者的尿与一个健康个体尿相比有变化(增加或减少)的蛋白质。术语"倒转表达"是指二种表达模式相反的差异表达的蛋白质(即，当在样品中一种过度表达时另一种被抑制，反之亦然)。术语"蛋白质提取物"对应于尿样在离心后得到的上清液。术语"个体"是指哺乳动物类的所有动物种类并且包括，但是不限于，家畜和牲口、灵长类和人，并优选是指所有年龄或种族的一个雄性或雌性。术语"健康个体"是指一个未得BTCC的人，也可能包括其他泌尿道疾病的患者。术语"以前被诊断的"是指一个已经收到了BTCC的肯定诊断的人。术语"以前未被诊断的"与从未收到了BTCC的肯定诊断(重新诊断)的人。术语"正常尿中的标准值"是指在已知未患BTCC的个体的单独尿样测量一种或多种生物标记的平均表达水平的量化。术语BTCC的"诊断"是指通过评估一种或多种BTCC生物标记来辨认或确定BTCC的种类和起因的过程。术语"预后"是指疾病的可能结果，即痊愈或复发的可能性。术语"监测"意味在不同时间个体中BTCC存在或不在的评估。术语"治疗"是指所有直接或间接的过程、行动、应用或类似物，其中个体是在医疗帮助下改善他的情况。术语"特异性"是指当疾病实际上不存在时，一种测试排除疾病的存在的能力。特异性被表示为有正确的否定测试结果的健康个体的数量(这个小组称为真阴性组)，除以真阴性和有不正确的肯定测试结果的健康个体的数量(这个小组称为假阳性组)的总和。术语"敏感性"是指当疾病真实地存在时，测试查出疾病的能力。^t感性被表示为有正确的肯定测试结果的患病的患者的数量(这个小组称为真肯定组)，除以真肯定组和有不正确的否定测试结果的患病的患者的数量(这个小组称为假否定组)的总和。术语"稳定性"定义了数字表示方法尽管最初样品发生了变异仍能提供同样结果的能力。术语"基因"是指编码蛋白质的脱氧核苷酸分子链的一个区域，并且可能代表编码序列的一部分或一个完整的编码序列。术语"蛋白质"是指分子间通过共价或非共价鍵连接的至少一条氨基酸分子链。该术语包括所有翻译后蛋白质修饰的所有形式，如糖基化、磷酸化或乙酰化。术语"肽"和"多肽"是指蛋白质片段的氨基酸分子链。术语"蛋白质"和"肽"是难以区分的。术语"抗体，，是指回应抗原刺激而被分泌入血液或淋巴的，并且显示出和称作"抗原"的目标分子的特异性结合活性的B细胞表面的一种Y形蛋白质(叫作免疫球蛋白)，抗原如一种外来的蛋白质、细菌、病毒、寄生生物或被移植的器官。免疫球蛋白的抗原结合区域可以被划分成F(ab')2或Fab片段。术语"抗体'，包括单克隆和多克隆抗体，和来自它们的完整个体或片段；还包括人的抗体、人源化的抗体和非人源化的抗体。"非人抗体"是指除人类外的动物种类产生的抗体。"人源化抗体，，是将鼠抗体中最小的鼠源部位熔合在人的抗体上的基因工程抗体。通常，人源化抗体5-10%来源于老鼠和90-95%来源于人。"人的抗体"是抗体获得从运载人的抗体基因的基因改造的老鼠或从人类细胞。"单克隆抗体"是同种的，直接针对一个唯一抗原位点或"决定部位"目标分子的高度特异性抗体种类。"多克隆抗体"包括异种的，针对不同的抗原决定的目标分子的抗体种类。术语"特异性抗体"是指所产生的针对特异性蛋白的抗体(在这种情况下针对一种特殊膀胱癌标记)。术语"抗体蛋白质复合体"是指抗原和它的特异性抗体形成的复合体。术语"组合体"(组合抗体)是指在纤维状噬菌体上显示的抗体，允许cDNA库直接筛选细胞表面易反应抗体的表达，抗体的生产和纯化不需要使用细菌或真核状态的细胞系统。术语"Fab重组抗体"是指只包含单价的Fab片段的重组抗体，抗体对其抗原时有非常高的亲合力。如果知道蛋白质序列，它们可由细胞重组获得。术语"ScFv抗体片段"是指可用细菌培养表达的一个单链易变的片段(scFv)。术语"表位"是指蛋白质的一个抗原决定部位，是特异性抗体识别蛋白质的氨基酸序列。这些表位也许包括相邻分枝的氨基酸(线性表位)或由于多缩氨基酸链的三维折叠被带入而接近的不相邻的氨基酸(不连续的表位)。术语"固相"是指抗体可结合的一种非水的基质。固相材料的例子包括，但是不限制于玻璃、多聚糖(例如琼脂糖)，聚丙烯酰胺、多苯乙烯、聚乙烯醇和硅。固相形式的例子是平板的孔或净化柱。术语"试纸，，是指浸入液体以确定和/或定量液体的一些特性(化学的，物理的，等等)的一个测试设备。这种试纸通常由纸或纸板制成并用以颜色变化指示某些特性的液体浸透。术语"载体"是指用于运栽或传递某些物品的一个机械或设备。术语"包装"是指在销售前以产品的购买和使用为根本目的包裹和装入。术语"生物芯片"是指为了达到更高的生产量和速度的，能使许多测试同时执行的排列在固体物质上的小型化的测试位点的集合。在发明的一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量来自个体的一个尿检样品中的一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL1、GDIB、GPX3、GS服、GSTP1、歷C、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP(也指40种膀胱癌生物标记)或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量来自个体的一个尿4企样品中的一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的笫一步包括检测尿枱r样品中至少二种生物标记或其中的一个转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括检测尿检样品中至少三种生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括检测尿检样品中至少四种生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括检测尿检样品中至少五种生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、I匿、LY6G6E、MSP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其转录或翻i奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、駄SP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1和STIP1或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿;^样品中一种或多种生物标记，其选自TTHY、CATDHl、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中一种或多种生物标记，其选自TTHY、CATDH、CATDK、EN0A、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2和PRDX2或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中一种或多种生物标记，其选自TTHY、AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AP0A1和RETBP或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AMY、AP0A1和GSN40或其转录或翻i奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿^r样品中AMY、AP0A1和ENOA或其转录或翻i奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿^r样品中AP0A1、GSN40和TTHY或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括在测量尿检样品中CATDK、GSN80和IDHC或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AMY、AP0A1、GSN40和IDHC或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中CATDH、ENOA、GSTP1和PRDX2或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中CATDK、EN0A、PRDX2和TTHY或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AMY、CATDK，EN0A、IDHC和PRDX2或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其转录或翻i奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中CATDH、ENOA、GSTP1、MASP2、PRDX2和TTHY或其转录或翻;奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中AMY、AP0A1、CATDK,ENOA、IDHC、PRDX2和TTHY或其转录或翻i奪后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿^t全样品中一种或多种生物标记，其选自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80或其转录或翻译后的变异，和一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、E歸、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、,C、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1和RETBP，或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量尿检样品中一种或多种生物标记，其选自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80或其转录或翻译后的变异，和一种或多种生物标记，其选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、擺C、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量一种或多种生物标记，其选自CATDH、CATDK、EN0A、GSHB、GSTP1、IDHC、PRDX2和TTHY或其转录或翻译后的变异，和一种或多种生物标记，其选自ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、C03、CPGL1、FRIL、GDIB、GPX3、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，膀胱癌评估方法的第一步包括测量一种或多种生物标记，其选自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、GSTP1、IDHC、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异。另一个具体实施方式涉及一种非侵入性的体外方法，其包括定量两种不同的生物标记之间的一个或多个比值，其选自来自个体的尿抬r样品的40种膀胱癌生物标记或与其相关的转录或翻"i奪后的变异，并且将尿4全样品所得的测量值与正常尿的相对应的标准值相比，其中的变化指示BTCC。在另一个具体实施方式中，方法允许比较得自同一病人在BTCC进程的不同时间的不同样品中的同样一种或多种蛋白以确定疾病的进程。在另一个具体实施方式中，一种或多种发明的生物标记也可被用于监测药物或手术治疗的效果。在另一个具体实施方式中，被分析的样品得自以前未被诊断为BTCC的个体。在另一个具体实施方式中，被分析的样品得自以前被诊断为BTCC的个体。在另一个具体实施方式中，4皮分析的样品得自目前正在接受治疗对抗BTCC的个体。在另一个具体实施方式中，方法包括得到样品的蛋白质提取物。检测典型地包括光谱法或免疫测定法。光谱法是典型地表面增强的激光解吸附或电离(SELDI)质语法/矩阵协助的激光解吸附/电离(MALDI)质谱法。免疫测定法包括免疫印迹、ELISA(酶联免疫吸附分析)，RIA(放射免疫分析)，竟争性EIA(竟争性酶免疫分析)，DAS-ELISA(双重抗体夹心ELISA),免疫细胞化学或免疫组织化学的技术，根据生物芯片或包括特异性抗体的蛋白质微矩阵应用的技术，根据胶质金沉淀以例如试纸的形式的分析，或通过亲合色i普法技术、配基结合分析或凝集素结合分析。在另一个具体实施方式中，癌症检查方法包括与一种膀胱癌生物标记特异性结合的分子与尿样接触并对这种结合定量。在另一个具体实施方式中，蛋白质的检测和量化包括第一步，其中样品蛋白质提取物依靠蛋白质或蛋白质的一个或更多表位与一种或多种特异性抗体相接触，和第二步，定量抗体和蛋白质形成的复合体。在另一个具体实施方式中，用于检测蛋白质的特异性抗体是人源的，人源化的或非人源的，和选自单克隆或多克隆抗体，抗体的整个或重组片段、组合抗体和Fab或scFv抗体片#爻。另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列，其衍生自选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GS詣、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列，其衍生自选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自癌症生物标记的一种或多种肽序列的使用，并且将尿检样品所得的这些生物标记的测量结果与正常尿的相对应的标准值相比，其中的变化指示BTCC。在另一个具体实施方式中，至少使用了二种尿中的生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，至少使用了三种尿中的生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，至少使用了四种尿中的生物标记或其转录或翻译后的变异。在另一个具体实施方式中，至少使用了五种尿中的生物标记或其转录或翻译后的变异。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1和STIP1或其转录或翻i奪后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自选自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2、PRDX2、AMY、APOAl、GSN40、GSN80和RETBP或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自选自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、FRIL、GSHB、GSTP1、IDCH、MASP2和PRDX2或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自选自TTHY、AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其转录或翻译后的变异的生物标记，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自AP0A1和RETBP或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自AMY、AP0A1和GSN40或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自AMY,AP0A1和ENOA或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及书t生自AP0A1、GSN40和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自CATDK、GSN80和IDHC或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及书亍生自AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自AMY、AP0A1、GSN40和IDHC或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自CATDH、ENOA、GSTP1和PRDX2或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及书f生自CATDK、EN0A、PRDX2和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一具体实施方式涉及衍生自组Y、CATDK、EN0A、IDHC和PRDX2或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一具体实施方式涉及书t生自AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自CATDH、ENOA、GSTP1、MASP2、PRDX2和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及衍生自AMY、AP0A1、CATDK、ENOA、IDHC、PRDX2和TTHY或其转录或翻译后的变异的肽序列的使用，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自的生物标记选自AMY、AP0A1、GSN40和GSN80或其转录或翻译后的变异，和一种或多种肽序列，其衍生自的生物标记选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1和RETBP或一个其在转录或翻译后的变异，其中生物标记在尿中存在。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自的生物标记选自AMY、AP0A1、GSN4Q和GSN8G或其转录或翻译后的变异，和一种或多种肽序列，其衍生自的生物标记选自TTHY、ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA、BLVRB、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、ENOA、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTPl、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PRDX2、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO和WDR1或其转录或翻译后的变异，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自的生物标i己选自CATDH、CATDK、ENOA、GSHB、GSTP1、IDHC、PRDX2和TTHY或一个其在转录或翻译后的变异，和一种或多种肽序列，其衍生自的生物标记选自ACY1、AKR1A1、ALDOB、ANXA4、BIEA1、BLVRB、C03、CPGL1、FRIL、GDIB、GPX3、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、PTD012、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或一个其在转录或翻译后的变异，其中生物标记存在于尿中。发明的另一个具体实施方式涉及一种或多种肽序列的使用，其衍生自的生物标记选自TTHY、CATDH、CATDK、ENOA、GSTP1、IDHC、MASP2、PRDX2、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP或一个其在转录或翻译后的变异，其中生物标记存在于尿中。另一个具体实施方式涉及实施前面定义的方法的一种试剂盒，包括1)特异性识别一种或多种这些蛋白的抗体组合2)—种适合包装的载体，用于检测BTCC存在，确定该癌症的阶段或严重程度，评估外科切除术后疾病缺乏，建立该癌症诊断和预后和/或监测对患有所述癌症个体的治疗效果的试剂盒。试剂盒可从包括装入至少一种结合尿样中所存在的一种生物标记的试剂的一个容器；和至少一种检测BTCC状态的至少一个试剂的说明书。该试剂盒可包括一个载体、包装或容器，其用以分区接受一个或多个容器例如小瓶，管，等等，每一个容器含有该方法中单独使用的元素。例如，容器可包含被标记和进一步被检测的探针。探针可分别对膀胱癌蛋白质或膀胱癌基因有特异性的抗体或多聚核苷酸。或者，试剂盒可能包括一根质谱分析(MS)探针。试剂盒也可能包括包含使目标核酸序列扩增或沉默的核苷酸的容器，和/或容器包含记录含意，例如生物素结合蛋白质，即，抗生物素蛋白或链霉亲和素，结合着一个可检测的标记，即，一种酶，萤光或放射性同位素标记的区域。试剂盒可能包括全部或部份的膀胱癌生物标记的氨基酸顺序，或编码这样的氨基酸顺序的一个核酸分子。发明的试剂盒典型地将包括上述容器和包括一种或多种满足商业和用户立场的材料的其他容器，包括緩沖液、稀释剂、过滤器、针、注射器和带使用说明书的包装内容物。此外，容器上提供的标签表明组合物用于一种具体治疗或非治疗的应用，也可表明如上所述的那些使用的指导。指导和或其他信息也可能被包括在试剂盒的内容物中。另一个具体实施方式涉及实施前面定义的方法的一种包括生物芯片的试剂备jnL。另一个具体实施方式涉及实施前面定义的方法的一种包括生物芯片的试剂盒，其中生物芯片包含检测选自40种膀胱癌生物标记或其转录或翻译后的变异的一种或多种生物标记的抗体。有许多免疫学分析可用于试样检测和/或定量特异性抗原-抗体复合体的形成；前面已描述了众多的竟争性或非竟争性的蛋白质结合分析，并且这些中很多是买得到的。因此，定量蛋白质的抗体可以是，例如单克隆抗体、多克隆抗体，其完整或重组的片断，对蛋白质有特异性的组合抗体和抗体的Fab或scFv片段。这些抗体可以是人源的，人源化的或动物源的。另一方面，它们是被标记的或未被标记的，并可用于许多种的分析。可被用于标记抗体的标记分子包括放射性核素、酶、荧光团、化学发光试剂、酶基体或辅助因子、酶抑制剂、微粒、染料和衍生物。抗体结合特异性越高，能检测出抗原的含量越低。那些本领域普通技术人员所知的许多种分析可用于本发明，使用未被标记的抗体(主要抗体)和被标记的抗体(次要抗体)；这些技术包括，但是不限于免疫印迹或免疫转移，ELISA(酶联免疫吸附分析)，RIA(^:射免疫测定)，竟争EIA(竟争性酶免疫测定法)，DAS-ELISA(双重抗体-夹心ELISA),免疫细胞化学和免疫组织化学技术，才艮据生物芯片或包括特异性抗体的蛋白质微矩阵应用的技术，或胶体沉淀的形式例如试纸。其他检测和/或定量蛋白质的方式包括亲合色镨技术、配合基结合分析或凝集素结合分析。发明在这方面优选的具体实施方式是蛋白质微矩阵和双重抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。在这些免疫测定法中能^f吏用任何特异性针对发明的40种蛋白质的一种或多种表位的抗体，或抗体的组合。例如该分析的许多可能的格式之一，识别发明的40种蛋白质的一种或多种表位的单克隆或多克隆的抗体，或该抗体的片段，或这些抗体的组合被附着在固相支持的表面并与样品放置相接触以进行分析，在特定时间孵育，在适当的条件下形成抗原-抗体复合物。用适当的条件清洗以去除非特异性的复合物后，一种指示试剂，存在于识别发明的40种蛋白质的一种或多种表位的单克隆或多克隆的抗体、或该抗体的片段、或这些抗体的组合中，与一个信号发生分子相连4妄，在适当的时间和温度条件下与抗原-抗体复合物孵育。样品中选自发明的40种蛋白质的一种或多种蛋白质的存在以对检测定量和产生测定信号。为了防止由于样品中总蛋白浓度的不同引起的信号变异，所有测量被标准化。如上所示，发明的方法包括通过特异性抗体定量尿样中的差异表达的可溶蛋白质来监测膀胱癌的阶^a。那些本领域普通技术人员会能使用所有特异性识别和定量这些蛋白质的手段来完成。在下面的描述中，公开了获得和分析人尿样(在此被称为样品)的总蛋白含量的常规方法。方法涉及样品处理，使用2D电泳法分离在样品内的蛋白质，通过图像分析和统计不同的样品的方式选择差异表达的蛋白质，以及使用一种或多种发明的差异表达的蛋白质以产生蛋白质特异性抗体作为膀胱癌标志。在从健康个体得到的样品(对照)和被诊断为BTCC(Ta、Tl-低度恶性，Tl高度恶性和T2)的患者之间为尝试识别在膀胱癌各阶段和在膀胱癌进展期中的差异表达蛋白质进行了比较蛋白质组分析。在所有显示差异表达的蛋白质中，40种蛋白质可再生地改变超过了二倍。使用质谱分析和数据库搜索，通过肽质量指紋图语识别了它们。图1:从尿样得到二维电泳(2D)凝胶并显示四个不同的研究区域A、K、R和S(图1A),区域A(图lg),区域K(图1C),区域R(图1D)和区域S(图1E)。图2:二维电泳法(2D)凝胶的区域R中对应BIEA的斑点R211,得自一个健康个体尿样(图2A)，患癌症的在Ta阶段患者的(图2B)，患癌症的在Tl低度恶性阶段患者的(T1-LG，图2C),患癌症的在T1高度恶性阶^R患者的(Tl-HG,图2D)和患癌症的在T2阶段患者的(图2E)。图3:在样品CV、Ta、T1低度恶性(T1-LG),Tl高度恶性(T1-HG)和T2中斑点R211的强度。每个小组的样品数量如括号内所示。图4:不同尿样中斑点R211的强度检测的稳定性。这被表示为在被分析的每块凝胶中持续出现或缺少斑点R211的凝胶的百分比。每个小组的样品数量如括号内所示。具体实施例方式本发明将由以下例子进一步说明。这些例子仅是举例证明并不被解释为限制。I.差异表达蛋白质的识别识别随膀胱癌进展而差异表达的蛋白质，将健康尿的蛋白语与使用一种蛋白组方法的早期阶段和发展期的膀胱胂瘤患者的那些图语相比较。尿液样品(总计150个)收集自前往属于西班牙公共卫生网络医院的泌尿科的健康个体和有过渡膀胱癌的病人。这些样品被分类如下a)没有癌(63个样品)包括-对照(CV，32个样品)曾有膀胱癌，但已经切除了肺瘤的和已得到控制的患者(膀胱镜检察没有显示其他病变)。-有其他泌尿系统疾病的患者(31个样品，包括在其他前列腺良性增生，前列腺癌)。b)BTCC(87个样品)患者诊断按疾病在不同的发展阶段包括-Ta(21个样品)-Tl-低度恶性(29个样品)-Tl-高度恶性(19个样品)-T2(18个样品)BTCC組的样品所伴随的切片检查是它们在膀胱癌的发展阶段分类的关键。A.尿样处理和蛋白质分离。尿样冷冻于-80°C并被放在干冰中运到实验室，不需要打开冷冻系统。样品被保存在-80°C，直到它们被处理。样品非常不同，从淡黄色尿到有血块的红色尿，透明或含有悬浮组织。总体积变化也非常大，从5到100ml。样品的蛋白质浓度范围从20|ig/mL到2mg/mL(150jag/mL是平均浓度)。要得到蛋白质浓度，样品在水上被解冻并在4°C下2000xg离心5min。上清液用来确定蛋白质浓度。沉淀100|ig蛋白质的必要体积是根据蛋白质与15%w/v三氯乙酸(TCA)沉淀的效率为75°/。计算出的。其余尿样再冷冻于-80°C并被保存用于进一步的2D电泳法(若需要)。在水上混合TCA和尿1个小时，然后在4°C下16000xg离心20min以获得被沉淀的蛋白质小球。该小球用丙酮洗涤，在-20°C保存并且蒸发溶剂至干。要进行二维(2D)电泳法实验，第一个维度是IEF(等电子聚焦)，蛋白质按它们的电荷(pl)分离；第二个维度是SDS-PAGE,蛋白质按它们的分子量分离。要进行第一个维度，蛋白质干小球与450再水合化緩冲液(尿素7M，硫脲2M,CHAPS2%,IPG緩沖液2。/。，溴苯酚蓝0.002%)在室温下重新悬浮1小时。使用IPG緩冲液(Amersham，ref#17-600-88)，以使IEF的pH在3-10的范围。对IEF,Amersham的Ettan，IPGphor等电聚焦系统使用了下述制造商的说明。IEF在被固定的pH梯度下进行，称为IPG条带，购买自Amersham(ref#17-6002-45)。在30V下凝胶再J^合活化16小时后，已溶解的蛋白质聚焦于第一个维度的条带中。然后电压增加到8000V,强度不高于50iuA每块凝胶。当电压到达90000V小时,IEF完成。对于第二个维度，在实验室中使用Amersham的EttanDALT12凝胶槽聚合出26x20cm12.5%的丙烯酰胺。在EttanDALT12大型垂直系统中跑凝胶，并按照制造商的说明书进行直到电泳前端离开凝胶。按照制造商的说明使用Amersham(17-1150-01)的染料试剂盒，用硝酸银洗染凝胶。然后为了对蛋白质斑点(图1A)进行随后的图像分析，凝胶被干燥并保存。有些尿样跑了超过l块的2D-凝胶。B.对凝胶上蛋白质斑点的分析扫描每块凝胶以获得用于图像分析的斑点图。使用来自非线性动力学(UK)的ProgenesisPG220软件以300dpi(每英寸点数)格式和8bits/channel分析图像文件。为了增加分辨率，分析在凝胶的不连续区域进行。每个区域，称为A(图1B)，K(图1C),R(图1D)和S(图1E),选择最佳的凝胶并将其扫描用于图像分析。ProgenesisPG220软件将平面图像的信息转换成3D图像，每个斑点的强度与个体尿中对应蛋白质的相对量有关。每块凝胶中每个斑点的强度得自软件表。这些原始数据是随后统计分析的依据。对每个单独的斑点进4亍统计分析并比较二个不同组中它的强度(例如，CV和Ta),必须证实这些数据是正态分布的。比较属于二个组的斑点，要使用学生的t检验并得到p值这是评价一个亚组对另一个亚组斑点的理论误差。仅选择p值".05的斑点。这些斑点的倍数变化和平均率按下述任一种方法计算1)样品的总斑点量，即理论总蛋白质浓度，或2)连续表达的蛋白质在每个样品中恒定的量，或3)同样样品中二次差异表达的蛋白质。n值或样品数量也被计算。比较对照病人的尿样与来自已经被诊断为过渡膀胱癌的病人的尿样，40种蛋白质在它们的倍数变化上显示了统计学上的显著性和稳定性。通过MALDI-TOF(介质辅助激光脱附/飞行离子化时间)光谱法识别这些斑点。那些2D电泳法显示有统计学上显著性斑点的尿样，被再次送入2D电泳并斑点被从凝胶中切下。蛋白被消化并被MALDI-T0F光谱法分析。肽质量指紋图镨能识别40种蛋白质，即^吏别TTHY、ACY1、AKR1A1、ALD0B、ANXA4、BIEA、BLVRB1、CATDH、CATDK、C03、CPGL1、EN0A、FRIL、GDIB、GPX3、GSHB、GSTP1、IDHC、LMAN2、LY6G6E、MASP2、NADC、NAPSA、PA2G4、PARK7、PCBP1、PDC61、PPAL、P腿2、PT廳2、QPCT、SBP1、STIP1、TALDO、WDR1、AMY、AP0A1、GSN40、GSN80和RETBP(见表1)。因此，这40种蛋白质，已#皮_〖正明在BTCC病人诊断中是差异表达的，被作为对疾病的诊断、预后、监控和治疗有重要价值的生物标记而识别。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>细胞质非特异性二肽酶蛋白标、志序列ID号位点号GI联M白OMIM蛋白名称EN0A13R383R058R0544503571P06733172430(X-烯醇化酵14A519A524A53031873302FRIL15S444182516P02792134790铁蛋白轻链GDIB16A499廳l6598323P50395600767RabGDP分离抑制剂PGPX317S777404108P22352138321血浆谷胱甘肽过氧化物酵GSHB18K72308248826P48637601002谷胱甘肽合成酶GSTP119S34620664359P09211134660谷胱甘肽好u转移酶匿C20R11949168486075874147700细胞质异柠檬酸脱氮酶服N221K1187K7280K72925803023Q12907无完整囊泡膜蛋白VIP36前体LY6G6E22K735955961604Q5SRS9无'淋巴细l包^元原6复合体MASP223S77550513646000187605102甘露糖-结合凝集素丝氨酸蛋白胞腸C24K116614603130Q15274606248尼克酰胺乙酰乙酸水解酵<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>举例，图2显示了二维电泳法(2D)凝胶的区域R中对应BIEA的斑点R211,得自一个健康个体尿样(图2A),患癌症的在Ta阶段患者的(图2B),患癌症在Tl低级阶段患者的(Tl-LG,图2C),患癌症在Tl高级阶段患者的(Tl-HG，图2D)和患癌症在T2阶段患者的(图2E)。能看到与健康尿样相比，斑点R211的强度在不同阶段的癌症患者的样品中明显减少。这些区别在ProgenesisPG220软件的统计分析后显示有显著性。图3显示了在样品CV、Ta、Tl低度恶性(Tl-LG)，Tl高度恶性(T1-HG)和T2中斑点R211的强度。每个小组的样品数量如括号内所示。图4显示了不同尿样中斑点R211的强度检测的稳定性。这被表示为在被分析的每块凝胶中持续出现或缺少斑点R211的凝胶的百分比。每个小组的样品数量如括号内所示。表2显示了癌症不同阶段的样品与一个非癌个体的样品相比较(CV)，斑点R211的p和倍数变化统计分析值。斑点R211的倍数变化用每块单独凝胶的总斑点容量(TSV)标准化。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>n.尿样中发现的蛋白质的抗体展开测试可用的多克隆和/或单克隆抗体(或商业购买或用下述免疫协议产生)的反应性和敏感性，通常用于绘制被监测蛋白的标准("剂量反应")曲线。a.免疫协议1.多克隆抗体用标准方法学可提高多克隆抗血清以对抗特定蛋白质，例如那些数不清的已公开了的可利用的本领域通常使用的技术。在本实施例中，雄性新西兰白兔用蛋白质制剂免疫，首先用Freund完全辅剂(Gibco,GrandIsland,纽约)，然后三个月中每月用不完全的辅剂蛋白质。兔子血清和小鼠血清在融合前被用作多克隆抗血清并由标准免疫印迹技术证明是易与蛋白质制剂反应的。2.重组蛋白质的生产凝胶中找到的蛋白数量太低不足以引起免疫，因此使用pET28b(+)克隆载体在E.coli内表达。得到的前述粗提物(BoronatA.,etal.,J.Bacteriol.1981,147:181-85)在SDS-PAGE凝胶上跑胶。重组蛋白质被从凝胶中切下并释放于丙烯酰胺中。为了生产对应重组蛋白质的抗体，释放的蛋白质直接被用于上述免疫的兔子。B.免疫印迹实验在上样到6%聚丙烯酰胺凝胶前，蛋白质样品(总蛋白质20jug)与补充了5%(3-巯基乙醇的SDS-PAGE凝胶上样緩冲液混合并在100°C孵育5min。电泳后，蛋白质被转移到硝化纤维素膜上。跑了复制凝胶并显示斑点。一张膜证明了抗体对应着发明所选择的40种蛋白质中的一种或多种(圣克鲁斯生物科技公司，圣克鲁斯，加州，美国)。当第二张膜证明了抗体对应着作为蛋白质上样对照的肌动蛋白(Amersham,LittleChalfont,英国)。最终，膜和与过氧化物酶(Amersham)共轭的次要抗体杂交，并使用ECL系统(Amersham)与高性能化学感光胶片(HyperfilmECL,Amersham)才全测化学发光信号。III.用免疫印迹实验检验尿检样品几种生物标记用于盲法一企测40个尿样包括a)没有癌的(12个样品)b)BTCC包括Ta(8个样品)，Tl-低度恶性(6个样品)，Tl高度恶性(6个样品)和T2(8个样品)。得到的敏感度、特异性和准确性的值如表3所示。使用这些公式计算敏感度、特异性和准确性的值(真阴性+真阳性)准确性=-^-样品数量真阳性~(真阳性+fi阴性)真阴性特射生=_^_(真阴性4i阳性)例如，生物标记AMY显示为敏感性89%,85%的准确性的值及其特异性为75%。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>通过由这些实验得到的数据进行二项式逻辑回归，可获得通常增加诊断方法的敏感性和特异性的生物标记的不同组合，如表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>权利要求1、一种非侵入性的体外方法，包括a)检测和定量存在于来自个体的一个尿检样品中的一种或多种生物标记；和b)比较a)中的尿检样品得到的表达测量值与正常尿的对应标准值，其中在a)得到的测量值与正常尿的对应标准值相比的变化指示了膀胱移行细胞癌。2、根据权利要求l的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量选自下组的一种或多种生物标记，该组为TTHY(SEQID1)，ACYl(SEQID2),AKR1A1(SEQID3)，ALDOB(SEQID4),ANXA4(SEQID5)，BIEA(SEQID6)，BLVRB(SEQID7)，CATDH(SEQID8)，CATDK(SEQID9),C03(SEQID10,SEQID11)，CPGL1(SEQID12),ENOA(SEQID13,SEQID14),FRIL(SEQID15),GDIB(SEQID16)，GPX3(SEQID17)，GSHB(SEQID18)，GSTPl(SEQID19),IDHC(SEQID20),LMAN2(SEQID21)，LY6G6E(SEQID22)，MASP2(SEQID23)，NADC(SEQID24),NAPSA(SEQID25),PA2G4(SEQID26),PARK7(SEQID27)，PCBPl(SEQID28),PDC6I(SEQID29),PPAL(SEQID30),PRDX2(SEQID31)，PTD012(SEQID32),QPCT(SEQID33)，SBPl(SEQID34),STIPl(SEQID35)，TALDO(SEQID36)，WDR1(SEQID37)，AMY(SEQID38，SEQID39，SEQID40),AP0A1(SEQID41),GSN40(SEQID42),GS腦(SEQID43)和RETBP(SEQID44)或其转录或翻译后变异。3、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量一种或多种生物标记选自TTHY,ACYl,AKR1A1,ALDOB,ANXA4,BIEA，BLVRB,CATDH，CATDK，C03，CPGL1，ENOA，FRIL,GDIB,GPX3，GSHB，GSTPl,IDHC,LMAN2，LY6G6E，MASP2，NADC,NAPSA,PA2G4,PARU，PCBPl，PDC6I,PPAL,PRDX2，PTD012,QPCT，SBP1，STIP1,TALD0和麵l或其转录或翻译后变异。4、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量一种或多种生物标记选自TTHY，AMY,AP0A1，GSN40和GSN80或其转录或翻译后变异。5、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括，险测和定量一种或多种生物标记选自AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其转录或翻译后变异，和一种或多种生物标记选自TTHY，ACY1，AKR1Al，ALDOB,ANXA4，BIEA,BLVRB，CATDH，CATDK，C03,CPGL1,EN0A1FRIL,GDIB，GPX3,GSHB,GSTP1，IDHC，LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC，NAPSA，PA2G4，PARK7,PCBP1，PDC6I,PPAL1PRDX2，PT歸2，QPCT,SBP1，STIP1,TALDO和WDR1或其转录或翻译后变异。6、冲艮据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括;险测和定量一种或多种生物标记选自CATDH,CATDK，ENOA,GSHB，GSTP1，IDHC,PRDX2和TTHY或其转录或翻译后变异，和一种或多种生物标记选自ACY1，AKR1A1,ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB，C03，CPGL1,FRIL,GDIB,GPX3,LMAN2,LY6G6E,MASP2,腸C,NAPSA，PA2G4,PARK7，PCBP1,PDC6I,PPAL，PT顧2，QPCT,SBP1:STIP1，TALDO,WDR1,AMY,AP0A1,GSN40，GSN80和RETBP或其转录或翻译后变异。7、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量一种或多种生物标记选自TTHY,CATDH，CATDK，ENOA,GSTP1，I匿,MASP2，PRDX2，AMY,AP0A1，GSN40，GSN80和RETBP或其转录或翻译后变异。8、根据权利要求2-7中任一项的非侵入性的体外方法，其中包括;险测和定量至少2种选自权利要求2中定义的生物标记。9、根据权利要求2-7中任一项的非侵入性的体外方法，其中包括检测和定量至少3种选自权利要求2中定义的生物标记。10、根据权利要求2-7中任一项的非侵入性的体外方法，其中包括;险测和定量至少4种选自权利要求2中定义的生物标记。11、根据权利要求2-7中任一项的非侵入性的体外方法，其中包括检测和定量至少5种选自权利要求2中定义的生物标记。12、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量生物标记AP0A1，GSN40和TTHY或其转录或翻译后各自的变异。13、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量生物标记AP0A1,GSN40,GSN80和TTHY或其转录或翻译后各自的变异。14、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括;险测和定量生物标记AMY，AP0A1，GSN40，GSN80和TTHY或其转录或翻译后各自的变异。15、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量生物标记CATDH，EN0A,GSTP1，MASP2，PRDX2和TTHY或其转录或翻译后各自的变异。16、根据权利要求2的非侵入性的体外方法，其中步骤a)包括检测和定量生物标记AMY，AP0A1,CATDK，EN0A，IDHC，PRDX2和TTHY或其转录或翻译后各自的变异。17、根据权利要求1-16中任一项的非侵入性的体外方法，其用于检测膀胱移行细胞癌的存在，用来确定该癌症的阶段或严重程度，评估外科切除术后疾病缺乏，建立该癌症诊断和预后和/或监测对患有所述癌症的个体的治疗效果。18、根据权利要求1-17中任一项的非侵入性的体外方法，其中被分析的尿样得自从前从未被诊断为膀胱移行细胞癌的个体。19、根据权利要求1-17中任一项的非侵入性的体外方法，其中被分析的尿样得自从前已经被诊断为膀胱移行细胞癌的个体。20、根据权利要求1-17中任一项的非侵入性的体外方法，其中被分析的尿样得自目前正在接受治疗对抗膀胱移行细胞癌的个体。21、根据权利要求1-20中任一项的非侵入性的体外方法，其特征在于，蛋白质的检测和量化包括笫一步，其中样品蛋白质提取物依靠权利要求2的蛋白质或蛋白质的一个或更多表位与一种或多种特异性抗体相接触，和第二步，定量所生成的抗体和蛋白质形成的复合体。22、根据权利要求21的非侵入性的体外方法，其特征在于，所述抗体是人源的，人源化的或非人源的和选自单克隆或多克隆抗体，抗体的整个或重组片段、组合抗体和Fab或scFv抗体片段。23、根据权利要求21或22的非侵入性的体外方法，其特征在于，在对所生成的抗体-蛋白质复合物的检测和定量中，所用的技术选自下组免疫印迹、ELISA(酶联免疫吸附分析)，RIA(放射免疫分析)，竟争性EIA(竟争性酶免疫分析)，DAS-ELISA(双重抗体夹心ELISA)，免疫细胞化学或免疫组织化学的技术，根据生物芯片或包括特异性抗体的蛋白质微矩阵所使用的技术，根据月^:金沉淀以例如试纸的形式的分析；或通过亲合色语法技术、配基结合分析或凝集素结合分析。24、根据权利要求1-23中任一项的非侵入性的体外方法，其中该方法用于监测药学上或外科学上的功效。25、根据权利要求1-24中任一项的非侵入性的体外方法，其中该方法在膀胱移行细胞癌的评估中来自同一病人不同时间获得的不同尿样的蛋白质中的同一种或同一些蛋白质相比较用于检测疾病的进程。26、衍生自尿液中存在的生物标记的一种或多种肽序列通过尿液分析以检测膀胱移行细胞癌的存在，4企测该癌症的阶段或严重程度，评估外科切除术后疾病缺乏，建立该癌症诊断和预后和/或监测对患有所述癌症的个体的治疗效果的体外用途。27、根据权利要求26的衍生自选自TTHY(SEQID1),ACY1(SEQID2),AKR1A1(SEQID3)，ALD0B(SEQID4),ANXA4(SEQID5)，BIEA(SEQID6)，BLVRB(SEQID7)，CATDH(SEQID8),CATDK(SEQID9)，C03(SEQID10，SEQID11),CPGL1(SEQID12)，ENOA(SEQID13，SEQID14),FRIL(SEQID15)，GDIB(SEQID16),GPX3(SEQID17)，GSHB(SEQID18),GSTP1(SEQID19)，IDHC(SEQID20)，LMAN2(SEQID21),LY6G6E(SEQID22)，MASP2(SEQID23)，NADC(SEQID24),NAPSA(SEQID25),PA2G4(SEQID26),PARK7(SEQID27)，PCBP1(SEQID28)，PDC6I(SEQID29)，PPAL(SEQID30),PRDX2(SEQID31)，PTD012(SEQID32),QPCT(SEQID33),SBP1(SEQID34)，STIP1(SEQID35),TALDO(SEQID36)，WDR1(SEQID37)，AMY(SEQID38,SEQID39，SEQID40),AP0A1(SEQID41)，GSN40(SEQID42)，GSN80(SEQID43)和RETBP(SEQID44)或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列的用途。28、根据权利要求27的衍生自选自TTHY，ACY1,AKR1A1,ALD0B，ANXA4，BIEA，BLVRB,CATDH,CATDK,C03，CPGL1,ENOA，FRIL，GDIB,GPX3，GSHB，GSTP1,I匿，LMAN2,LY6G6E,MASP2,腸C,NAPSA，PA2G4，PARK7，PCBP1，PDC6I,PPAL，PRDX2，PTD012,QPCT,SBP1,STIP1,TALDO和WD或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列的用途。29、根据权利要求27的衍生自选自TTHY，AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列的用途。30、根据权利要求27的衍生自选自AMY,APOAl，GSN40和GSN80或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列，和衍生自选自TTHY，ACY1,AKR1A1，ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB,CATDH，CATDK，C03,CPGL1，ENOA,FRIL，GDIB，GPX3,GSHB，GSTP1，IDHC，LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC,NAPSA，PA2G4,PARK7，PCBP1,PDC61，PPAL，PRDX2,PTD012，QPCT，SBP1，STIP1,TALDO和WDR1或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列的用途。31、根据权利要求27的衍生自选自CATDH,CATDK，ENOA，GSHB,GSTP1，IDHC,PRDX2和TTHY或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列，和右t生自选自ACY1,AKR1A1，ALDOB，ANXA4，BIEA，BLVRB，C03，CPGL1，FRIL，GDIB,GPX3,LMAN2,LY6G6E,MASP2，NADC,NAPSA,PA2G4，PARK7,PCBP1，PDC6IPPAL,PTD012,QPCT，SBP1，STIP1，TALDO，WDR1，AMY,AP0A1，GSN40，GSN80和RETBP或其转录或翻译后变异的生物标记的一种或多种狀序列的用途。32、根据权利要求27的衍生自选自TTHY,CATDH,CATDK,ENOA，GSTP1，IDHC，MASP2，PRDX2，AMY,APOAl,GSN40,GSN80和RETBP或其举争录或翻译后变异的生物标记的一种或多种肽序列的用途。33、根据权利要求27-32中任一项的用途，其中尿检样品中这些生物标记物的测定值与正常尿中的相对标准值相比的变化指示了膀胱移行细胞癌。34、根据权利要求27-32中任一项的至少2种肽序列的用途。35、根据权利要求27-32中任一项的至少3种肽序列的用途。36、根据权利要求27-32中任一项的至少4种肽序列的用途。37、根据权利要求27-32中任一项的至少5种肽序列的用途。38、根据权利要求27的衍生自AP0A1，GSN40和TTHY或其转录或翻译后各自的变异的肽序列的用途。39、才艮据权利要求27的书亍生自AP0A1，GSN40,GSN80和TTHY或其转录或翻译后各自的变异的肽序列的用途。40、根据权利要求27的衍生自AMY,AP0A1，GSN40,GSN80和TTHY或其转录或翻译后各自的变异的肽序列的用途。41、根据权利要求27的衍生自CATDH，EN0A，GSTP1，MASP2，PRDX2和TTHY或其转录或翻译后各自的变异的肽序列的用途。42、根据权利要求27的衍生自AMY,AP0A1，CATDK，EN0A，IDHC，PRDX2和TTHY或其转录或翻译后各自的变异的肽序列的用途。43、衍生自选自权利要求2中所定义的一系列蛋白质中的一种或多种的一种或多种核苷或肽序列，单独的或联合的，在筛选鉴定，发展和/或提高治疗膀胱移行细胞癌的治疗药物的疗效方法中的用途。44、一种实施如权利要求1-25中任一项定义的方法的试剂盒，包括1)至少一种特异性识别权利要求2的蛋白质的抗体和2)—种适于包装的载体。45、一种根据权利要求44的用于检测膀胱移行细胞癌的存在的试剂盒，用来确定该癌症的阶段或严重程度，评估外科切除术后疾病缺乏，建立该癌症诊断和预后和/或监测对患有所述癌症的个体的治疗效果。46、一种根据权利要求44或45的试剂盒，包括一个生物芯片。47、一种根据权利要求46的试剂盒，其中生物芯片包括选自用于检测权利要求2定义的系列中的蛋白质的抗体。全文摘要本发明涉及一种通过尿分析检测个体的膀胱移行细胞癌的非侵入性体外方法，用于确定个体中这种癌症的阶段或严重程度或监测对患有这种癌症的个体给药的治疗效果。文档编号G01N33/68GK101300491SQ200680041276公开日2008年11月5日申请日期2006年10月10日优先权日2005年10月11日发明者伊玛·瑞蒙斯·偌瑞古兹,克帕·埃斯克如瑞德·伽瑞克亚·卡得埃诺,劳瑞诺·斯蒙·布埃玛,安娜·斯乐阿格·维乐克,安特尼诺·玛瑞提兹·玛瑞提兹,路易斯·何塞·凯斯崔乐·迪兹申请人:雷波瑞特瑞尔斯萨瓦特股份公司