专利名称：快速尿液hiv检测诊断试纸条及其制备方法和使用方法
技术领域：
本发明涉及一种快速尿液HIV检测诊断试纸条及其制备方法和 使用方法。
背景技术：
艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种免疫缺陷性疾 病，对人类的健康和生命具有极大的危害。近十几年来，艾滋病在我 国迅速蔓延。截止今年12月为止，我国相关部门掌控的艾滋病人数 已达30万人，但是由于个人隐私问题以及其它社会原因，我国HIV 感染者的人数可能高达100万。由于目前还没有有效的预防性疫苗和 治疗方法，早期诊断是预防艾滋病传播的最佳方案。
对艾滋病可疑人群和艾滋病病人的普查和跟踪，通常的检测方法 是在指定的医院检验科和疾病检验机构进行血液检查。由于世俗传统 和社会压力，这些人群都不愿去指定的部门去抽血检测。另一方面， 由于经济条件的限制，国家还没有能力利用现行的检测方法对可疑群 体实施大规模的普查和筛选，其结果是使得一大批艾滋病毒携带者和 艾滋病病人都对自身患病情况一无所知，或是有意避躲检查隐瞒病 情。这是社会的一个极大隐患。
因此，开发非血样的快速、简便的HIV诊断检测方法、技术和 产品是艾滋病预防控制工作的重要组成部分，对建立和谐社会，稳定 社会安定，保障人民健康具有重要的意义。
2007年8月，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 参比实验室组织了全国HIV抗体诊断试剂的临床质量评估，对国内 外生产的14种HIV抗体^r测试剂进行了4全测。其中的1种4全测试剂 是基于明胶凝集原理(PA)，其余的13种检测试剂是免疫层析原理。
5但是所检测的样品全部为血清样品。这说明到目前为止，国内尚无尿
样HIV快速检测试剂盒。因此，开发快速尿液HIV检测诊断试纸条
将具有巨大的市场竟争优势以及较高的市场占有率。
发明内容
本发明需要解决的技术问题就在于克服现有艾滋病需要进行血 液检查的缺陷，提供一种快速尿液HIV检测诊断试纸条及其制备方 法和使用方法，它通过4企测可疑人员的尿液，在5-15分钟内即可准 确地判定出HIV病毒的抗体状态。本发明的检测准确度高、4企测方 法简单、采样方便、性价比高。本发明不仅可适用于各级疾病控制中 心和各级检疫检验部门的实验室和各级医院的临床检验科室，而且还 可以适用于高危人群以及大规模普查和现场的快速检测，以及家庭范 围内的个人检验，填补了国内空白，为艾滋病的预防控制提供了强有 力技术支持和产品保证。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案
本发明一种快速尿液HIV检测诊断试纸条，所述试纸条包括最 底部的基垫，所述基垫上固定有侧流层析垫，所述侧流层析垫上设置 有检测线和质控线，所述4企测线在质控线的上游；所述侧流层析塾的 上游端连接着经HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体硒复合物 处理过的结合垫，所述结合垫的上游端连接样品垫，所述侧流层析垫 的下游端连接吸水垫；所述样品垫端为试纸条检测端。
所述侧流层析垫为硝酸纤维素膜。
所述检测线上包被有HIV抗原；所述质控线上包被有抗HIV单
克隆抗体。
本发明同时公开了一种所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的 制备方法，所述制备方法包括下列步骤
l)各部件板的制备包括基垫的制备、侧流层析垫的制备、金 标结合垫的制备、样品垫的制备和吸水垫的制备；
2 )将各部件板组装成快速尿液HIV检测诊断试纸条。
6所述侧流层析垫由硝酸纤维素膜构成，在硝酸纤维素膜上分别设 置有检测线和质控线，检测线位于质控线的上游，所述检测线是将含
有HIV抗原的溶液喷点或划线在侧流层析膜上干燥后形成；所述质 控线是将含有抗HIV单克隆抗体的溶液喷点在或划线在侧流层析膜 上干燥后形成。
所述结合垫由经过HIV抗原-胶体金复合物处理过的玻璃纤维素 膜构成，所述fflV抗原-胶体金复合物的制备方法为
取100 ml浓度为0.01%的氯金酸溶液，加热至沸腾，迅速加入 浓度为1%的柠檬酸三钠，继续搅拌煮沸15min,至溶液变为葡萄酒 红色，自然降温至4。C后，得胶体金溶液，放置备用；
用K2C03将制备好的胶体金溶液的pH值调节至6.7,加入HIV 抗原，将HIV抗原的浓度调节到6|ig/ml,磁力搅拌15分钟后加入 BSA, BSA浓度达到1.0%后冷却；
将HIV抗原和胶体金溶液的混合溶液低速离心，弃沉淀，取上清 高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV抗原-胶体金 复合物；
将初步纯化的HIV抗原-胶体金复合物用由含有0.2%( w/v )PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% (w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照100pl/cm2 用量加到玻璃纤维膜上，37°C干燥4小时，使得胶体金颗粒均匀 地附着在玻璃纤维素膜上；制成HIV抗原-胶体金复合物的金标结合 氛
或者，所述结合垫由经过HIV抗原-胶体硒复合物处理过的玻璃 纤维素膜构成，所述HIV抗原-胶体硒复合物的制备方法为
按Se:Na2S03的重量比为1:4的比例，将硒粉溶解在96°C - 98°C 的Na2S03水溶液中制备Na2SeS03溶液，实验中所用0.2M Na2SeS03储存溶液中含有0.6MNa2SO3;
将1.25ml 0.2M Na2SeS03溶液和0.1ml浓盐酸在快速搅拌条件 下连续加入48.7ml 10%凝胶水溶液中制备50ml 5><10-3mol的硒
7溶液；
将所得硒溶液冷却到5-TC形成凝胶，之后将凝胶切割成碎块 放入双蒸水中5-7°C温度下放置4-5天，将无机物除去；得胶体硒 溶液，放置备用；
用K2C03将制备好的胶体石西溶液的pH值调节至6.7，加入HIV 抗原，将HIV抗原的浓度调节到6昭/ml，》兹力搅拌15分钟后加入 BSA， BSA浓度达到1.0%后冷却；
将HIV抗原和胶体硒溶液的混合溶液低速离心，弃沉淀，取上清 高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV抗原-胶体竭 复合物；
将初步纯化的HIV抗原-胶体竭复合物用含有0.2% (w/v) PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% (w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照100pl/cm2 用量加到玻璃纤维膜上，37°C干燥4小时，使得胶体硒颗粒均匀 地附着在玻璃纤维素膜上；制成HIV抗原-胶体硒复合物的硒标结合塾。
所述HIV抗原是HIV-1型抗原或HIV-2型抗原；所述HIV抗体 是HIV-1型抗体或HIV-2型抗体。
所述胶体金颗粒是实心的、或空心的、或具有核-壳结构的。
所述样品垫由经过释;^液处理过的玻璃纤维素膜构成，所述处理 步骤包括(1)将玻璃纤维素膜浸泡在释放液中后取出，或将释放液 喷涂在玻璃纤维素膜上；(2)将玻璃纤维素膜上的释^:液干燥。
所述释放液为含有0.5% (v/v ) Tween -20和0.1% ( w/v ) PEG 的去离子水。
所述吸水垫是由经过干燥处理的玻璃纤维素膜构成。 本发明还公开了所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的使用方 法，将所述试纸条的检测端浸入尿液或尿液稀释液中，或将试纸条水 平放置，用吸液管将100微升尿液或尿液稀释液加入到样品垫，静 置5-15分钟后，观察检测线和质控线是否显色；若检测线和质控线同时显色，表明被检尿液中含有HIV抗体；若4企测线不显色而质控 线显色，表明被检尿液中没有HIV抗体；若冲企测线和质控线同时不 显色，表明该次检测无效；若检测线显色而质控线不显色，表明该次
才企测无效。
本发明所述快速尿液HIV ^r测it断试纸条的基本工作原理为 本发明在结合垫上固定HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-月交体硒 复合物，在硝酸纤维素膜上的下游的检测区内，同时分别包被HIV 抗原作为检测线，包被抗HIV单克隆抗体作为质控线。当尿液样品 加至结合垫上的样品孔后，样品中的HIV抗体先与结合垫上的HIV 抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体硒复合物反应形成抗体-HIV抗 原-胶体金复合物或抗体-HIV抗原-胶体硒复合物。由于层析作用，该 复合物就会沿硝酸纤维素膜发生层析移动，到达检测线时与包被其上 的HIV抗原形成双抗原夹心免疫复合物，显色出现肉眼可见的红色 条带；未与HIV抗体结合的游离胶体金或胶体硒标记的HIV抗原则 继续移动，在质控线与抗HIV单克隆抗体结合，出现另一条红色条 带作为质控标准。出现两条红色带则表示样品中有抗HIV抗体存在， 判为阳性。若为阴性样品，则检测线不出现红色条带，仅在质控线形 成一条红线。
本发明试纸条无需冷藏、检测步骤简捷、无需任何仪器设备，检 测结果一目了然，特别适合于大规模筛查使用。
本发明快速尿液HIV检测诊断试纸条，填补了国内空白，为艾 滋病的预防控制提供了强有力技术支持和产品保证。
本发明的主要用途是通过检测可疑人员的尿液，在5-15分钟内 即可准确的判定出HIV病毒的抗体状态。本发明的检测准确度高、 检测方法简单、采样方便、性价比高。本发明不仅可适用于各级疾病 控制中心和各级检疫检验部门的实验室和各级医院的临床检验科室， 而且还可以适用于高危人群以及大规模普查和现场的快速检测，以及 家庭范围内的个人检验。本发明的优点在于
1) 尿液不同于血液，HIV感染者的尿液中仅含有HIV抗体，而 不是有着传染性的病毒本身。因此HIV不通过尿传播，可以安全地 收集和运输尿样到实验室。
2) 尿液代替血液检测样品收集简便易行，便于大规模筛查。无 针头釆集尿液标本时不会引起皮肤损伤，消除了与职业暴露相关的危 险因素，可以保护医护人员和被^r测者避免查体时因针刺意外感染艾 滋病病毒的危险。
3) 病人仅需要提供一个尿样，且尿样不需要浓缩和预处理，存 储方便、无需更多处理设备，尿液标本中的抗HIV抗体十分稳定。 测试时仅需要普通的技术，简易而便捷。从而有着较低的检测成本， 使得消费者更易于接受。
4) 适用人群广泛。大部分人不愿意抽血，但是任何人都会愿意 给你一个尿样品。尿液检测避免了采血对象不配合问题以及采血困难 的情况发生。该检测试剂不仅可用于血源筛查，而且还适用于外人群 如吸毒人群、暗娼、娱乐行业服务人员、少数民族地区受检人群、婚 前或孕妇检查等的艾滋病HIV抗体筛查。
图1为本发明结构示意图。
图2为38 nm胶体金颗粒、HIV-1 gp41抗原以及HIV-1 gp41抗 原标记的胶体金颗粒的紫外-可见吸收光谱。
图3为放大倍数为100万倍的透射电镜下未标记的胶体金颗粒图 像(标尺是50 nm )。
图4为放大倍数为100万倍的透射电镜下HlV-lgp41抗原标记 的胶体金颗粒图像(标尺是100nm )。
具体实施方式
实施例1
如图1所示，本发明一种快速尿液HIV检测诊断试纸条，所述
10试纸条包括最底部的基垫1，所述基垫上设置有侧流层析垫2,所述
侧流层析垫上设置有^r测线21和质控线22,所述检测线在质控线的 上游；所述侧流层析垫的上游端着经HIV抗原-胶体金复合物处理过 的金标结合垫3，所述金标结合垫的上游端连接样品垫4，所述侧流 层析垫的下游端连接吸水垫5;所述样品垫端为试纸条^r测端。 本发明所述侧流层析垫为硝酸纤维素膜。
本发明所述检测线上包被有HIV抗原；所述质控线上包被有抗 HIV单克隆抗体。 实施例2
如图1所示，本发明一种快速尿液HIV^企测诊断试纸条，所述 试纸条包括最底部的基垫1,所述基垫上设置有侧流层析垫2,所述 侧流层析垫上设置有检测线21和质控线22,所述检测线在质控线的 上游；所述侧流层析垫的上游端着经HIV抗原-胶体硒复合物处理过 的硒标结合垫3，所述硒标结合垫的上游端连接样品垫4，所述侧流 层析垫的下游端连接吸水垫5;所述样品垫端为试纸条检测端。
本发明所述侧流层析垫为硝酸纤维素膜。
本发明所述检测线上包被有HIV抗原；所述质控线上包被有抗 HIV单克隆抗体。
实施例1和实施例2制备的快速尿液HIV检测诊断试纸条的优 点为
1、 快速全部一企测过程Y义需5-15分钟，患者可立刻得到;f企测结果。
2、 准确采用单克隆抗体技术，使产品的灵敏性和特异性可以 大幅度的改善。
3、 采样简便仅需采取尿样，而且任意时刻的尿样均可。
4、 检测方便不需要对操作人员进行特殊培训，其结果可肉眼 判定，可随时随地进行。
5、 价格低廉不需特殊的场地，不需其它任何仪器设备，才企测费用低廉。
6、 人为操作误差小由于全部操作过程只有"加样，，一步，检测 过程几乎没有人为误差。
7、 稳定性好纳米金试剂稳定，不用水箱低温条件，可在室温 条件下长期保存( 一般寿命为两年)。
实施例3 制备方法
所述制备方法包括下列步骤
l)各部件板的制备包括基垫的制备、侧流层析垫的制备、金 标结合垫的制备、样品垫的制备和吸水垫的制备；
2 )将各部件板组装成快速尿液HIV检测诊断试纸条。 具体包括下列步骤
1、 胶体金的制备 首先将制备胶体金的所有玻璃器皿先用清水把玻璃器皿上的灰尘
沖洗干净，加入重铬酸钾，浓硫酸洗液浸泡24小时，并经珪烷化处理 后用高纯水洗净，烘干后备用。
取100 ml浓度为0.01%的氯金酸溶液，加热至沸腾，迅速加 入浓度为1%的柠檬酸三钠，继续搅拌煮沸15min左右，至溶液变 为葡萄酒红色即可，自然降温至4。C后，得胶体金溶液，放置备用；
2、 HIV-1 gp41抗原-胶体金复合物的制备和鉴定
用K2C03将制备好的胶体金溶液的pH值调节至6.7,加入适 用量的HIV-1 gp41抗原，将HIV-1 gp41抗原的浓度调节到6ng/ml， 磁力搅拌15分钟后加入BSA, BSA浓度达1.0呢后冷却。
将HIV-1 gp41抗原和胶体金溶液的混合溶液^f氐速离心，弃沉淀， :取上清高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV-1 gp41 抗原-胶体金复合物。
图2为38 nm胶体金颗粒、HIV-1 gp41抗原以及HIV-1 gp41抗 原标记的胶体金颗粒的紫外-可见吸收光谱。如图2所示，利用紫外-可见光分光光度计在200-800 nm进行扫描，测定的吸收曲线中不仅
12有胶体金的特征吸收峰，而且还有HIV-1 gp41抗原的特征吸收峰， 与单纯的HIV-l gp41抗原的特征吸收峰相比，两峰位置是一致的(^ax =280 nm)。
图3和图4分别是放大倍数为100万倍的透射电镜下观察到的未 标记的胶体金颗粒和HIV-l gp41抗原标记的胶体金颗粒的图像。两 者对比可以观察到图4中HIV-l gp41抗原标记胶体金复合物外围有 明显的低电子密度晕圈，表明胶体金颗粒表面吸附有HIV-l gp41抗原。
3、金标结合垫的制备
将初步纯化的HIV抗原-胶体金复合物用由含有0.2%( w/v )PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% ( w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照lOOpl/cm2 用量加到玻璃纤维膜上，37°C,干燥4小时，使得胶体金颗粒均匀 地附着在玻璃纤维素膜上；制成预置HIV-l gp41抗原-胶体金复合物 的金标结合垫。
4、在硝酸纤维素膜上喷点;险测线和质控线制备侧流层析垫 利用高速喷金划线机分别将新鲜制备的HIV-l gp41单克隆抗体溶 液和HIV -1 gp41抗原喷涂在硝酸纤维素膜上制成质控线和^r测线。 喷点速度为20 cm/sec。
质控线和4全测线之间的距离为5mm。然后 将硝酸纤维素膜置于37。C,干燥2小时，制成侧流层析垫。
5、 样品垫的制备
所述样品垫由经过释;^丈液处理过的玻璃纤维素膜构成，所述处理 步骤包括(1)将玻璃纤维素膜浸泡在释放液中后取出，或将释放液 喷涂在玻璃纤维素膜上；(2 )将玻璃纤维素膜上的释放液干燥。
所述释》文液为含有0.5% (v/v) Tween -20和0.1% (w/v ) PEG 的去离子水。
6、 吸水垫的制备
所述吸水垫是由经过干燥处理的玻璃纤维素膜构成。 实施例4 制备方法
13所述制备方法包括下列步骤
1)各部件板的制备包括基垫的制备、侧流层析垫的制备、金 标结合垫的制备、样品垫的制备和吸水垫的制备；
2 )将各部件板组装成快速尿液HIV检测诊断试纸条。 具体包括下列步骤
1、 胶体硒的制备
按Se: Na2S03的重量比为1:4的比例，将硒4分溶解在96°C - 98°C 的Na2S03水溶液中制备Na2SeS03溶液，实验中所用0.2M Na2SeS03储存溶液中含有0.6M Na2S03;
将1.25ml 0.2M Na2SeS03溶液和0.1ml浓盐酸在快速搅拌条件 下连续加入48.7ml 10%凝胶水溶液中制备50ml 5xl0-3 mol的硒 溶液；
将所得硒溶液冷却到5-7°C形成凝胶，之后将凝胶切割成碎块 放入双蒸水中5-TC温度下放置4-5天，将无机物除去；得胶体硒 溶液，；故置备用；
2、 HIV-1 gp41抗原-胶体硒复合物的制备
用K2C03将制备好的胶体硒溶液的pH值调节至6.7，加入HIV 抗原，将HIV抗原的浓度调节到6吗/ml，磁力搅拌15分钟后加入 BSA, BSA浓度达到1.0%后冷却；
将HIV抗原和胶体硒溶液的混合溶液低速离心，弃沉淀，取上 清高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV抗原-胶体 洒复合物；
3、 竭标结合垫的制备
将初步純化的HIV抗原-胶体竭复合物用由含有0.2%( w/v )PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% ( w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照100^1/cm2
用量加到玻璃纤维膜上，37°C干燥4小时，使得胶体硒颗粒均匀地 附着在玻璃纤维素膜上；制成HIV抗原-胶体硒复合物的硒标结合垫。 4、在硝酸纤维素膜上喷点检测线和质控线制备侧流层析垫利用高速喷金划线机分别将新鲜制备的HIV-1 gp41单克隆抗体溶 液和HIV -1 gp41抗原喷涂在硝酸纤维素膜上制成质控线和;险测线。 喷点速度为20 cm/sec。
质控线和检测线之间的距离为5mm。然后 将硝酸纤维素膜置于37",干燥2小时，制成侧流层析垫。
5、 样品垫的制备
所述样品垫由经过释^i:液处理过的玻璃纤维素膜构成，所述处理 步骤包括(1 )将玻璃纤维素膜浸泡在释放液中后取出，或将释放液 喷涂在玻璃纤维素膜上；(2 )将玻璃纤维素膜上的释放液干燥。
所述释放液为含有0.5% (v/v ) Tween -20和0.1% (w/v ) PEG 的去离子水。
6、 吸水垫的制备
所述吸水垫是由经过干燥处理的玻璃纤维素膜构成。 实施例5 使用方法
将实施例3制备的试纸条的检测端浸入在尿液或尿液稀释液中， 或将试纸条水平放置，用吸液管将100微升尿液或尿液稀释液加入到 样品垫，静置5分钟后，观察检测线和质控线是否显色；若检测线和 质控线同时显色，表明被检尿液中含有HIV抗体；若检测线不显色 而质控线显色，表明被4企尿液中没有HIV抗体；若检测线和质控线 同时不显色，表明该次;险测无效
本发明所述快速尿液HIV ^r测i貪断试纸条的基本工作原理为 本发明在结合垫上预置HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体竭 复合物，在硝酸纤维素膜上的下游的检测区内，同时分别包被HIV抗 原作为检测线，包被抗HIV单克隆抗体作为质控线。当样品加至结 合垫上的样品孔后，样品中的HIV抗体先与结合垫上的HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体硒复合物反应形成抗体-HIV抗原-胶 体金复合物或抗体-HIV抗原-胶体硒复合物。由于层析作用，该复合 物就会沿硝酸纤维素膜发生层析移动，到达检测线时与包被其上的 HIV抗原形成双抗原夹心免疫复合物，显色出现肉眼可见的红色条
15带；未与HIV抗体结合的游离胶体金或胶体硒标记的HIV抗原则继 续移动，在质控线与抗HIV单克隆抗体结合，出现另一条红色条带 作为质控。出现两条红色带则表示样品中有抗HIV抗体存在，判为 阳性。若为阴性样品，则检测线不出现红色条带，仅在质控线形成一 条红线。
实施例4 应用例
本发明所述快速尿液HIV检测诊断试纸条已经与中国医科大学 附属第 一 医院艾滋病研究所开展了技术合作，对已经确诊的艾滋病患 者进行了同步检测，即艾滋病研究所同时对同一病人利用常规 ELISA检测方法进行检测。其样板数已达50例，检测准确率达100%， 假阳性和假阴性均为0%,得到了好评。
经比较发现本发明试纸条条特异性较好，与其它物质无交叉反 应。试纸条4。C保存90天，室温保存75天，37。C保存15天，检测 结果未发生改变。3批试纸条4企测同一标本及同一批次的试纸条4企测 不同标本3次，检测结果均稳定不变。
人体的尿液中含有多种物质，正常尿液中水占96%-97%，其他 为尿素、尿酸、肌酐、氨等非蛋白氮化合物以及^e危酸盐等代谢产物。 此外，尿液中还含有微量的蛋白质和糖。近来研究表明，在HIV感 染者的尿液中可以检查到HIV抗体。尿液检测与传统的血液检测法 相比，具有相当大的优势。由于检测样品为尿液，故收集样品具有无 痛、方便、成本低、无需专业人员、样品处理简单等优点，尤其是可 免除扎针收集血液标本过程中带来交叉感染的危险，大大增加了检测 的安全性。
最后应说明的是以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发 明所描述的技术方案；因此，尽管本说明书参照上述的各个实施例对 本发明已进行了详细的说明，但是，本领域的普通技术人员应当理解， 仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神 和范围的技术方案及其改进，均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
权利要求
1、一种快速尿液HIV检测诊断试纸条，其特征在于所述试纸条包括最底部的基垫，所述基垫上固定有侧流层析垫，所述侧流层析垫上设置有检测线和质控线，所述检测线在质控线的上游；所述侧流层析垫的上游端连接着经HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体硒复合物处理过的结合垫，所述结合垫的上游端连接样品垫，所述侧流层析垫的下游端连接吸水垫；所述样品垫端为试纸条检测端。
2、 如权利要求1所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条，其特征 在于所述侧流层析垫为硝酸纤维素膜。
3、 如权利要求1所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条，其特征 在于所述检测线上包被有HIV抗原；所述质控线上包被有抗HIV 单克隆抗体。
4、 如权利要求1-3之任一所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条 的制备方法，其特征在于所述制备方法包括下列步骤l)各部件板的制备包括基垫的制备、侧流层析垫的制备、金 标结合垫的制备、样品垫的制备和吸水垫的制备；2 )将各部件板组装成快速尿液HIV检测诊断试纸条。
5、 如权利要求4所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述侧流层析垫由硝酸纤维素膜构成，在硝酸纤维 素膜上分别设置有检测线和质控线，检测线位于质控线的上游，所述 检测线是将含有HIV抗原的溶液喷点或划线在侧流层析膜上干燥后 形成；所述质控线是将含有抗HIV单克隆抗体的溶液喷点在或划线 在侧流层析膜上干燥后形成。
6、 如权利要求4所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述结合垫由经过HIV抗原-胶体金复合物处理过 的玻璃纤维素膜构成，所述HIV抗原-胶体金复合物的制备方法为取100 ml浓度为0.01%的氯金酸溶液，加热至沸腾，迅速加入 浓度为1%的柠檬酸三钠，继续搅拌煮沸15min,至溶液变为葡萄酒红色，自然降温至4"后，得胶体金溶液，放置备用；用K2C03将制备好的胶体金溶液的pH值调节至6.7，加入HIV抗原，将HIV抗原的浓度调节到6pg/ml，磁力搅拌15分钟后加入BSA，BSA浓度达到1.0%后冷却；将HIV抗原和胶体金溶液的混合溶液低速离心，弃沉淀，取上清高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV抗原-胶体金复合物；将初步纯化的HIV抗原-胶体金复合物用含有0.2% ( w/v ) PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% ( w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照lOO^d/cm2 用量加到玻璃纤维膜上，37°C干燥4小时，使得胶体金颗粒均匀地 附着在玻璃纤维素膜上；制成HIV抗原-胶体金复合物的金标结合垫。
7、如权利要求4所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述结合垫由经过HIV抗原-胶体硒复合物处理过 的玻璃纤维素膜构成，所述HIV抗原-胶体硒复合物的制备方法为按Se: Na2S03的重量比为1:4的比例，将硒粉溶解在96°C - 98°C 的Na2S03水溶液中制备Na2SeS03溶液，实-睑中所用0.2M Na2SeS03储存溶液中含有0.6MNa2SO3;将1.25ml 0.2M Na2SeS03溶液和0.1ml浓盐酸在快速搅拌条件 下连续加入48.7ml 10%凝胶水溶液中制备50ml 5xl(T3 mol的硒 溶液；将所得硒溶液冷却到5-7°C形成凝胶，之后将凝胶切割成碎块放 入双蒸水中5-7°C温度下放置4-5天，将无机物除去；得胶体硒溶 液，放置备用；用K2C03将制备好的胶体硒溶液的pH值调节至6.7,加入HIV 抗原，将HIV抗原的浓度调节到6^ig/ml,磁力搅拌15分钟后加入 BSA， BSA浓度达到1.0%后冷却；将HIV抗原和胶体硒溶液的混合溶液低速离心，弃沉淀，取上清 高速离心后小心吸去上清，沉淀物即为初步纯化的HIV抗原-胶体硒 复合物；将初步纯化的HIV抗原-胶体硒复合物用含有0.2^ (w/v) PEG、 0.5%( w/v )BSA、 3% (w/v )蔗糖的PB复溶液稀释后，按照100pl/cm2 用量加到玻璃纤维膜上，37°C干燥4小时，使得胶体硒颗粒均匀地 附着在玻璃纤维素膜上；制成HIV抗原4交体硒复合物的硒标结合垫。
8、 如权利要求5、 6或7之任一所述的快速尿液HIV检测诊断试 纸条的制备方法，其特征在于所述HIV抗原是HIV-1型抗原或HIV-2 型抗原；所述HIV抗体是HIV-1型抗体或HIV-2型抗体。
9、 如权利要求6所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述胶体金颗粒是实心的、或空心的、或具有核-壳结构的。
10、 如权利要求4所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述样品垫由经过释放液处理过的玻璃纤维素膜构 成，所述处理步骤包括(1)将玻璃纤维素膜浸泡在释》文液中后取出， 或将释放液喷涂在玻璃纤维素膜上；(2 )将玻璃纤维素膜上的释放液干燥。
11、 如权利要求10所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备 方法，其特征在于所述释力丈液为含有0.5% (v/v) Tween -20和0.1%(w/v) PEG的去离子水。
12、 如权利要求4所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条的制备方 法，其特征在于所述吸水垫是由经过干燥处理的玻璃纤维素膜构成。
13、 如权利要求l-3之任一所述的快速尿液HIV检测诊断试纸条 的使用方法，其特征在于将所述试纸条的检测端浸入尿液或尿液稀 释液中，或将试纸条水平放置，用吸液管将100微升尿液或尿液稀释 液加入到样品垫，静置5-15分钟后，观察检测线和质控线是否显色； 若检测线和质控线同时显色，表明被检尿液中含有HIV抗体；若检测 线不显色而质控线显色，表明被4企尿液中没有HIV抗体；若4企测线和 质控线同时不显色，表明该次检测无效；若检测线显色而质控线不显 色，表明该次检测无效。
全文摘要
本发明公开了一种快速尿液HIV检测诊断试纸条及其制备方法和使用方法，所述试纸条包括最底部的基垫，所述基垫上固定有侧流层析垫，所述侧流层析垫上设置有检测线和质控线，所述检测线在质控线的上游；所述侧流层析垫的上游端连接着经HIV抗原-胶体金复合物或HIV抗原-胶体硒复合物处理过的结合垫，所述结合垫的上游端连接样品垫，所述侧流层析垫的下游端连接吸水垫。通过检测可疑人员的尿液，所述试纸条即可在5-15分钟内准确地判定出被检测人员的HIV病毒的抗体状态。本发明的检测准确度高、检测方法简单、采样方便、性价比高。填补了国内空白，为艾滋病的预防控制提供了强有力技术支持和产品保证。
文档编号G01N33/569GK101487843SQ200910119170
公开日2009年7月22日 申请日期2009年3月6日 优先权日2009年3月6日
发明者关一夫, 李晓娜, 彪 王, 赵晓阳, 郝风进, 亮 郭 申请人:关一夫