专利名称：：一种尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法
技术领域：
：本发明涉及高效液相色谱分析法，具体的说，涉及用高效液相色谱分析法分析酰胺类产品及其杂质的含量。(二)
背景技术：
尿素学名为碳酰二胺，它作为基础肥料被广泛地施用于农业生产，同时又作为三聚氰胺及精细化工的原料；在尿素生产过程中，由于造粒的需要增强物料黏度常常加入工业甲醛，反应生成亚甲基二脲，同时在高温时生成縮二脲；尿素含亚曱基二脲超标，对三聚氰胺的生产危害极大对精细化工的生产造成品质降低尿素含缩二脲超标将对作物种子和幼苗产生毒害。尿素国家标准(GB2440-2001)中规定亚甲基二脲的分析方法是采用萘二磺酸二钠盐光度法测定(GB/T2441.9—2001);縮二脲的分析方法是采用铜复盐分光光度法测定(GB/T2441.2—2001)。分光光度法分析亚甲基二脲和縮二脲费时、费力，对检验人员要求高，运行费用髙并且效率低。对于利用高效液相色谱法分析尿素产品中的亚甲基二脲和缩二脲的分析方法，还没有相关标准发布和文章报道。(三)
发明内容本发明的0的是提供一种能快速、准确测定尿素及其杂质含量的高效液相色谱法。本发明的技术方案如下一种尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于采用反相高效液相色谱内标法，高效液相色谱操作条件为色谱柱250mraX4,6mm(id)不锈钢柱，Kromasil-5pm-U填料；流动相组成体积比甲醇水=10:90~3:97，推荐体积比为3:97;流速0.30ml/min0.40ml/min,推荐流速为0.35ml/min;检测波长205nm215nm，推荐波长为210nm;内标物三聚氰胺或酰胺的三元以下聚合物或縮合物，推荐内标物为三聚氰胺。高效液相色谱操作的柱温及进样体积采用常规参数，推荐柱温为室温，进样体积为f华l。推荐所述的流动相采用脱盐水，并经煮沸，以去除02和C02等溶解气体；所述的流动相在使用前用0.45pm滤膜过滤以去除不溶性盐或有机质(悬浮物)，并用超声波脱气。本发明釆用高效液相色谱仪分析酰胺类产品及其亚曱基二脲和縮二脲含量杂质的方法具有灵敏度高、检出限低、精密度好、速度快、效率高等优点，要求操作人员学会溶(注)样品就可以准确分析，适用于工厂在线控制分析和大批量样品分析，随着该方法的进一步完善，将引起国家尿素分析标准修改，那将对检验机构仲裁分析具有深远意义；同时也将引起对GB/T9567-1997《工业三聚氰胺》标准的修改。图1是亚甲基二脲的标准曲线图。图2是尿素的标准曲线图。图3是縮二脲的标准曲线图。图4是第一组样品的测试结果谱图。图5是第二组样品的测试结果谱图。图6是第三组样品的测试结果谱图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步描述。实施例一实验仪器LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD-10ATVP紫外可见检测器(日本岛津)；杭州普惠科技有限公司Sepu3000P色谱工作站；超声波脱气器(上海超声有限公司)；过滤器滤膜孔径0.45jim。色谱条件-色谱柱250ramX4.6mm(id)不锈钢柱，内装Kro腿sil-5萍-U填料；流动相组成体积比甲醇水=3:97，其中水是脱盐水，并经煮沸，甲醇为分析纯，流动相在使用前用0.45拜滤膜过滤并用超声波脱气30min;流速(！35Ml/min;柱温室温；检测波长210nm;进样体积6fil;内标物三聚氰胺。药品缩二脲样含量》99.5%,国家化肥检验中心(上海)标准样；三聚餐l胺含量》99.8%,山东华鲁恒升化工股份有限公司生产；尿素样含量》99,0%,天津分析纯试剂；亚甲基二脲含量0.09%，山东华鲁恒升化工股份有限公司加醛工艺生产的尿素。色谱条件的选择1.流动相的选择经筛选，在甲醇-水比例为3:97(体积比)的条件下，各成分能达到基线分离。2.检测波长调节紫外可见检测器的波长在210nm。测定歩骤0.iOOOg/L三聚氰胺溶液配制称取0.l()OOg工业级三聚氰胺溶于约300ml甲醇水(3+97)溶液中，移至1000ml容量瓶中稀释至刻度。(1),.UK〕.0()g/L尿素溶液的配制称取OOg分析纯尿素(天津)溶于约300ml甲醇水(3+97)溶液中，移至1000ml.容量瓶中稀释至刻度。(2).2.0000g/L縮二脲溶液的配制:称取2,()OOOg縮二脲(国家化肥检验中心样品)溶于约300ml甲醇水(3+97)溶液中，移至1000ml容量瓶中稀释至刻度。(3).(〕.！900g/L亚甲基二脲溶液的配制称取KX).OOg含亚甲基二脲的尿素(山东华鲁恒升化工股份有限公司生产样品)溶于约3()0mi甲醇水(3+97)溶液中，移至1000ml容量瓶中稀释至刻度。3.标准系列的配制.尿素标准系列的配制-分別取O,25ml、0.5ml、0.75ml、l,OOml、的尿素储备液(100.OOg/L)于100m]容量瓶中，各加20ml三聚氰胺储备液(0.誦g/L)用甲醇水(3+97)溶液稀释至刻度，相当于尿素含量为0.99X25%、0.99X50%、0.99X75%、0.99X薩i。(2).缩二脲标准系列的配制分别取2..5m]_、5,Oml、7,5ml、10.0ml的縮二脲储备液(2.OOOOg/L)于100ml容量瓶中，各加20ml三聚氰胺储备液(0.lOOOg/L)用甲醇水(3+97)溶液稀释至刻度，相当于縮二脲含量为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%。(:3).亚甲基二脲标准系列的配制分别称取含亚甲基二脲0.09%的工业尿素1.OOg、2.OOg、3.OOg，另分别加不含亚甲基二脲的天津分析纯尿素试剂2.OOg、1.OOg、0.OOg溶于100ml容量:瓶中;再分别加20ml三聚氰胺储备液(0.lOOOg/L)用甲醇水(3+97)溶液稀释至刻度，相当于亚甲基二脲含量为O.09%、0.18%、0.27%。4.线性关系(!)—亚甲基二脲线性关系-应用含不同浓度的亚甲基二脲试样，检测得到亚甲基二脲的曲线方程为C/O-O,.1(〕75.44+4,34738XA/A,，线性曲线的相关系数为0.99996，(2)..尿素线性关系配,小同浓度的尿素试样，检测得到尿素的曲线方程为C/O-16.0704+190.34XA/A:，线性曲线的相关系数为0.99940。(3)。縮二脲线性关系选择含不同浓度的缩二脲试样，检测得到尿素的曲线方程为C./Ci:-O,.(懇2丄2丄丄7.53823X'A/Ai,线性曲线的相关系数为0.99977。每次从配制好的标准系列试液中移取6^1样品液，注入液相色谱中，通过S印u3000P工作站进行信号检测和数据处理，进行三组测试，得到下述图4、图5、图6所示的曲线和表1、表2、表3所示的数据，将曲线存入方法文件中用于样品测试。表i(对应于图4)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3(对应于图6)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>vv<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>6.方法精密度试验(见表4)表4<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>7.回收率试验(1).缩二脲回收率(见表5)表5<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(2).亚甲基二脲回收率(见表6)表6:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(3).尿素回收率(见表7)表7<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实施例二色谱条件流动相组成体积比甲醇水=10:90;流速0.30Ml/min;柱温室温；检测波长215nm;进样体积5^1;内标物三聚氰胺。其余实施方式均与实施例一相同。(1).亚甲基二脲线性关系应用含不同浓度的亚甲基二脲试样，检测得到亚甲基二脲的曲线方程为C/C,二-0.107551+4.34741XA/Ai。(2).尿素线性关系配制不同浓度的尿素试样，检测得到尿素的曲线方程为C/C,:-16.0711+190.29XA/Ait>(3).縮二脲线性关系选择含不同浓度的縮二脲试样，检测得到尿素的曲线方程为C/Ci=-0.00752131+7.53833XA/A'。每次从配制好的标准系列试液中移取6^1样品液，注入液相色谱中，'通过S印u3000P工作站进行信号检测和数据处理，进行三组测试，得到表8、表9、表10所示的数据，将曲线存入方法文件中用于样品测试。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表9<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(3).尿素回收率(见表14)表14<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例三色谱条件流动相组成体积比甲醇水=4:96;流速0J8Ml/min;柱温室温；检测波长205nm;进样体积:7pl;内标物甲酰胺。其余实施方式均与实施例一相同。(1).亚甲基二脲线性关系应用含不同浓度的亚甲基二脲试样，检测得到亚甲基二脲的曲线方程为C/Ci=-0.107541+4.34744XA/A,4。(2).尿素线性关系配制不同浓度的尿素试样，检测得到尿素的曲线方程为C/Cf-16.0711+190.32XA/Ai。(3).縮二脲线性关系选择含不同浓度的縮二脲试样，检测得到尿素的曲线方程为C/C,二-0.00752128+7.53817XA/A(。每次从配制好的标准系列试液中移取6^1样品液，注入液相色谱中，通过S印u3000P工作站进行信号检测和数据处理，进行三组测试，得到表15、表16、表17所示的数据，将曲线存入方法文件中用于样品测试。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表16<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表17<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>4未知10.91212123320.257440.15849BB0方法精密度试验(见表18)表〗8项目第一组测试第二组测试第三组测试标准偏差尿素-0,400.20-O.700.29縮二脲-0.070.33-O.270.15亚甲基二脲0.0000.0010.0040.005回收率试验(1).縮二脲回收率(见表19)表19重复性试验结果标样为0.80%结果偏差回收率％第一组测试0.796-0.0799.5第二组测试0.8040.33100.5第三组测试0.792-0.2799.0平均值0.7970.2299.7(2).亚甲基二脲回收率(见表20)表20重复性试验结果标准值检测值/误差口收率％第一组测试0.2700.270/0.00100.0第二组测试0.1800.181/0.001100.6第三组测试0.0900.094/0.004102.4(3).尿素回收率(见表21)重复性试验结果标样为99.0%结果偏差第一组测试99.0-0.40100.0第二组测试99.20.20皿2第三组测试100.1-0.70101.0平均值99.40.43100.4表21实施例四色谱条件流动相组成体积比甲醇水=6:94;流速0.40Ml/min;柱温室温；检测波长213nm;进样体积8^1;内标物縮二脲。其余实施方式均与实施例一相同。(1).亚甲基二脲线性关系应用含不同浓度的亚甲基二脲试样，检测得到亚甲基二脲的曲线方程为C/C^-0.107540+4.34735XA/Ai。(2).尿素线性关系配制不同浓度的尿素试样，检测得到尿素的曲线方程为C/C,二—16.0709+190.33XA/Ai。(3).縮二脲线性关系选择含不同浓度的縮二脲试样，检测得到尿素的曲线方程为C/Ci=-0.00752118+7.53822XA/A!。每次从配制好的标准系列试液中移取6|ll样品液，注入液相色谱中，通过S印u3000P工作站进行信号检测和数据处理，进行三组测试，得到表22、表23、表24所示的数据，将曲线存入方法文件中用于样品测试。表22<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表23<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>方法精密度试验(见表25)表25<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>回收率试验(1).縮二脲回收率(见表26)表26<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>(2).亚甲基二脲回收率(见表27)表27<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>(3).尿素回收率(见表28)表28<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>实施例五色谱条件流动相组成体积比甲醇水=8:92;流速0.32Ml/min;柱温室温；检测波长207nm;进样体积6^1;内标物縮三脲。其余实施方式均与实施例一相同。(1).亚甲基二脲线性关系应用含不同浓度的亚甲基二脲试样，检测得到亚甲基二脲的曲线方程为C/O-0.107552+4.34741XA/A,。(2).尿素线性关系配制不同浓度的尿素试样，检测得到尿素的曲线方程为C/Cf16.0709+190.51XA/Ai。(3).縮二脲线性关系选择含不同浓度的縮二脲试样，检测得到尿素的曲线方程为C/Ci=-0.00752132+7.53831XA/Aic每次从配制好的标准系列试液中移取6pl样品液，注入液相色谱中，通过S印u3000P工作站进行信号检测和数据处理，进行三组测试，得到表29、表30、表31所示的数据，将曲线存入方法文件中用于样品测试。表29<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表30<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表31<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>方法精密度试验(见表32)表32<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表34重复性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>(3).尿素回收率(见表35)表35<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>内标物还可选用酰胺的三元以下聚合物。通过实验研究认为该方法的精密度和回收率超过GB2440-2001检验方法要求，操作方法简便自动化程度高，是该类产品检验的一次意义重大的革新。权利要求1.一种尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于采用反相高效液相色谱内标法，高效液相色谱操作条件为色谱柱250腿X4.6mm(id)不锈钢柱，内装Kromasil-5|am-U填料；流动相组成体积比甲醇水=10:903:97;流速0.30ml/min~0.40ml/min;检测波长205nm215nm;内标物三聚氰胺或酰胺的三元以下聚合物或縮合物。2.如权利要求1所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于高效液相色谱操作的柱温为常温，进样体积为6(al。3.如权利要求1或2所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述的流动相所采用的水是脱盐水，并经煮沸。4.如权利要求1或2所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述的流动相在使用前用0.45pm滤膜过滤并用超声波脱气。5.如权利要求3所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于所述的流动相在使用前用0.45(im滤膜过滤并用超声波脱气。6.如权利要求1或2所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于流动相组成体积比甲醇水=3:97;流速0.35ml/min;检测波长210nm;内标物三聚氰胺。7.如权利要求3所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于流动相组成体积比甲醇水=3:97;流速0.35ml/min;检测波长210nm;内标物三聚氰胺。8.如权利要求4所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于流动相组成体积比甲醇水=3:97;流速0.35ml/min;检测波长210nm;内标物三聚氰胺。9.如权利要求5所述的尿素及其杂质的高效液相色谱分析方法，其特征在于流动相组成体积比甲醇水=3:97;流速0.35ml/min;检测波长210nm;内标物三聚氰胺。全文摘要试样使用温“甲醇+水(3+97)”溶解，以甲醇+水(3+97)为流动相，使用Kromasil-5μm-C<sub>18</sub>为填料的不锈钢柱和紫外检测器(210mm)，对试样中的尿素、亚甲基二脲和缩二脲进行反相液相色谱分离，使用三聚氰胺作内标物进行内标法定量。该方法的精密度和回收率超过GB2440-2001检验方法要求，操作方法简便自动化程度高，是该类产品检验的一次意义重大的革新。文档编号G01N30/00GK101122589SQ20071007063公开日2008年2月13日申请日期2007年9月5日优先权日2007年9月5日发明者刘忠发,徐海伟申请人:刘忠发;徐海伟