专利名称：EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检免疫层析试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物技术领域，尤其是涉及 -种EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体免 疫层析联检试剂盒。
背景技术：
鼻咽癌(NPC)是上皮细胞来源地恶性肿瘤，在世界各地广泛存在。在我国南方，特 别是珠江三角洲及香港地区，是世界上鼻咽癌的高发区。我国约有80%以上的健康成人是 EB病毒携带者。在东南亚和北非也有较高的发病率。早期鼻咽癌放疗后5年生存率可达 80-90%，而晚期鼻咽癌的生存率仅为20% 。因此加强鼻咽癌的二级预防，即早发现、早诊断 和早治疗是提高鼻咽癌患者存活率的关键。 鼻咽癌的发生与EB病毒(Epstein-Barr， EBV)感染密切相关，通过检测EBV的抗 体早期诊断NPC是提高NPC患者存活率的一个重要手段。 研究表明，鼻咽癌病人在临床症状出现平均前三年时，就可观察到其血清中多种 抗EB病毒抗原抗体的含量显著升高，因而目前临床上筛査鼻咽癌患者最常用的手段即免 疫血清学检测EB病毒感染。其中临床....匕普遍使用的检测指标有EA-IgG、VCA-IgA等。由于 不同鼻咽癌病人的抗体谱不完全相同，因此多种抗原抗体的联合检测可进一步提高其诊断 性能。有实验表明，多种抗体联检的敏感度和特异性均较抗体单检有所提高，而且可以用于 鼻咽癌高发区健康人群筛査的风险评估。 目前在临床上应用的对血清EB病毒抗体的检测方法常为免疫荧光法和免疫酶标 法。免疫荧光法检测EB抗体虽灵敏度和特异性较好，但是其结果判断带有主观性，不易标 准化。ELISA与荧光法比较更快速方便，且易于标准化，但是耗时较长。 如何高效快速的对多种EB病毒的抗体进行检测，是目前研究的一个热点。胶体金 免疫层析法在ELISA基础上应运而生，其原理是以硝酸纤维素膜为载体，利用毛细管作用 及吸水作用，使抗原和抗体的反应在一个特殊的层析装置上，以标本通过层析方式在膜上 前进的方式快速的完成检测过程。此方法检测抗体简单快速，不需其他仪器设备，几分钟即 可用肉眼观察检测结果，目前已在临床检测中取得了广泛的应用，且在整个免疫学检测范 围内也有广泛的应用。采用胶体金免疫层析技术联合检测EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体， 虽在临床上有很高的实用检测意义，但目前尚未有将胶体金免疫层析技术应用于EB病毒 抗体的联合检测。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检免疫层析试剂
.品.o 为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案 本实用新型所述的EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，包括联检 反应试纸条,所述试纸条包括PVC基板，贴覆在PVC基板中部的硝酸纤维素膜，以及划于硝酸纤维素膜上的包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物羊抗鼠IgG 抗体的点样线，在所述硝酸纤维素膜(2)下端粘贴有胶体金垫，胶体金垫F端粘贴有样品 垫；在所述PVC基板的吸水端粘贴有棉浆板。 将试纸条置于带有卡盖的卡体内，在所述卡盖上对应于点样线的位置处开设有观 察窗口 ，对应于棉浆板位置处开设有加样孔，就变成了卡式试剂盒。 卡式试剂盒的卡体可以为条形卡体、方形卡体或扇形卡体。 当为条形卡体时，包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物 羊抗鼠I gG抗体的三条平行点样线位于同一硝酸纤维素膜上。 当为方形卡体或扇形卡体时，包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋 白点样线分别与质控物羊抗鼠IgG抗体的点样线组合，在两个硝酸纤维素膜上划平行线。 本实用新型中的试剂盒利用了胶体金免疫层析的原理,使EA病毒的两种抗原、抗 体在同一层析装置(硝酸纤维素膜)上进行反应,并通过肉眼观查各条线的显色情况，从而 对EA病毒的EA-IgG、 VCA-IgA抗体进行检测。 本实用新型所述的试剂盒同ELISA试剂盒相比，其优点在于 1、同时检测多种抗体EB病毒两种抗体的联合检测提高了检测的灵敏度和特异
性，对鼻咽癌的诊断有很好的临床意义。 2、反应时间短整个实验可在3-5分钟内即可完成，适合大规模的快速血检。该试
剂盒仅有两歩检测步骤，但敏感度却与需卜2小时完成的ELISA接近。 3、检测过程中不需其他仪器设备，因此检测结果也不受仪器的影响，同时不受反
应环境的影响，加入胶体金标记物即可显色,操作简便。 本实用新型试剂盒与传统胶体金试剂盒相比，其优点在于 1 、同时检测EB病毒的两种抗原，灵敏度和特异性均较单检高。 本实用新型中试剂盒利用胶体金免疫层析技术的原理，在同一装置上实现了对两 种EB病毒抗体的同时检测，操作简便、迅速、准确，可适用于大规模血液检查，更有利于鼻 咽癌患者的早期发现和诊断。
图1是本实用新型条式试剂盒的结构示意图。 图2、图3、图4是本实用新型卡式试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
实施例1 : 如图1所示，本实用新型EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，包括 联检反应试纸条，所述试纸条包括PVC基板1 ，贴覆在PVC基板1中部的硝酸纤维素膜2，以 及划于硝酸纤维素膜上的包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物羊 抗鼠IgG抗体的点样线3，在所述硝酸纤维素膜(2)下端粘贴有胶体金垫，胶体金垫Rl粘 贴有样品垫；在所述PVC基板1的吸水端粘贴有棉浆板,在其上、下端贴色标膜和Mark线；使用时,将试纸条标志线一端插入待检标本中(浸入时标本液面不要超过箭头指示线)； 20min后肉眼观察结果，质控线无论EB病毒抗体阳性或阴性均显色，若质控线不显色说明 本检测试纸失效；观察相应检测线位置有无红色线条,检测线呈红色或浅红色证明EB病毒 抗体在体内呈阳性，检测线不显色判为阴性。 实施例2 : 本实用新型EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，包括置于卡体内 的试纸条，所述试纸条包括PVC基板1，贴覆在PVC基板1中部的硝酸纤维素膜2，以及划于 硝酸纤维素膜上的包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物羊抗鼠 IgG抗体的点样线3，在所述硝酸纤维素膜(2)下端粘贴有胶体金垫，胶体金垫下端粘贴有 样品垫；在所述PVC基板1的吸水端粘贴有棉浆板；在所述卡体的卡盖4 ....匕对应于点样线 3的位置处开设有观察窗口 5,对应于棉浆板位置处开设有加样孔6,根据实际情况，所述卡 体可以为条形、方形、扇形或其他几何形状。 当为条形卡体时，如图2所示，包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原
蛋白和质控物羊抗鼠IgG抗体的三条平行点样线位于同一硝酸纤维素膜上。 当为方形卡体或扇形卡体时，如图3、4所示，包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、
VCA纯化抗原蛋白点样线分别与质控物羊抗鼠IgG抗体的点样线组合，在两个硝酸纤维素
膜上划平行线。 使用时，取出试剂盒，平放于操作台上，用一次性塑料滴管在加样端加入待测标本 (血清、血浆或全血)80 y 1 ;20min后肉眼观察结果，质控线无论EB病毒抗体阳性或阴性均 显色,若质控线不显色说明本检测试纸失效；观察相应检测线位置有无红色线条，检测线呈 红色或浅红色证明EB病毒抗体在体内呈阳性,检测线不显色判为阴性。
权利要求一种EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，包括联检反应试纸条，其特征在于所述试纸条包括PVC基板(1)，贴覆在PVC基板(1)中部的硝酸纤维素膜(2)，以及划于硝酸纤维素膜上的包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物羊抗鼠IgG抗体的点样线(3)，在所述硝酸纤维素膜(2)下端粘贴有胶体金垫，胶体金垫下端粘贴有样品垫；在所述PVC基板的吸水端粘贴有棉浆板。
2. 根据权利要求1所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，其特征 在于所述试纸条置于带有卡盖(4)的卡体内，在所述卡盖(4)....匕对应于点样线(3)的位置 处开设有观察窗口 (5),对应于棉浆板位置处开设有加样孔(6)。
3. 根据权利要求2所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，其特征 在于所述卡体为条形卡体、方形卡体或扇形卡体。
专利摘要本实用新型公开了一种EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体免疫层析联检试剂盒，包括联检反应试纸条，所述试纸条包括PVC基板，贴覆在PVC基板中部的硝酸纤维素膜，以及划于硝酸纤维素膜上的包被有EB病毒的EA纯化抗原蛋白、VCA纯化抗原蛋白和质控物羊抗鼠IgG抗体的点样线，在所述硝酸纤维素膜下端粘贴有胶体金垫，所述胶体金垫下端粘贴有样品垫；在所述PVC基板的吸水端粘贴有棉浆板。本实用新型的试剂盒利用了胶体金免疫层析的原理，使EA病毒的两种抗原、抗体在同一层析装置(硝酸纤维素膜)上进行反应，并通过肉眼观查各条线的显色情况，从而对EA病毒的EA-IgG、VCA-IgA抗体进行检测。
文档编号G01N33/569GK201464479SQ200920091660
公开日2010年5月12日 申请日期2009年7月17日 优先权日2009年7月17日
发明者付光宇, 刘功成, 吴学炜, 张银, 李奎, 李桂林, 李静辉, 王菁, 苗拥军, 项立红 申请人:郑州安图绿科生物工程有限公司