专利名称：用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法
用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请根据35U. S. C. § 119(e)享有2009年11月5日递交的美国临时专利申请第61/258242号的优先权。关于联邦资助研究或开发的声明本发明以美国国立卫生研究院授予的基金号NIH-P50-CA86355和POl-CAl 17969-01在美国政府支持下进行。美国政府在本发明中具有特定权利。背景在美国和其他エ业化国家中，胰腺癌(PDAC)是癌症相关死亡的第四大主要原因[I]。尽管已作出了大量努力，其仍是毁灭性的疾病，其5年存活率小于5%且平均中值存活 期小于I年[I]。这种严酷的预后主要是由于其初歩诊断经常延迟在不可治愈的晩期，通常在转移后。认为PDAC通过称作胰上皮内瘤变(PanIN)的前期病变进展成侵入性癌症，与在其他恶性肿瘤中观察到的腺瘤-癌序列相似。病变从腺瘤(PanIN I)进展成伴有发育异常的腺瘤(PanIN II)、原位癌(PanIN III)并最终进展成侵入性癌症[2，3，4]。尽管通过前期病变充分表征了该致癌作用，仍未获得PDAC的有效早期检测和筛查。这主要是由于缺乏用于早期癌症的诊断工具和生物标志。理想地，因此PDAC生物标志不仅应检测到侵入性癌症，而且应检测到其前期病变、PanIN II和更重要的侵入前恶性PanIN III病变。目前，CA
19.9是唯一临床使用的PDAC血清生物标志。然而，其缺乏特异性和灵敏性，尤其是对于检测小的癌症和恶性和良性胰疾病的分化的特异性和灵敏性[5]。因此，CA 19. 9不适合PDAC的筛查或早期检测。侵入性内窥镜程序(EUS和ERCP)可检测某些早期病变，但受限于损伤胰、高假阴性率的可能性，并且高度依赖操作者[6，7]。其还经常不能区分恶性与良性或恶化前病变[8，9]。横截面腹部成像也已证实不能可靠地检测早期PDAC，尤其是在高危患者中[10，11]。在多达30% PDAC患者中，其不能在手术前检测转移[12，13]且不能安全地区分慢性胰腺炎(CP)和PDAC[14，15]。PDAC和慢性胰腺炎的可靠辨别是重要的，但通常难以做到。这两种疾病共有许多临床征兆和症状，但各自采用极为不同的治疗策略。虽然唯一可用的PDAC祛病治疗是根治性手术切除，治疗慢性胰腺炎集中于症状改善，最经常地可不通过手术实现这种改善[14，15]。克服目前采用的诊断工具的缺点的新型生物标志和非侵入性成像策略将允许PDAC和慢性胰腺炎的可靠辨别。其还将允许在转移开始之前更早地诊断PDAC并因而治疗PDAC0因此非常需要它们且最終可有助于提高存活率[16]。最近，基于体外和基因工程小鼠模型中的发现，表明网蛋白-1 (Plecl)是用于PDAC的潜在新型成像生物标志[17]。鉴定到用于检测Plecl的肽配体[17]。然而，仍有待评估Plecl作为用于人PDAC和其前期病变的生物标志的合适性。作为非小细胞肺癌(Harris, 2009, J. Clin. Oncology, 27, No. 15S(5月20日増刊)e22118)和人结肠直肠腺瘤和腺癌(Lee，2004，J. Med.，35 :(1-6) :141-149)的生物标志，Plecl已被确定为用于恶性胰“导管内乳头状黏液性肿瘤”(IPMN)的生物标志并已被假设为用于早期检测产生于IPMN的癌的标志(Bausch等人,2009, J. Gastrointest.Surg. ,13 :1948) o Plecl 的一个肽配体是肽 KTLLPTP(SEQ ID NO :1) [Kelly 等人(2008)iargeted nanoparticles lor imaging incipient pancreatic ducta丄 adenocarcinoma.PLoS Med 5 :4 :e85 ;国际专利公布号为 WO 2009/129220，Kelly 等人，2009 年 10 月 22 日公布]。本领域中存在对更好的癌症生物标志、对识别生物标志的新型且更好的试剂的长久渴望的需要，以帮助对癌症进行诊断、监控和定位。本发明满足了这些需要。发明概述本发明基于靶向网蛋白-I的本文所述的新型支链多聚体肽成像复合物，且还基于用该复合物获得的令人惊奇的結果。在早期侵入前、原发性和转移性人PDAC中网蛋白-I (GenBank登记号AAR95677)被特异性上调。在临床前模型中，网蛋白-I是可用于非侵入性成像的首要PDAC生物标志之一。综合起来，这些数据表明Plecl是灵敏且特异的PDAC生物标志，且可用来改进其检测和分期。本发明提供了结合网蛋白-I或其同源物(homolog)或片段的多聚体肽配体复合物，所述复合物包括独立结合网蛋白-I或其同源物或片段的至少两个肽。一方面，与网蛋白-I或其同源物或片段结合的每种肽独立并任选地包括至少ー个非标准氨基酸置換或保守氨基酸置換或添加。一方面，独立地，任选地通过添加至少ー个额外的氨基酸修饰多聚体的每个肽。一方面，多聚体的每个肽独立且任选地与聚こニ醇偶联。一方面，多聚体的每个肽或任选地与聚こニ醇偶联的肽进一歩与螯合剂偶联。任选地，螯合剂通过至少一个接头与所述肽或任选地与聚こニ醇偶联的肽偶联。任选地，至少ー种显像剂与所述螯合剂偶联，且任选地至少ー种治疗剂与所述螯合剂偶联。一方面，多聚体选自由ニ聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体和八聚体组成的组。一方面，多聚体肽配体复合物为同聚物或异聚物。一方面，同聚物是四聚体。在一个实施方式中，多聚体肽配体复合物包含选自由DTPA、D03A、DOTA, EDTA,TETA, EHPG, HBED, Ν0ΤΑ、DOTMA, TETMA, PDTA, TTHA, LICAM、HYNIC 和 MECAM 组成的组的螯合齐 。一方面，聚こニ醇是聚こニ醇5000。在一个实施方式中，多聚体肽配体复合物包含选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组的显像剤。一方面，显像剂是放射性核素。一方面，放射性核素选自由n°In、mIn、mLu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94niTc、94Tc、99mTc、1201、1231、1241、1251、1311、154^158Gd、32P、11C、13N、150、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55CO、72AS、75Br、76Br、82mRb、83Sr 和其他、-、β -或正电子-发射体组成的组。一方面，放射性核素是mIn。一方面，多聚体肽配体复合物包含独立地具有选自由SEQ ID NO :1_4和9-22组成的组的序列的肽。一方面，所述序列选自由SEQ ID NO :1-4组成的组。SEQ ID NOI (KTLLPTP)是基础肽配体，且其他序列是其修饰体(见实施例和图9)SEQ ID NO :2_β AKTLLPTPSEQ ID NO :3-β AKTLLPTPGGS、
SEQ ID NO :4_KTLLPTPGGSSEQ ID NO :9_ATLLPTPSEQ ID NO : 10-KALLPTPSEQ ID NO :11_KTALPTPSEQ ID NO : 12-KTLAPTPSEQ ID NO : 13-KTLLATPSEQ ID NO : 14-KTLLPAPSEQ ID NO : 15-KTLLPTA SEQ ID NO 16-β AATLLPTPGGSSEQ ID NO 17-βAKALLPTPGGSSEQ ID NO 18-β AKTALPTPGGSSEQ ID NO 19-β AKTLAPTPGGSSEQ ID NO :20-β AKTLLATPGGSSEQ ID NO :21-β AKTLLPAPGGSSEQ ID NO :22-β AKTLLPTAGGS (SEQ ID NO :22)注意到在随此提供的序列表中，β丙氨酸残基以Xaa提供。这些序列可被修饰，包括不明显影响这些肽结合网蛋白-I或其同源物或片段的氨基酸置換和添加。尽管以上说明了丙氨酸置換，本发明包括使用其他氨基酸的置換。另外，本文公开的数据表明苏氨酸以及脯氨酸在序列中的重要性。本发明的肽作为多聚体是有用的。另外，可通过添加氨基酸例如β丙氨酸(βΑ)和聚こニ醇来修饰多聚体以增加稳定性、在血流和组织中的半衰期，減少降解等。本领域普通技术人员将理解在某些情况下可改变序列在复合物中的取向且多聚体可以是异聚物或同聚物。在一个实施方式中，多聚体复合物为四聚体且具有式(β AKTLLPTPGGS (PEG5000))4ΚΚΚΗ)0ΤΑβΑ-ΝΗ2，图8中示出了其化学结构。图8还示出了与DOTA偶联的显像剂。一方面，四聚体复合物具有约8. 3χ 10_7Μ的Ki。在一个实施方式中，显像剂是mIn。一方面，用与计算机连接的SPECT/CT扫描仪检测显像剂，并使用程序分析成像数据。本发明还提供了用于检测受治疗者体内的网蛋白-I或其同源物或片段的方法。该方法包括对受治疗者施用包含显像剂的多聚体肽配体复合物，和检测包含网蛋白-I的细胞的位置。一方面，该方法包括使用多聚体肽配体成像复合物中的肽配体，其中每个肽配体具有独立地选自由SEQ ID NO :1-4和9_22组成的组的序列。一方面，该方法提供了选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组的显像剂的用途。本领域普通技术人员将理解所使用的检测方法将取决于所使用的具体显像剂。在该方法的一方面，网蛋白-I或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-I或其同源物或片段。本发明还提供了用于检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗的方法，其中癌症细胞表达或呈递网蛋白-I或其同源物或片段。该方法包括向受试受治疗者施用包含多聚体肽配体复合物的药物组合物，其中该复合物包含显像剂，且然后检测显像剂和确定显像剂在受试受治疗者体内的水平和位置。将受试受治疗者体内的水平和位置与来自未受影响的受治疗者的其他方面相同的位置或与受试受治疗者的未受影响的区域的显像剂的水平和位置进行对比。与来自未受影响的受治疗者或来自受试受治疗者的未受影响的区域的所述样品中显像剂的水平或位置相比，该显像剂在受试受治疗者体内的更高水平或不同位置表明该受试受治疗者患有表达或呈递网蛋白-I或其同源物或片段的癌症。检测到的显像剂的水平或位置是对生物标志网蛋白-I的位置和量的指示。在一个实施方式中，癌症选自由头颈癌、肝癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巣癌、子宮癌、子宮内膜癌、宫颈癌、前列腺癌、肾上腺癌、淋巴瘤、唾液腺癌、骨癌、脑癌、小脑癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、ロ鼻咽癌(oronasopharyngeal cancer)、NPC、肾癌、膀胱癌、皮肤癌、黑色素瘤、基底细胞癌、硬腭癌、舌鳞状细胞癌、脑膜瘤、多形性腺瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、皮质腺瘤、肝细胞癌、胰腺癌、鳞状细胞癌和腺癌组成的组。—方面，所述癌症是胰腺癌。一方面，胰腺癌选自由胰导管腺癌、胰上皮内瘤变、腺瘤、伴有发育异常的腺瘤和原位癌组成的组。 在一个实施方式中，所述癌症是转移性癌症。本发明还用于比较待成像的网蛋白-I的水平以基于所检测到的显像剂的水平(网蛋白-I的量的量度)帮助确定癌症是良性还是恶性的。本发明还用于确定癌症的癌变阶段并监控其从早期到晩期癌症的进展。该方法还用于确定待使用的治疗的类型和量。在本发明的方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物的肽各自具有独立地具有选自由SEQ ID NO :1-4和9-22组成的组的序列。在本发明的方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物具有式(β AKTLLPTPGGS(PEG5000)) 4KKKKD0TA β A-NH2 且所述显像剂为 mIn。在该方法的一个实施方式中，显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。在本发明的一个实施方式中，网蛋白-I或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-I或其同源物或片段。本发明还提供了用于诊断受治疗者体内的癌症的组合物和方法，其中癌症细胞表达网蛋白-I或其同源物或片段。该方法包括获得来自受治疗者的生物样品，使样品接触包含权利要求I的多聚体肽配体复合物的组合物，其中复合物包含显像剂。该方法还提供了将来自受试受治疗者的样品中的网蛋白-I的水平或位置与来自从未受影响的受治疗者获得的其他方面相同的样品的网蛋白-I的水平或位置或与包含已知量的网蛋白-I的标准样品进行比较，其中来自所述受试受治疗者的所述样品中的更高水平的网蛋白-I表明所述受试受治疗者患有癌症。在该方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物具有式(β AKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKD0TA β A-NH2。一方面，显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。在一个实施方式中，本发明提供了包含药学可接受的载体和结合网蛋白-I的多聚体肽配体复合物的药物组合物。
本发明还包括试剂盒，其包含含有药学可接受的载体和权利要求I的多聚体肽配体复合物的药物组合物、涂抹器和关于其使用的说明材料，和任选地显像剂和治疗剂。为评价网蛋白-I靶向的肽(PTP)对于体内成像的效用，本发明在一个实施例中公开了在GMP级设备中将肽合成为用DOTA作为显像剂的螯合剂的四聚体结构。一方面，显像剂是mIn。一方面，用于 本申请中的网蛋白-1的肽配体是肽KTLLPTP (SEQ ID NO I) (Kelly等人，2008，PLoSMedicine, 5 4 :0657-0668 ;国际专利公布号为 WO 2009/129220, Kelly 等人，2009年10月22日公布)。一方面，可在制备多聚体肽配体成像复合物之前如本文所述修饰肽配体。一方面，修饰的肽配体是。一方面，本发明的新型四聚体肽成像复合物具有下式( β AKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKD0TA β A-NH2 (本文也表示为[(Ala-Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser-PEG5K) 2_Lys] 2-Lys-Lys (DOTA) -Ala-NH2),也就是说，其是包含四个肽的复合物，这四个肽是网蛋白-I的配体。一方面，该复合物还包含显像剂以帮助显示网蛋白-I表达细胞的位置。一方面，显像剂是mIN。任选地，治疗剂可被连接或可被包括在包含成像复合物的药物组合物中。本领域普通技术人员将理解，基础肽配体，即SEQ ID NO :1，可以在复合物中以反方向取向。一方面，网蛋白-1的其他肽配体包括但不限于SEQ ID NO :1_4和9_22和其有功能的同源物、衍生物和片段。一方面，本发明的四聚体复合物具有约8. 3x 10_7M的Ki (抑制离解常数)。一方面，当向受治疗者施用时，其具有约4. 29分钟的血液半衰期。本发明还提供了其他活性四聚体复合物。例如，本发明包括包含用三个额外的氨基酸(Gly、Gly 和 Ser)修饰的 SEQ ID NO :1，也就是 KTLLPTPGGS (SEQ ID NO 4)的复合物。四聚体复合物具有式[Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro_Gly-Gly-Ser]4-LyS4-Ala-DOTA,也表示为[KTLLPTPGGS]4-Κ4-β A-DOTA，具有图7的结构。赖氨酸⑷具有结构
ONHtNH2
箱氨酸如本文使用的临床相关SPECT示踪剂能够实现小PDAC和转移的检测。一方面，显像剂或可检测的部分包括但不限于放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂。令人惊奇地，本发明的四聚体肽成像复合物比之前已知的药物更灵敏。另外，令人惊奇地，本发明的四聚体肽成像复合物比已知的药物更迅速地发挥作用。本申请还公开了网蛋白-1在许多类型的癌症中的表达(图2)。因此，本发明包括使用本发明的多聚体肽成像复合物来检测、诊断和定位除了胰腺癌以外的癌症。本发明还提供了量化网蛋白-I水平，并因此包括区分正常、良性和恶性组织的能力。一方面，多聚体肽成像复合物包括四聚体肽。
本发明还提供了试剂盒，其包含至少ー种本发明的多聚体肽配体复合物、说明材料，且任选地包括至少ー种显像剂和任选地至少ー种治疗剂。以下更详细地描述了本发明的各个方面和实施方式。附图
简述图I :网蛋白-I的免疫组织化学和蛋白质印迹。A)所评价的正常膜、慢性胰腺炎、PanIN、PDAC、异种移植的PDAC和PDAC转移部位(肝脏、淋巴结和腹膜)的代表性图像。概览视图(上图)和黒色框的详细视图(下图)。慢性胰腺炎呈网蛋白-I弱染色，而正常的胰不表达网蛋白-1。PanIN显示出弱至中度的膜染色模式。TOAC和PDAC异种移植组织呈中度至强的网蛋白-I胞质和膜染色。常见的PDAC转移部位未表现出明显的网蛋白-I表达，而肿瘤细胞呈Plecl强染色。B)样本中染色強度的分布。所有PDAC个例呈现出中度或强的染色模式，而正常胰和大部分的慢性胰腺炎不表达网蛋白-I。相比之下，多于一半的 PanIN II病变弱或中度表达Plecl，而大部分的PanIN III病变为Plecl阳性。C)癌变期间Plecl的细胞定位也会变化。虽然在所有PanIN I和大部分PanIN II病变中仅在膜中鉴定到Plecl，但在某些PanIN III病变中其还存在于胞质中，且在PDAC中总是在胞质中鉴定到Plecl。D)来自50mg的胰组织(快速冷冻的手术样本)的Plecl定量蛋白质印迹。在正常的胰和CP中未检测到Plecl，而其存在于每个PDAC中。图2 :网蛋白-I在正常和恶性人组织中的表达用于评价网蛋白-I表达的组织微阵列的免疫组织化学。除了膀胱和男性生殖道，正常组织仅表现出弱至中度的网蛋白-I表达。只在胰、食道、胃和肺中观察到区别正常与恶性疾病的网蛋白-1表达的明显差异。常见的PDAC转移部位(淋巴结、肝脏)不表达Plecl。图3 :原位PDAC内Plecl的体内成像(A)。tPTP的体外验证。将L3. 6细胞平铺在96孔板上并与mIn-tPTP —起孵育和递增对数浓度的tPTP或混杂四聚体一起孵育。(B)用mIn-tPTP注射携帯来自原位植入的L3. 6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠并在注射后4小时通过SPECT/CT成像。注意到tPTP在PDAC中的累积，允许对胰中和腹膜转移的肿瘤的体内成像。T-肿瘤，L-肝脏，rK-右肾，IK-左肾，M-腹膜转移。(C) SPECT/CT成像(图3)后，处死动物(η = 5)，收集器官并评价Y计数。(D)组织学。处死具有原位移植的肿瘤的动物并取出胰和具有可见腹膜转移的区域，包埋在OCT中，切片并用Η&Ε染色。Α.胰中肿瘤的IOx图像。插图，胰的2χ视图，示出了两个肿瘤。B腹膜转移的IOx图像。插图，转移和周围腹I吴的2χ图像。图4 tPTP靶向PDAC并能够实现非侵入性体内成像。用mIn_tPTP注射携带来自原位植入的L3. 6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠并在注射后4小时通过SPECT/CT成像。SPECT/CT成像表明tPTP累积在PDAC中，允许对胰中和腹膜转移的肿瘤的体内成像。T-肿瘤；L-肝脏；rK-右肾；IK-左肾；M-腹膜转移。上图-径向平面视图；下图-冠状平面视图。左侧两幅图像-CT ;左起第二幅-SPECT ;左起第三幅-SPECT/CT ;右侧两幅图像-MIP。(还參见图3)。图5 :网蛋白-1靶向肽的图解说明。高度图示化形式的多聚体肽配体复合物，包括四拷贝的SEQ ID NO :1以增加多价性，且描绘了四条5000Da的PEG链，可加入这些链以增加药物的循环时间、降低免疫原性并保护肽免于在到达期望的靶之前被体内裂解。未示出其他可能的修饰。
图6 tPTP-6A的体内表征。对携带来自原位植入的L3. 6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠注射的mIN-tPTP的血液半衰期。在注射后0、15、30、45、60和120分钟取血液。tPTP的血液半衰期为4. 29分钟。6B. SPECT/CT成像(见图4)后，处死动物(η = 5)，收集器官并评价Y计数。胰表现出3%的注射剂量/克，而在腹腔中发现的转移表现出I. 5%的注射剂量/克。mIN-tPTP排泄的主要途径是通过尿。图7 [Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser] 4_Lys4- β Ala-DOTA。具有也表不为[KTLLPTPGGS]4-K4-0A-DOTA 的式[Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser]4_Lys4- β Ala-DOTA 的四聚体复合物的化学结构。图8 tPTP-4 ( β AKTLLPTPGGS (PEG5000)) KKKKD0TA β A-NH2 的化学结构。提供了 包括mIn分子的多聚体肽复合物的化学结构。图9 :KTLLPTP(SEQ ID NO 1)的氨基酸置换丙氨酸突变。本研究中使用的肽由也称为Panc 27肽的噬菌体来源的序列KTLLPTP (SEQ ID NO : I ;对照)和突变序列组成。七个位置中的每ー个各自被突变成丙氨酸。分另进行了丙氨酸突变ATLLPTP、KALLPTP、KTALPTP、KTLAPTP、KTLLATP、KTLLPAP 和 KTLLPTA，即 SEQ ID NO :9_15 并测试亲和力。详述缩写和简称βΑ-β 丙氨酸CP-慢性胰腺炎D0TA-1，4，7，10-四氮杂环十二烷 _1，4，7，10-四こ酸ncPTP-阴性对照 PTPNIR-近红外NIRF-近红外荧光团Panc 27 肽 _KTLLPTP(SEQ ID NO 1)PanIN-胰上皮内瘤变PanIN I-腺瘤PanIN II-伴有发育异常的腺瘤PanIN III-原位癌PDAC-胰导管腺癌Plecl-网蛋白-1PTP-网蛋白-1靶向肽SPECT-单光子发射计算机断层显像tPTP-四聚体网蛋白-1靶向肽，也称为四聚体合成肽(其靶向网蛋白-1)定义在描述和要求保护本发明中，将根据以下提供的定义使用以下术语。本文使用冠词“a (—个)”和“an (—个)”指ー个或多于ー个(即，指至少ー个)的该冠词的语法对象。举例来说，“ー个元件”指一个元件或多于ー个的元件。如本文所用的，术语“约”指近似，在大约或附近的区域。当结合数值范围使用术语“约”时，其通过扩大界限高于或低于所提供数值来修改那个范围。一般来讲，本文使用术、语“约”来使数值与所提供值上下变化10%。一方面，术语“约”指加上或减去与其一起使用的数的数值的20%。因此，约50%指在45%-55%的范围内。本文通过端点提及的数值范围包括包含在那个范围内的所有整数和分数(例如，I至5包括I、I. 5、2、2. 75,3,3. 90、4和5)。还应当理解其所有整数和分数被认为被术语“约”修改。如本文所用的，与表示由形成腺(包围空腔的细胞的集合)的细胞组成的良性(非癌性)肿瘤的“腺瘤”相反，“腺癌”指癌性肿瘤。如本发明上下文中使用的，术语“其他治疗活性化合物”或“其他治疗剂”指使用或施用化合物用于待治疗的具体损伤、疾病或紊乱的其他治疗用途。例如，该化合物可包括被用来治疗无关疾病或紊乱，或可能不对被治疗的损伤、疾病或紊乱的初次治疗反应的疾病或紊乱的化合物。
如本文所用的，术语“佐剂”指当与特定抗原组合使用时引发增强的免疫反应的物质。如本文所用的，术语化合物“的施用”和/或“施用”化合物应理解为是指对需要治疗的受治疗者提供本发明的化合物或本发明的化合物的前药。如本文所用的，术语“气溶胶”指空气悬浮体。特别地，气溶胶指本发明的制剂和其空气悬浮体的颗粒化或原子化。如本文所用的，“激动剂”是物质组合物，当对哺乳动物例如人施用时，其增强或延长由靶化合物或目标分子在哺乳动物体内的水平或存在引起的生物活性。如本文所用的术语“肽结构的变化”指包括但不限于序列变化和翻译后修饰的变化。“拮抗物”是物质组合物，当对哺乳动物例如人施用时，其抑制由目标化合物或分子在哺乳动物体内的水平或存在引起的生物活性。如本文所用的，“减轻疾病或紊乱的症状”指减小症状的严重程度或与患者经历这种症状的频率，或两者。如本文所用的，氨基酸由其全称，由其相应的三字母代码，或由其相应的一字母代码表示，如下表所示
权利要求
1.一种用于结合网蛋白-I或其同源物或片段的多聚体肽配体复合物，所述复合物包括独立地结合网蛋白-I或其同源物或片段的至少两个肽；其中，结合网蛋白-I或其同源物或片段的所述肽各自独立地任选地包含至少ー个非标准氨基酸置換或保守氨基酸置換；其中，所述肽各自独立地任选地通过添加至少ー个额外的氨基酸而被修饰；其中，所述肽各自任选地与聚こニ醇偶联；其中，所述肽或任选地与聚こニ醇偶联的肽各自独立地还与螯合剂偶联，且任选地所述螯合剂通过至少ー个接头与所述肽或任选地与聚こニ醇偶联的肽偶联；其中，任选地，至少ー种显像剂与所述螯合剂偶联；且其中，任选地，至少ー种治疗剂与所述螯合剂偶联。
2.根据权利要求I所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体是同聚物或异聚物。
3.根据权利要求2所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体是四聚体。
4.根据权利要求3所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体肽配体复合物的肽独立地具有选自由SEQ ID NO :1-4和9_22组成的组的序列。
5.根据权利要求4所述的多聚体肽配体复合物，其中所述序列选自由SEQID NO :1-4组成的组。
6.根据权利要求5所述的多聚体肽配体复合物，其中所述四聚体复合物具有约8.3xIO^7M 的 Ki。
7.根据权利要求6所述的四聚体肽配体复合物，其中所述复合物具有式(PAKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKDOTA β A-NH2。
8.根据权利要求I所述的多聚体肽配体复合物，其中所述螯合剂选自由DTPA、D03A、DOTA, EDTA, TETA, EHPG, HBED, ΝΟΤΑ、DOTMA, TETMA, PDTA, TTHA, LICAM、HYNIC 和 MECAM 组成的组。
9.根据权利要求I所述的多聚体肽配体复合物，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。
10.根据权利要求9所述的多聚体肽配体复合物，其中所述显像剂是放射性核素。
11.根据权利要求10所述的多聚体肽配体复合物，其中所述放射性核素选自由η°Ιη、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、1231、124I、1251、131I、154-158Gd、32p、nC、13N、150、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55CO、72AS、75Br、76fc、82mRb、83Sr 和其他Y-、β -或正电子-发射体组成的组。
12.根据权利要求11所述的多聚体肽配体复合物，其中所述放射性核素是mIn。
13.根据权利要求I所述的多聚体肽配体复合物，其中所述聚こニ醇是聚こニ醇5000。
14.一种检测受治疗者体内的网蛋白-I或其同源物或片段的方法，所述方法包括向受治疗者施用包含显像剂的权利要求I的多聚体肽配体复合物，和检测包含网蛋白-I的细胞的位置。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(PAKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKD0TA β A-NH2 且所述显像剂为 mIn。
16.根据权利要求14所述的方法，其中用与计算机连接的SPECT/CT扫描仪检测所述显像剂，并使用程序分析成像数据。
17.根据权利要求14所述的方法，其中组成所述多聚体肽配体的肽各自具有独立地选自由SEQ ID NO :1-4和9-22组成的组的序列。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
20.一种用于检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗的方法，其中所述癌症的细胞表达网蛋白-I或其同源物或片段，所述方法包括向受试受治疗者施用包含权利要求I的多聚体肽配体复合物的药物组合物，其中所述复合物包含显像剂，检测所述显像剂和确定所述显像剂在所述受试受治疗者体内的水平和位置和将所述水平和位置与来自未受影响的受治疗者的其他方面相同的位置或所述受试受治疗者的未受影响的区域的所述显像剂的水平和位置进行对比，其中与所述显像剂在来自未受影响的受治疗者或来自所述受试受治疗者的未受影响的区域的所述样品中的水平和位置相比，所述显像剂在所述受试受治疗者体内的更高水平或不同位置表明所述受试受治疗者患有表达网蛋白-I或其同源物或片段的癌症，从而检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗，其中所述癌细胞表达网蛋白-I或其同源物或片段。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症选自由头颈癌、肝癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巣癌、子宮癌、子宮内膜癌、宫颈癌、前列腺癌、肾上腺癌、淋巴瘤、唾液腺癌、骨癌、脑癌、小脑癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、ロ鼻咽癌、NPC、肾癌、膀胱癌、皮肤癌、黑色素瘤、基底细胞癌、硬腭癌、舌鳞状细胞癌、脑膜瘤、多形性腺瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、皮质腺瘤、肝细胞癌、胰腺癌、鳞状细胞癌和腺癌组成的组。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述胰腺癌选自由胰导管腺癌、胰上皮内瘤变、腺瘤、伴有发育异常的腺瘤和原位癌组成的组。
24.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症是转移性癌。
25.根据权利要求20所述的方法，其中组成所述多聚体肽配体复合物的肽各自具有独立地选自由SEQ ID NO :1-4和9_22组成的组的序列。
26.根据权利要求20所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(i3AKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKDOTA β A-NH2 且所述显像剂为 mIn。
27.根据权利要求20所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。
28.根据权利要求20所述的方法，其中所述网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
29.一种用于诊断受治疗者体内的癌症的方法，其中所述癌症的细胞表达网蛋白-I或其同源物或片段，所述方法包括获得来自所述受治疗者的生物样品，使所述样品与包含权利要求I的多聚体肽配体复合物的组合物接触，其中所述复合物包含显像剂，将所述网蛋白-I在来自所述受试受治疗者的所述样品中的水平或位置与从未受影响的受治疗者获得的其他方面相同的样品的网蛋白-I的水平或位置或与包含已知量的网蛋白-I的标准样品进行对比，其中网蛋白-I在来自所述受试受治疗者的所述样品中的更高水平表明所述受试受治疗者患有癌症。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(i3AKTLLPTPGGS (PEG5000)) 4KKKKDOTA β A-NH2。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剤、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剤和光敏剂组成的组。
32.—种药物组合物，包含药学可接受的载体和权利要求I的多聚体肽配体复合物。
33.ー种试剂盒，包括包含药学可接受的载体和权利要求I的多聚体肽配体复合物的药物组合物、涂抹器和关于其使用的说明材料，和任选地显像剂和治疗剂。
34.根据权利要求I所述的多聚体肽配体复合物，包含显像剂，其中所述复合物具有结构
全文摘要
本发明提供了用于检测并定位生物标志网蛋白-1的诊断和成像技术的组合物和方法。本发明提供了可偶联显像剂和/或治疗剂的用于靶向网蛋白-1的多聚体肽配体复合物，例如具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2的多聚体肽配体复合物。
文档编号G01N33/68GK102762984SQ201080060246
公开日2012年10月31日 申请日期2010年11月5日 优先权日2009年11月5日
发明者金柏莉·A·凯利 申请人:弗吉尼亚大学专利基金会