专利名称：一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法
一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法技术领域
本发明属检测技术的技术领域，涉及一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，特别涉及一种禽蛋或其制品中胆固醇含量检测的前处理方法。
背景技术：
胆固醇(cholesterol)又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲的衍生物。胆固醇作为一种营养素具有重要的生理功能，是构成细胞膜的重要成分，对维持生物膜的正常结构和功能有重要作用，同时是胆酸、7-脱氢胆固醇和维生素D3、性激素等重要生理活性物质的前体。但是如果长期大量摄入，可能加大患动脉粥样硬化、高血压和冠心病等心脑血管疾病的风险。
禽蛋营养全面，风味独特，但其蛋黄中胆固醇含量较高。近年来，市面上出现了多种品牌的低胆固醇禽蛋或其制品。目前，在检测禽蛋或其制品中胆固醇含量的过程中，存在样品前处理步骤繁琐、样品处理时间长、溶剂用量大等缺点。
微波能具有激活化学物质、快速加热、加速或选择性进行化学反应等特性。常压微波辅助回流皂化萃取实现了皂化与萃取的同时进行，具有操作简便、效率高、用时短、溶剂用量少、适用广泛等特点，适合快速检测与大批量样品的测定。发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法， 特别是提供了一种禽蛋或其制品中胆固醇含量检测的前处理方法。本检测方法高效省时、 操作简便、节省溶剂、节能环保，并经方法学验证，证明精密度和重现性良好、加标回收率较尚ο
为达到上述目的，本发明的技术方案如下
—种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，包括如下步骤
1)将禽蛋的可食部分或禽蛋制品充分混勻后取0. 3g 5g，加入20ml 50ml无水乙醇、IOml质量分数为30% 70% KOH溶液、40ml 80ml石油醚得到样液；
2)在微波功率为300w 900w、温度为40°C 90°C、皂化萃取时间为^iiin Snin 的条件下，将样液微波辅助回流皂化萃取，皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却；
3)用去离子水将皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
4)收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0. 07MPa 0. 085MPa，温度为40°C 60°C条件下浓缩至近干(10μ 1 200μ 1)，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
5)供试样品采用高效液相色谱法检测；采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Slim-pack VP-ODS C18柱，柱温38°C，流动相为体积比98 2的甲醇和水构成的二元体系，流速0. 8ml/min，进样量10 μ 1 ；测定其峰面积y ；3
6)根据回归方程y = 6421071X-239274. 6，计算供试样品中以mg/ml为单位的胆固醇浓度χ。
本发明的一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，所述的石油醚，沸程为 60 "C。
所述的微波辅助回流皂化萃取，是在常压下进行的。
胆固醇标准曲线的制备分别吸取ang/ml胆固醇标准储备液:3ml、細1、5ml、6ml、 7ml于IOml容量瓶中用无水乙醇定容，配制成0. 6mg/ml、0. 8mg/ml, 1. Omg/ml, 1. 2mg/ml, 1. 4mg/ml标准系列工作液。按照确定的色谱条件分别进样，测定其峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得到线性回归方程为y = 6421071X-239274. 6，R2 = 0.9996。
方法学验证对精密度的验证，取已知浓度的胆固醇标准溶液，按照确定的色谱条件测定其峰面积，重复测定5次，分析计算RSD值为0. 4671% ；对重现性的验证，精确称取样品5份，按上述前处理方法制备样液，按照确定的色谱条件进行进样分析，测定其峰面积， 分析计算RSD值为1.395% ；对加标回收率实验的验证，取已知胆固醇含量的样品5份，分别准确加入一定量胆固醇标准溶液，按上述处理方法制备样液，按照确定的色谱条件进行进样分析，测定其峰面积，计算加标回收率，回收率为93. 35% 103. 26%，平均回收率为 96. 67%。
微波能具有激活化学物质、快速加热、加速或选择性进行化学反应等特性。本发明采用常压微波辅助回流皂化萃取法处理样品，实现了样品皂化的同时萃取目标物。具有高效省时、操作简便、节省溶剂、节能环保等特点。本发明适用于各类禽蛋或其制品中胆固醇含量的快速检测与大批量样品的测定。
图1为胆固醇标准储备液的标准曲线；
图2为胆固醇lmg/ml标准储备液的色谱图。
具体实施方式
实施例1
将新鲜鸡蛋蛋黄充分混勻后，精确称取0. 5g样品于三颈圆底烧瓶中，向烧瓶中加入30ml无水乙醇、IOml质量分数为30% KOH溶液、50ml石油醚(沸程60°C )；
将三颈圆底烧瓶于微波功率为800w，温度为70°C、常压的条件下，微波辅助回流皂化萃取anin，皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却，得到皂化萃取液；
用去离子水将上步骤所得皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0. 085MPa，温度为50°C条件下浓缩至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
经过上述前处理方法处理样品后，供试样品采用高效液相色谱法检测。采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Siim-pack VP-ODS C18柱，柱温38°C，流动相为甲醇/水(98 2)的二元体系，流速0.8ml/min，进样量10μ 1，测其峰面积，峰面积y为6459149，然后根据回归方程y = 6421071x_239274. 6，计算供试样品中胆固醇的浓度χ为 1. 04;3mg/ml，最后计算得到鸡蛋中胆固醇的含量为10. 430mg/g。
实施例2
将新鲜鸡蛋蛋黄充分混勻后，精确称取0. 5g样品于三颈圆底烧瓶中，向烧瓶中加入30ml无水乙醇、IOml质量分数为50% KOH溶液、60ml石油醚(沸程60°C )；
将三颈圆底烧瓶于微波功率为500w，温度为50°C的条件下，微波辅助回流皂化萃取5min，微波辅助回流皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却，得到皂化萃取液；
用去离子水将上步骤所得皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0. 075MPa，温度为60°C条件下浓缩至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
经过上述前处理方法处理样品后，供试样品采用高效液相色谱法检测。采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Siim-pack VP-ODS C18柱，柱温38 °C，流动相为甲醇/水(98 2)的二元体系，流速0.8ml/min，进样量10μ 1，测其峰面积，峰面积y为 8005060，然后根据回归方程y = 6421071x_239274. 6，计算供试样品中胆固醇的浓度χ为 1. ^^ig/ml，最后计算得到鸡蛋中胆固醇的含量为12. 840mg/g。
实施例3
将新鲜鸡蛋蛋黄充分混勻后，精确称取0. 5g样品于三颈圆底烧瓶中，向烧瓶中加入20ml无水乙醇、IOml质量分数为60% KOH溶液、40ml石油醚(沸程60°C )；
将三颈圆底烧瓶于微波功率为300w，温度为60°C、常压的条件下，微波辅助回流皂化萃取7min，微波辅助回流皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却，得到皂化萃取液；
用去离子水将上步骤所得皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0. 085MPa，温度为60°C条件下浓缩至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
经过上述前处理方法处理样品后，供试样品采用高效液相色谱法检测。采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Siim-pack VP-ODS C18柱，柱温38 °C，流动相为甲醇/水(98 2)的二元体系，流速0.8ml/min，进样量10μ 1，测其峰面积，峰面积y为 8392057，然后根据回归方程y = 6421071x_239274. 6，计算供试样品中胆固醇的浓度χ为 1. 3Mmg/ml，最后计算得到鸡蛋中胆固醇的含量13. 442mg/go
实施例4
将新鲜鸭蛋蛋黄充分混勻后，精确称取0. 5g样品于三颈圆底烧瓶中，向烧瓶中加入20ml无水乙醇、IOml质量分数为60% KOH溶液、70ml石油醚(沸程60°C )；
将三颈圆底烧瓶于微波功率为600w，温度为70°C的条件下，微波辅助回流皂化萃取5min，微波辅助回流皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却，得到皂化萃取液；
用去离子水将上步骤所得皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为O.OSMPa，温度为60°C条件下浓缩至 10 μ 1 200 μ 1，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
经过上述前处理方法处理样品后，供试样品采用高效液相色谱法检测。采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Siim-pack VP-ODS C18柱，柱温38 °C，流动相为甲醇/水(98 2)的二元体系，流速0.8ml/min，进样量10μ 1，测其峰面积，峰面积y为 6971588，然后根据回归方程y = 6421071x_239274. 6，计算供试样品中胆固醇的浓度χ为 1. 123mg/ml，最后计算得到鸡蛋中胆固醇的含量11. 23mg/g。
此实施例的方法对其他禽蛋或禽蛋蛋黄同样适用。
实施例5
直接精确称取鸭蛋制品-鸭蛋黄粉0. 3g于三颈圆底烧瓶中，向烧瓶中加入30ml 无水乙醇，在磁力搅拌器下搅拌均勻，然后加入IOml质量分数为60% KOH溶液、80ml石油醚(沸程60°C)；
将三颈圆底烧瓶于微波功率为800w，温度为60°C、常压的条件下，微波辅助回流皂化萃取5min，微波辅助回流皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷却，得到皂化萃取液；
用去离子水将上步骤所得皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；
收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0.085MPa，温度为60°C条件下浓缩至 10 μ 1 200 μ 1，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；
经过上述前处理方法处理样品后，供试样品采用高效液相色谱法检测。采用紫外检测器(检测波长为203nm)，色谱柱为Siim-pack VP-ODS C18柱，柱温38 °C，流动相为甲醇/水(98 2)的二元体系，流速0.8ml/min，进样量10μ 1，测其峰面积，峰面积y为 8391801，然后根据回归方程y = 6421071x_239274. 6，计算供试样品中胆固醇的浓度χ为 1. 3Mmg/ml，最后计算得到鸭蛋黄粉中胆固醇的含量22. 403mg/go
此实施例的方法对其他禽蛋粉同样适用。
权利要求
1.一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，包括如下步骤1)将禽蛋的可食部分或禽蛋制品充分混勻后取0.3g 5g，加入20ml 50ml无水乙醇、IOml质量分数为30% 70% KOH溶液、40ml 80ml石油醚得到样液；2)在微波功率为300w 900w、温度为40°C 90°C、皂化萃取时间为^iin 8min的条件下，将样液微波辅助回流皂化萃取，皂化萃取结束后，用3ml无水乙醇冲洗回流冷凝管， 皂化萃取液用流水冷却；3)用去离子水将皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；4)收集有机相于真空干燥箱中，在真空度为0.07MPa 0. 085MPa，温度为40°C 60°C 条件下浓缩至10 μ 1 200 μ 1，用5ml无水乙醇定容，并经0. 45 μ m过滤膜制备供试样品；5)供试样品采用高效液相色谱法检测；采用紫外检测器，色谱柱为Siim-packVP-ODS C18柱，柱温38°C，流动相为体积比98 2的甲醇和水构成的二元体系，流速0. 8ml/min,进样量10 μ 1 ；测定其峰面积y;6)根据回归方程y= 6421071X-239274.6，计算供试样品中以mg/ml为单位的胆固醇浓度X。
2.根据权利要求1所述的禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，其特征在于，所述的石油醚，沸程为60°C。
3.根据权利要求1或2所述的禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法，其特征在于，所述的微波辅助回流皂化萃取，是在常压下进行的。
全文摘要
本发明的一种禽蛋或其制品中胆固醇含量的检测方法属于检测技术的领域。采用常压微波辅助回流皂化萃取-高效液相色谱法，操作如下1)将禽蛋可食部分或其制品充分混匀后，向其中加入无水乙醇、KOH溶液、石油醚；2)将样液微波辅助回流皂化萃取，所得样液用流水冷却；3)用去离子水将皂化萃取液反复水洗至中性，弃去水相；4)将有机相在真空条件下浓缩至近干，用无水乙醇定容制备供试样品；5)采用高效液相色谱法检测。本发明的样品前处理方法，实现了样品皂化的同时对目标物的萃取，具有高效省时、操作简便、节省溶剂等特点。本检测方法精密度和重现性良好、加标回收率较高。
文档编号G01N30/02GK102507791SQ20111036579
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者刘静波, 安晓宁, 宫新统 申请人:吉林大学