专利名称：：一种芙朴感冒颗粒的制备方法及制得的产品的制作方法
技术领域：
：本发明涉及的是一种治疗风热或风热挟湿感冒的中成药的新制备方法及制得的产品，尤其是指一种以芙蓉叶、厚朴、陈皮、牛蒡子为原料，采用"水提冷却"等新工艺制成的颗粒剂，属于中药制药
技术领域：
。技术背景中药芙蓉叶为锦葵科植物木芙蓉HibiscusmutabilisL.或重瓣木芙蓉HibiscusmutabilisL.cv.Plenus的干燥叶，厚朴为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮，陈皮为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，牛蒡子为菊科植物牛蒡ArctiunilapL.的干燥成熟果实。由上述四味配伍组成的芙朴感冒颗粒，具有清热解毒、宣肺利咽、宽中理气之功能，主治中医辨证属风热或风热夹湿感冒引起的发热头痛、咽痛、肢体酸痛、鼻塞、胃纳减退等症。芙朴感冒冲剂为我公司80年代研发的新药，源于名老中医吴士元多年临床验方，由于当时条件所限，其制备工艺落后(采用敞口常压浓缩、湿法制粒、热循环烘箱干燥，其工序复杂、生产周期长、有效成份损耗大，且质控指标低，无鉴别和含测项目)。自批准生产至今，其处方和制法均未被公开。在芙朴感冒冲剂的基础上，1993年研发了芙朴感冒胶囊(至今独家生产)，现收于中成药部颁标准(标准编号WSfB-2896-98)，由于其为全浸膏制剂，易吸潮，保质期短(常温贮藏3个月即吸潮变性)，且在浓缩时敞口常压，仍采用湿法制粒干燥，将浸膏浓縮至1.351.40(能耗大)，浸膏烘干温度高、干燥时间长，使厚朴酚等有效成份破坏较多，影响其临床疗效。由于存在上述不足，多年来无市场销售。并且，申请人本人也于2003年7月22日申请了申请号为03141807.4有关芙朴感冒药物的专利，但由于该专利中记载的芙朴感冒药物的制备仍然采用了药品标准中记载的同样的方法，因此，其与药品标准一样存在许多不足。为了克服上述缺点，我们对芙朴感冒药物的制备方法进行了进一步研究，提出了一种制备芙朴感冒颗粒的新方法，改进了现有技术中芙朴感冒冲剂、芙朴感冒胶囊以及03141807.4公开的芙朴感冒药物的不足，不仅延长了保质期，而且成形温度低、干燥时间短、有效成份损失少、生产效率高。
发明内容本申请请求于2007年3月21日申请的申请号为200710087211.3发明名称为"一种芙朴感冒颗粒的制备方法及制得的产品"的发明专利申请为优先权文件，本申请的技术方案是在优先权文件的基础上进一歩研究获得的具有更好效果的技术方案。本发明目的在于提供一种用中药材芙蓉叶、厚朴、陈皮、牛蒡子为原料，针对原芙朴感冒颗粒的制备技术进行了研究和创新，使产品质量、临床疗效及生产效率得到明显提高的技术方案。本发明通过以下方案予以实施。本发明一方面提出一种芙朴感冒颗粒的新制备方法，包括下列步骤(1)取原料芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、牛蒡子(炒)250g;(2)取陈皮，提取挥发油，挥发油及煎煮液备用，陈皮药渣加水煎煮，滤过，滤液备用；(3)取芙蓉叶加水煎煮二次，第一次加按重量计48倍量的水煎煮2小时，第二次加按重量计36倍量的水煎煮1小时，滤过，滤液备用；(4)合并步骤(2)和步骤(3)的滤液，减压浓缩，冷却静置，取上清液滤过，滤液备用；(5)取牛蒡子、厚朴，加按重量计37倍量的水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.101.15，加12倍量的乙醇搅匀，静置1236小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；(6)合并步骤(4)的上清液和步骤(5)回收乙醇后的药液，减压浓縮至相对密度为1.10L30，滤过，滤液备用；(7)取步骤(6)制备的浓縮液与适量糖粉制成颗粒，喷入陈皮油闷润，即得。其中，步骤(1)中，厚朴为姜汁炙厚朴。其中，步骤(2)中，所述提取陈皮挥发油时蒸汽压力控制在0.050.IOMP，加按重量计24倍量的水，提取35小时；提油后的药渣加按水与干陈皮重量比36倍量的水煎煮1小时。其中，步骤(3)所述的芙蓉叶加水煎煮二次，第一次加按重量计48倍量的水煎煮2小时(加水量优选为6倍量)，第二次加按重量计36倍量的水煎煮l小时(加水量优选为5倍量)。其中，步骤(4)所述的减压浓縮，浓縮后其浓缩液相对密度为L051.20;所述的冷却，温度为215'C;所述的静置，其时间为2496小时。其中，步骤(5)中牛蒡子、厚朴，加按重量计37倍量的水煎煮3次(优选为5倍量)，每次1小时，浓縮后其浓縮液相对密度为1.101.15;乙醇用量为12倍量(体积比)，优选为1.5倍；静置时间为1236小时，优选为24小时。其中，步骤(6)中浓縮液相对密度为1.101.30，优选为1.131.16;所述的糖粉为蔗糖或赤砂糖；所述的闷润，其时间为48小时。其中，步骤(7)中所述的制成颗粒方法为(l)喷雾干燥制粒，其中喷雾干燥时物料温度5060。C、喷雾压力1.53.5bar、粘合剂流量69Hz;或者(2)湿法制粒，取浸膏加糖粉混匀，用制粒机制成颗粒，于5080'C烘干。本发明另一方面涉及一种按照上述制备方法制得的芙朴感冒颗粒。本发明还提供了一种上述芙朴感冒颗粒的质控方法，包括(1)陈皮薄层鉴别取本品30g，加热水40ml使溶解，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，用水10ml洗涤，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.3g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以lXNaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(10:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nra)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。其特征在于提取液用乙醚，薄层板用1^NaOH溶液制备的硅胶G。(2)牛蒡子薄层鉴别取本品30g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置已处理好的中性氧化铝柱(10(T200目，5g，内径1015mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每lml含3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液3W、对照品溶液6W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15:4:1)的下层溶液为展开剂，饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105i:加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。其特征在于点样后的薄层板需置层析缸中饱和30分钟后展开。(3)牛蒡苷含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02%磷酸溶液(25:75)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备取牛蒡苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成每lml含0.25mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHz)30分钟，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各iow，注入液相色谱仪，测定，即得。本品10g颗粒含牛蒡子以牛蒡苷(C27H:i40u)计，不得少于30.0mg。其特征在于流动相为乙腈-0.02%磷酸溶液(25:75)。本发明的芙朴感冒颗粒制备新方法，改进了原水提醇提的传统精制方法，不仅有效成份损失少，而且生产效率高。由于原药品标准中的芙朴感冒胶囊和03141807.4中使用的制备方法相同，因此总称之为原工艺，使之与本发明的新工艺形成对照，在下文中进行论述。芙朴感冒药物为我公司80年代研发的新药，源于名老中医吴士元多年临床验方，主药芙蓉叶采用传统的水提醇沉工艺制备浸膏，其工序复杂(醇沉静置、回收乙醇)、生产成本高(乙醇用量大)、有效成份损耗较多。芙朴感冒颗粒新工艺，芙蓉叶、陈皮采用水提冷却分离杂质，改进了原水提醇沉的不足，工序简单(只需冷却分离)、生产成本低(无需乙醇)、有效成份损失少(较醇沉工艺提高10%以上)，而且生产区无需防爆，制粒赋形剂改用赤砂糖利于增强疗效。原工艺以上四味，取陈皮提取挥发油，备用；残渣与芙蓉叶等三味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤液浓縮至每ml药液含2g生药，加2倍量乙醇搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，加入糖粉适量，喷雾制粒，喷入陈皮油，即得。新工艺取陈皮提取挥发油，备用；陈皮残渣加水煎煮l小时，滤过，滤液备用；取芙蓉叶加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，滤液备用,-合并上述滤液，浓縮至相对密度1.051.20，冷却，静置，取上清液，备用；取牛蒡子和厚朴，加水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度l.101.15，加1.5倍量的乙醇搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用。合并陈皮、芙蓉叶上清液及牛蒡子、厚朴滤液，浓縮至相对密度1.131.16，过滤，取滤液，加入糖粉适量，制粒，喷入陈皮油，混匀，制成1000g，即得。经工艺及药效学比较研究，采用新工艺制备的颗粒剂均优于原工艺，具体创新表现如下1、用水提冷却法分离杂质替代原水提醇沉法水提醇沉是一种传统的分离精制工艺，耗醇量大、有效成份损失较多、工艺复杂、生产成本高。近年来，中药澄清精制出现了许多新技术，冷却澄清技术为其中较为理想的一种，该技术工艺简单、无需在防爆区操作(安全性高)、成本低、能较好地保存有效成份。2、厚朴姜汁炙厚朴粗皮中基本不含厚朴酚与和厚朴酚，故刮去粗皮；刮去粗皮的厚朴用姜汁炙，可增强宽中和胃功效，减轻对喉舌的刺激，每100g厚朴用生姜10kg。3、陈皮提取工艺改进原工艺陈皮提取挥发油后，残渣加水煎煮二次，第一次2小时，第二次l小时。经研究，提取挥发油后的药渣加水煎煮1小时，浸膏提取得率已大于90%。4、优选的厚朴和牛蒡子的提取方法厚朴和牛蒡子主要含木脂素类成份，木脂素类成份水溶性较差，因此，在原工艺的基础上，增加了煎煮次数，利于有效成份溶出。5、选用赤砂糖作为颗粒剂的赋形剂选用赤砂糖作为颗粒剂的赋形剂，对感冒病症治疗有协同作用。6、以赤砂糖为辅料对喷雾干燥制粒参数的影响研究蔗糖、乳糖等为辅料对喷雾干燥制粒参数的影响研究多见，赤砂糖的相关研究未见报道。经研究，采用如下参数合理喷雾干燥时物料温度506(TC，喷雾压力1.53.5bar,粘合剂流量69Hz。7、增加了鉴别和含测项目原药品标准的质量标准中只有性状和胶囊剂的常规检查，不利于控制产品质量；本发明增加了陈皮和牛蒡子薄层鉴别，增加了牛蒡苷的HPLC含测项。为了验证本发明制得的颗粒剂具有质量稳定、疗效显著、工艺合理，申请人进行了一系列试验研究，具体如下1.芙朴感冒颗粒浸膏密度与冷却效果的关系研究采用芙朴感冒颗粒新工艺，将水提液浓缩成不同相对密度的清膏(2(TC测)，于46"冷却5天，每隔12小时观察不溶物与上清液的比例关系，见下表1.1。表l.l芙朴感冒颗粒浸膏密度与冷却效果的关系(表内数据为沉降百分率％)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果表明浸膏密度宜控制在1.10~1.30之间:1.13~1.16之间时，冷却分离效果最好。冷却分离效果较好；并且在2.芙朴感冒颗粒清膏冷却温度与冷却效果的关系分别取清膏1000ral，相对密度为1.142(20'C测)，分别置26。C、8~15°C、203(TC条件下观察冷却效果，结果见表2.1。表2.1芙朴感冒颗粒浸膏冷却温度与冷却效果关系(表内数据为沉降百分率％)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果表明冷却温度215'C效果较好，且在此温度下，微生物不易生长。3.水提醇沉与水提冷却对牛蒡苷转移率比较研究方法取浸膏于6(TC以下干燥，分别测牛蒡苷含量，计算转移率。结果水提冷却牛蒡苷转移率较高，详见表3.1。表3.1水提醇沉与水提冷却对牛蒡苷转移率的比较类别药材含量取样量干沉淀物重牛蒡苷转移率水提醇沉6.01%10.214g4.174g67.27%水提冷却6.01%12.452g3.482g78.83%4.冷却时间与含微生物考察方法取清膏于215'C条件下冷却，于2天、4天、6天、8天分别测霉菌数和细菌数。表4.1冷却时间与含微生物考察<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果表明冷却6天内微生物限度符合要求。5.陈皮水提得率的研究方法取陈皮400g，提取挥发油4小时，残渣加水提取二次，第一次1小时，第二次1小时，分别出液、浓縮、测相对密度、计算得膏率。结果第一次出膏，色深密度高；第三次出膏只占3.71%、且不溶杂质多、色浅，可不提取。表5.1陈皮水提得率比较<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>6.牛蒡子提取工艺研究6.1煎煮加水量的优选取牛蒡子500g，加入不同重量倍数的水煎煮3次，每次1小时，过滤，取滤液测定牛蒡苷含量，计算水煎液中牛蒡苷的总量，见表6.1。表6.1加水量与牛蒡苷提取量的关系<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>试验结果表明选用5倍量较经济合理。6.2醇沉浓度的考察取牛蒡子，加5倍量水煎煮三次，每次1小时，合并滤液，浓縮至相对密度1.15,分别加乙醇使含醇量为55%、60°/。、65%、70%，静置24小时，取上清液，测定牛蒡苷的含量。表6.1乙醇浓度与牛蒡苷提取量的关系醇沉浓度55°%60%65%70%牛蒡苷提取量42.31mg/ml47,38mg/ml46.88mg/ml46,86mg/ml试验结果表明加入约1.5倍量乙醇(含醇量约60%)时，牛蒡苷的醇沉得率最高，因此，醇沉浓度定为加入1.5倍量乙醇。7.芙朴感冒颗粒剂新工艺与原工艺药效学研究比较7.1解热试验取SD大鼠100只，体重50-70g，雌雄各半。先测一次体温，第二日每隔3h测一次体温，连续测四次，以四次体温的平均值作为基础体温，剔除体温波动大于0.8。C的大鼠。按性别随机分为8组原工艺三个剂量组(10.33g生药七g—1、15.50g生药'kg—1、20.66g生药'kg");新工艺三个剂量组(10.33g生药.kg"、15.50g生药'kg"、20.66g生药'kg");阴性对照组(水)；阳性对照组(阿司匹林0.05g-kg—1)，每组12只。按相应剂量灌胃给药，给药体积为1.5mL400g"，每天一次，连续4天。第5天皮下注射15%鲜酵母生理盐水混悬液1mL'100g"致热，每2h测体温一次，连续2次。取体温升高超过1'C的大鼠灌胃给药，测定末次给药后1h，2h,3h，4h，6h的体温。结果显示，各组大鼠注射酵母后体温均明显升高，阴性对照组体温持续升高，各给药组大鼠在24h体温变化曲线的整体水平均低于阴性对照组。与阴性对照组比较，两种工艺各剂量组(10.33g生药.kg"、15.50g生药'kg"、20.66g生药'kg'1)的大鼠体温均有一定程度的下降，显著性差异主要出现在给药后24h，其中给药后2h、3h六个给药组均有效(尸<0.010.001)。相同生药剂量下，新工艺(10.33g生药'kg—1)在给药后2h、3h、6h的解热作用，与原工艺(10.33g生药'kg—1)相比有显著性差异(户<0.05)，表明新工艺(10.33g生药'kg")的解热作用优于原工艺。表7.1芙朴感冒颗粒原工艺与新工艺对酵母致热大鼠体温的影响(ti-l2)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注给药组与阴性对照组比较***尸<0.001*<0.01*尸<0.05新工艺组与原工艺组比较(同等生药剂量)》<0.057.2醋酸扭体法镇痛试验取1520g小鼠96只，雌雄各半。按性别随机分为8组原工艺三个剂量组(10.33g生药kg—、15.50g生药kg—'、20.66g生药kg—');新工艺三个剂量组(10.33g生药kg"、15.50g生药kg—'、20.66g生药kg—1);阴性对照组(水)；阳性对照组(阿司匹林0.3g.kg—。。按相应剂量灌胃给药，容积为0.2mL'10g—'，每天一次，连续5天。末次给药后2h，腹腔注射0.6%醋酸0.1mL10g—、观察30min内的扭体次数。结果显示，与阴性对照组相比，新工艺(20.66g生药.kg—0在30min内的小鼠扭体次数明显减少(尸<0.05)。从绝对数值上看，新工艺(20.66g生药kg—1)的镇痛作用优于原工艺(20.66g生药kg')。表7.2两种工艺芙朴对醋酸致痛小鼠扭体次数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注与阴性对照组比较*P<0.058.颗粒吸湿性的考察8.1芙朴感冒颗粒"原工艺"与"新工艺"颗粒吸湿性比较取芙朴感冒颗粒(新工艺)5g，取芙朴感冒颗粒(原工艺)5g，精密称定，置编号、重量已知的表面皿中，摊平。置湿度75±5%、温度25土2'C的恒温恒湿箱内，分别于lh、2h、4h、8h、12h、24h、48h精密称定颗粒重量，颗粒所增加重量与起始重量的比值，即为吸湿百分率，结果见表8.1。吸湿率-(吸湿后重一取样重)/取样重*100%表8.1芙朴感冒颗粒"原工艺"与"新工艺"颗粒吸湿性比较<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>※新工艺颗粒取样重5.007g，原工艺颗粒取样重5.062g结果表明新工艺颗粒较原工艺颗粒型略易吸湿，约8小时后达到水分吸放平衡。8.2不同湿度对芙朴感冒颗粒(新工艺)吸湿性的影响取批号为20061004的芙朴感冒颗粒约2g，精密称定，置编号、重量已知的表面皿中，摊平，放入一定湿度的恒温恒湿箱内(湿度分别为30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%)，每次放置两份样品，于25土2。C条件下放置2天。分别精密称定颗粒重量，颗粒所增加重量与起始重量的比值，即为各相对湿度下的吸湿百分率=(吸湿后重一取样重)/取样重*100%，结果见表8.2。表8.2不同湿度的吸湿性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>以平均吸湿百分率为纵坐标，相对湿度为横坐标作图，得到吸湿曲线，以吸湿曲线平缓变化部分与陡增部分的切线的交点，向x轴作垂线，所得垂足对应的相对湿度，即为样品的临界相对湿度。由图可知，临界相对湿度约为60%。9.颗粒流动性的考察研究休止角为考察颗粒流动性的主要参数，常用固定漏斗法测定。将上下两个锥形漏斗固定在水平玻璃板中心点上面，取约200g样品由第一个漏斗边上逐渐落入第二个漏斗边上，再落入下面的玻璃板上，在玻璃板上堆积成山形，测下山形高度和圆形半径，按tga=h/r，计算休止角a。结果表明平均休止角匀小于35度，颗粒流动性良好(见表9.1)。表9.1芙朴感冒颗粒(新工艺)休止角测定<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>10.对喷雾干燥的工艺参数研究喷雾压力有助于将流体状液滴细化成雾状小液滴，增大液滴的覆盖面积，不易结块。但喷雾压力过大，液滴粒径太小，大部分小液滴在未撞击到粉末粒子表面就已经变成干粉；喷雾压力过小，容易形成较大的液滴，颗粒成长过快，内部来不及干燥，水份偏高。物料流速与液滴的粒径成正比，流速增加，粒径增大。但流速过大会使得颗粒来不及干燥，易形成白心颗粒；而流速过小延长喷雾时间，且小液滴易被带向过滤室。流化床温度过高，液滴干燥过快，在下降的过程中由于自身的膨胀作用，密度减小，容易形成中空颗粒，大而不实；温度过低会造成颗粒结块、粘壁。所以选择喷雾压力、物料流速、流化床温度作为考察因素，选用U(3》正交表进行试验，对颗粒的一次行合格率进行考察(见表IO.1)表10.1因素水平表因素浸膏流速(Hz)物温rc)喷雾压力(bar)空白ABCD1(高)2(中)3(低)101569256070506040503.54.51.53.50.51.5注(1)颗粒的粒径要求在2040目之间，大于20目或小于40目的颗粒都被判为不合格；(2)水分《1.5%判为合格。正交试验表及结果由方差分析表可以看出，A、B、C三个因素对颗粒的一次性合格率影响程度不同，各因素的影响程度依次为B〉C〉A，其中，B对制粒的合格率有显著的影响。表10.2"(34)正交试验表因素ABCD—次性合格率《)1iiii^2122283.83133371.94212365.45223187.26231276.17313273.48321384.693321Kl(%)228.3211.4233.3236.1K2(%)228.7255.6225.5233.3K3(%)234.3224.3232.5221.9Kl76.1070.4777,7778.70K276.2385,2075.1777.77K378.1074.7777.5073.97R2.0014.732.64.73结果表明影响最大的因素是B,即物料温度。一次性合格率最高的是第5号试验，即最优组合是A2B2C3，而预计最优组合是A2B2C2，其中的差别在于对水平因素C项的选择不同，通过对A2B2C2组合进行试验，同AAC3进行对比，结果A2B2C:,组合优，故最优组合工艺条件为浸膏流速(69Hz)、物温(5060)、喷雾压力(1.53.5bar)。ll.质量标准的研究11.1陈皮薄层鉴别取本品30g，加热水40ml使溶解，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，用水10ml洗涤，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.3g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以r"NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(10:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。陈皮薄层鉴别方法常采用石油醚(6090°C)为提取溶剂，芙朴感冒颗粒新工艺制备的颗粒采用此方法乳化严重，薄层色谱显示对照药材及样品斑点较少，分离效果不佳。改为使用乙醚为提取溶剂，使用1^NaOH溶液配制的硅胶G薄层板，薄层色谱显示斑点分离明显改善，方法简便，缺味无干扰。11.2牛蒡子薄层鉴别取本品30g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置己处理好的中性氧化铝柱(10(T200目，5g，内径1(T15咖)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸千，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每lml含3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液3W、对照品溶液6W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15:4:1)的下层溶液为展开剂，饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105。C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。按上述方法，将点样后的薄层板置层析缸中饱和30分钟后展开，展开效果良好，斑点清晰，方法可行，缺味无千扰。11.3牛蒡苷含量测定方法11.3.l测定波长的选择牛蒡苷对照品溶液与芙朴感冒颗粒的醇提液在280mn处均有最大吸收，故本含量测定项选择280nm作为检测波长。有报道在270nm作为检测波长，但此吸收峰型较锐，在280nm测定的峰面积要比270nm高30%，故选择280nm为检测波长较为合理。11.3.2色谱条件色谱柱ShimpackVP-ODS(250mmX4.6mm);流动相乙腈-0.02%磷酸溶液(25:75);检测波长280nm，检测灵敏度1AFUS;柱温40°C，流速1.0ml/min，色谱柱的理论塔板数按牛蒡苷峰计算大于3000，分离度大于1.5。曾根据有关文献，多数以乙腈-水为流动相，我们考察了乙腈-水流动相体系，结果分离效果不理想，也分别试验了多种比例，实验结果表明以乙腈-水作为流动相，特征峰的保留时间在7.5min左右，分离度低于1.5，因此，将流动相改为乙腈-0.02%磷酸溶液(25:75)，特征峰保留时间在17min左右，分离度大于1.5。11.3.3提取条件的选择根据牛蒡苷的性质及常用提取方法，考察了用超声提取、回流提取方法，并对不同溶剂和提取时间进行了综合考察，结果表明以甲醇超声处理30分钟的提取方法为最佳。提取方法及溶剂的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>11.3.4线性关系考察精密称取经五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的牛蒡苷对照品适量，加甲醇配成每lml含牛蒡苷0.232mg对照品溶液。精密吸取对照品溶液l、2、4、6、8、1(^1，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以牛蒡苷吸收峰面积的积分值为纵坐标Y，进样量X(pg)为横坐标，绘制标准曲线。线性关系考察<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>线性回归方程Y=571491.1254x+2936,3877(R=l)，在0.232~2.32貼范围内呈良好的线性关系。11.3.5对照品溶液与供试品溶液的制备对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥器中减压干燥24小时的牛蒡苷对照品适量，用甲醇制成每lml含0.232mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定，超声处理30分钟，放置室温，再称定，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得。11.3.6精密度试验精密吸取供试品溶液lO)td，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，得到牛蒡苷峰面积，结果RSD=0.89%(n=6)。精密度试验<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>11.3.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液1(^1，每间隔一定时间测定一次，共测定6次结果表明供试品溶液在40小时内基本稳定，RSD=1.37%，n=6。稳定性试验(表中为不同时间的峰面积)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>11.3.8回收率试验精密称取已知含量的芙朴感冒颗粒适量，共6份，精密加入一定量的牛蒡苷对照品，按供试品溶液制备法制备，依法测定。芙朴感冒颗粒中牛蒡苷的回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>本测定方法的回收率为100.35%(n=6)，RSD为1.72%。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述各实施例仅用于说明本发明，但对本发明并没有限制。实施例1按处方称取芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、牛蒡子(炒)250g;取陈皮250g，加3倍量水，提取挥发油4小时，蒸汽压力控制在0.050.10MP，收集并分离挥发油，药渣加4倍量水煎煮1小时；取芙蓉叶900g加水煎煮2次，第一次2小时(加6倍量水)，第二次l小时(加4倍量水)；合并煎液，减压浓縮至相对密度为1.141.16，46'C冷却静置48小时，取上清液滤过备用；取厚朴150g、牛蒡子250g，加5倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.101.15，加1.5倍量(体积比)乙醇静置时间24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；合并陈皮、芙蓉叶上清液及牛蒡子、厚朴滤液，浓缩至相对密度为U3U6;浓縮液与赤砂糖细粉喷雾制粒，控制物料温度5060。C、喷雾压力1.53.5bar、粘合剂流量69Hz;喷入陈皮挥发油闷48小时，制成1000g，即得。实施例2按处方称取芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、牛蒡子(炒)250g;取陈皮250g，加2倍量水，提取挥发油3小时，蒸汽压力控制在0.050.10MP，收集并分离挥发油，药渣加3倍量水煎煮1小时；取芙蓉叶900g加水煎煮2次，第一次2小时(加4倍量水)，第二次l小时(加3倍量水)；合并煎液，减压浓縮至相对密度为1.05~1.14，24。C冷却静置24小时，取上清液滤过备用；取厚朴150g、牛蒡子250g，加3倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.101.15，加1.5倍量(体积比)乙醇静置时间24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；合并陈皮、芙蓉叶上清液及牛蒡子、厚朴滤液，浓缩至相对密度为1.13U6;浓缩液与蔗糖细粉喷雾制粒，控制物料温度5060。C、喷雾压力1.53.5bar、粘合剂流量69Hz;喷入陈皮挥发油闷48小时，制成1000g，即得。实施例3按处方称取芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、牛蒡子(炒)250g;取陈皮250g，加4倍量水，提取挥发油5小时，蒸汽压力控制在0.050.10MP，收集并分离挥发油，药渣加6倍量水煎煮1小时；取芙蓉叶900g加水煎煮2次，第一次2小时(加8倍量水)，第二次l小时(加6倍量水)；合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.161.120，615。C冷却静置96小时，取上清液滤过备用；取厚朴150g、牛蒡子250g，加7倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓縮至相对密度为1.101.15，加1.5倍量(体积比)乙醇静置时间24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；合并陈皮、芙蓉叶上清液及牛蒡子、厚朴滤液，浓縮至相对密度为L131.16;浓縮液与赤砂糖细粉混匀，用制粒机制粒，于508(TC烘干，喷入陈皮挥发油闷48小时，制成1000g，即得。实施例4按处方称取芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、炒牛蒡子250g;取陈皮250g，加4倍量水，提取挥发油4小时，蒸汽压力控制在0.050.10MP，收集并分离挥发油，药渣加3倍量水煎煮1小时；取芙蓉叶900g加水煎煮2次，第一次2小时(加8倍量水)，第二次l小时(加4倍量水)；合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.141.16(5(TC测)，46。C冷却静置48小时；取上清液滤过备用；取厚朴150g、牛蒡子250g，加5倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓縮至相对密度为1.101.15，加1.5倍量(体积比)乙醇静置时间24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；合并陈皮、芙蓉叶上清液及牛蒡子、厚朴滤液，浓縮至相对密度为1.131.16;浓縮液与蔗糖细粉混匀，用制粒机制粒，于5080。C烘干，喷入陈皮挥发油闷48小时，制成1000g，即得。权利要求1.一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括下列步骤(1)取原料芙蓉叶900g、厚朴150g、陈皮250g、牛蒡子(炒)250g；(2)取陈皮，提取挥发油，挥发油及煎煮液备用，陈皮药渣加水煎煮，滤过，滤液备用；(3)取芙蓉叶加水煎煮二次，第一次加按重量计4～8倍量的水煎煮2小时，第二次加按重量计3～6倍量的水煎煮1小时，滤过，滤液备用；(4)合并步骤(2)和步骤(3)的滤液，减压浓缩，冷却静置，取上清液滤过，滤液备用；(5)取牛蒡子、厚朴，加按重量计3～7倍量的水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，滤过，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15，加1～2倍量的乙醇搅匀，静置12～36小时，取上清液回收乙醇至无醇味，滤过，滤液备用；(6)合并步骤(4)的上清液和步骤(5)回收乙醇后的药液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.30，滤过，滤液备用；(7)取步骤(6)制备的浓缩液与适量糖粉制成颗粒，喷入陈皮油闷润，即得。2、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(1)中，厚朴为姜汁炙厚朴。3、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述提取陈皮挥发油时蒸汽压力控制在O.050.IOMP，加按重量计24倍量的水，提取35小时；提油后的药渣加按水与干陈皮重量比36倍量的水煎煮l小时。4、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(3)所述的芙蓉叶加水煎煮二次，第一次加按重量计48倍量的水煎煮2小时(加水量优选为6倍量)，第二次加按重量计36倍量的水煎煮1小时(加水量优选为5倍量)。5、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(4)所述的减压浓縮，浓縮后其浓縮液相对密度为L051.20;所述的冷却，其温度为215。C;所述的静置，其时间为2496小时。6、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(5)中牛蒡子、厚朴，加按重量计37倍量的水煎煮3次(优选为5倍量)，每次1小时，减压浓缩后其浓缩液相对密度为1.101.15;乙醇用量为12倍量(体积比)，优选为1.5倍量；静置时间为1236小时，优选为24小时。7、根据权利要求l所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(6)中浓缩液相对密度为1.101.30，优选为1.131.16;所述的糖粉为蔗糖或赤砂糖；所述的闷润，其时间为48小时。8、根据权利要求1所述的一种芙朴感冒颗粒的制备方法，其特征在于步骤(7)中所述的制成颗粒方法为①喷雾干燥制粒，其中喷雾千燥时物料温度506(TC、喷雾压力1.53.5bar、粘合剂流量69Hz;或者②湿法制粒，取浸膏加糖粉混匀，用制粒机制成颗粒，于508(TC烘干。9、权利要求1-8任一项制备方法制得的芙朴感冒颗粒。10、根据权利要求9所述的芙朴感冒颗粒的质控方法，其特征在于其质控方法包括下列内容.-(1)陈皮薄层鉴别取本品30g,加热水40ml使溶解，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，用水10ml洗涤，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.3g，加乙醚10ral，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以1^NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以10:2的甲苯-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。其特征在于提取液用乙醚，薄层板用1XNaOH溶液制备的硅胶G。(2)牛蒡子薄层鉴别取本品30g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置已处理好的中性氧化铝柱(100200目，5g，内径l(Tl5mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡苷对照品，加甲醇制成每lml含3rag的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液3W、对照品溶液6W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:4:1的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；其特征在于点样后的薄层板需置层析缸中饱和30分钟后展开。(3)牛蒡苷含量测定方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以25:75的乙腈-0.02%磷酸溶液为流动相；检测波长为280nm，理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备取牛蒡苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成每lml含0.25mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，以功率300W,频率50KHz超声处理30分钟，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10^1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品10g颗粒含牛蒡子以牛蒡苷(C27H34Ou)计，不得少于30.0mg;其特征在于流动相为25:75的乙腈-0.02%磷酸溶液。全文摘要本发明公开了一种芙朴感冒颗粒的新制备方法及其制得的产品，它是以芙蓉叶、厚朴、陈皮、牛蒡子(炒)为原料，取陈皮提取挥发油，药渣加水煎煮1小时；芙蓉叶加水煎煮二次，第一次2小时，每二次1小时；合并煎液，减压浓缩，冷却，取上清液备用；厚朴、牛蒡子加水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，减压浓缩，醇沉，取上清液回收乙醇；合并上述上清液和回收乙醇后药液，减压浓缩，浓缩液与适量糖粉制成颗粒。本发明的芙朴感冒颗粒改进了原制备方法，产品质量稳定、有效成份保留率高、疗效显著、生产效率高，未见不良反应，其制备工艺成熟合理可行。文档编号G01N30/00GK101269143SQ20071013893公开日2008年9月24日申请日期2007年7月20日优先权日2007年3月21日发明者樊雪君,王天亮,王永华申请人:浙江天一堂集团有限公司