专利名称：通过散射对致动的簇的探测的制作方法
技术领域：
本发明涉及簇(cluster)测定，特别是涉及基于磁性颗粒的簇的旋转致动的簇测定。
背景技术：
活体外诊断中的测试能够具有数种测定形式。簇测定是一类测定，其中，形成的颗粒簇的量指示样品中生物成分的存在和/或浓度。由于迅速的体动力学、容易制造及成本低，簇测定是有吸引力的。簇测定的问题是缺乏灵敏度。提高灵敏度的一种方式是利用磁性颗粒来执行簇测定。使用磁性颗粒的优点是在培养期间能够形成场感生链。这已经由例如Baudry等在“Acceleration of the recognition rate between grafted ligands and receptorswith magnetic forces”, Proc.Natl.Acad.Sc1.103, 2006, p.16076-16078 中不出。为了在执行簇测定时探测其它磁性颗粒的背景中的非常低的浓度的簇，W02010/026551A1建议通过施加旋转磁场来选择性地致动归因于分析物而形成的超顺磁颗粒的簇。根据W02010/026551A1，提供了待分析的流体中的例如珠子的超顺磁颗粒的悬浮物，其中超顺磁颗粒涂覆有生物活性剂(bioactive agent)。于是,归因于存在于流体内的分析物，容许颗粒形成簇。随后，通过施加旋转磁场来选择性地致动超顺磁颗粒的簇。磁场的幅度随时间变化。优选地，旋转磁场的频率在临界频率以下，使得特定尺寸的簇以与外场相同的频率旋转。最终，探测选择性地致动的簇。W02010/026551A1还提供了用于根据上述方法来执行簇测定的设备。
发明内容
在基于磁性颗粒的簇的旋转致动的上述类型的簇测定中，仍然存在以高度控制的方式来选择性地致动特定尺寸的簇的需求。具体地，存在探测不同尺寸的簇并区分不同簇尺寸的需求。能够通过光学散射来探测溶液中的簇。由于簇具有细长形状，所以当将光引导至溶液时，簇的暴露于入射光束的截面根据簇的取向变化。簇散射的光的量从而依赖于簇相对于入射光束的取向。由于颗粒的球形形状，所以单颗粒对散射光的作用是可以忽略的。当施加外部旋转磁场时，如W02010/026551A1中描述的方法中用于选择性地致动簇所做的，给定长度的每一个簇能够与高达临界频率的外场同步旋转，当超过临界频率时，净旋转速率降低。在满旋转期间，每一个周期，簇将相同的面积暴露于入射光束两次。对于线性簇，并且特别是围绕垂直于入射光束的轴旋转的两颗粒簇，基本对应于仅单个颗粒的截面的面积每一个周期暴露于入射光束两次，因为其它颗粒由颗粒覆盖。因此，以外部磁场的频率的两倍的频率对散射光强度进行调制。散射光能够与输入光具有相同波长，但是也能够与其具有不同波长。例如，能够使用荧光颗粒或荧光标记颗粒，荧光颗粒或荧光标记颗粒以与输入光束光的波长不同的波长辐照光。波长滤波器能够用于探测路径中以在不同波长之间进行区别，以提高信噪比并能够区分来自不同类型的颗粒的信号(即，颗粒多路复用)。能够使用具有不同光学性质的颗粒，并且能够在光路中对具有不同光学性质的颗粒进行区别。基于这些总体思想，本发明根据一个实施例提供一种用于探测涂覆有生物反应(bioreactive)剂的超顺磁颗粒的簇的方法。提供了待分析的流体中的超顺磁颗粒的悬浮物。归因于流体内分析物的存在，容许颗粒形成簇，并且将以至少一个给定频率旋转的磁场施加于溶液。将光引导至流体并且提取磁场的频率的较高次谐波处的散射光的强度的幅度。因为调制信号通常在旋转磁场的频率的两倍的频率处，所以优选地提取磁场的频率的两倍的频率处的散射光的强度的幅度。优选地，在暗场配置中，即在远离光束至流体的方向的方向上，测量散射光的强度。因为所有散射光对信号做贡献，所以期望收集全部的散射光以得到最大信号。实践中，诸如透镜的光学构件优选地用于收集以数个角度散射到探测器上的光。旋转磁场的优选频率和强度取决于颗粒的尺寸和磁性性质。旋转磁场的频率应当优选地至少约为1Hz。作为上限，临界频率的30倍大的频率值是优选的。关于场强，下限应当是最小强度以具有两颗粒簇的旋转。上限应当是在测量时间期间感生可忽略的磁性链接的最大场强。典型地，可以使用约I至50Hz的频率值和约I至IOmT的强度值。给定长度的每一个簇能够与高达临界频率的外场同步地旋转，在临界频率以上，净旋转速率降低。簇越长，则临界频率的值越低。结果，在外场的频率的两倍的频率处的调制量在临界频率以下恒定并且在较高频率处急剧下降。发生此临界转变处的频率，即临界频率的值，可以通过根据磁场的频率来测量磁场的频率的两倍的频率处的散射光的强度的幅度来确定。此外，使用此方法，归因于对不同簇尺寸变化的临界频率的值，可以区别簇的尺寸。例如，当存在于溶液中的颗粒的总体包括不同尺寸的簇时，在频率相关的光学信号中将存在数个临界转变。此外，通过测量其中存在两颗粒簇的颗粒的总体的频率相关的光学信号，能够精确地特征化颗粒的磁性性质。具体地，能够获得颗粒的总体的磁化率的平均值和磁化率的统计离散。在另一实施例中，本发明提供了用于探测超顺磁颗粒的簇的设备，包括用于将光引导至包括待分析的流体中的超顺磁颗粒的悬浮物的比色皿的光源和用于施加旋转磁场的构件以及用于探测流体中散射的光的探测器。根据以下描述的实施例，本发明的这些和其它方面将变得明显，并且将参照以下描述的实施例阐述本发明的这些和其它方面。
图1示意性地示例了根据本发明的实施例的探测光学簇的光学机构；图2示例了光学信号生成的模型并示出了单个两颗粒簇的信号的计算的频率依赖关系；图3示出了作为Mason数的函数的根据本发明的实施例测得的光学信号；图4示出了用于含有单颗粒、两颗粒簇、以及三颗粒簇的溶液的频率相关的光学信号的测量结果；
图5示意性地示例了涉及磁性颗粒的簇的旋转致动的测定的工序；图6示出了根据本发明的实施例获得的生物测定后的频率相关的光学信号；图7示出了根据本发明的实施例的光磁系统和纳米颗粒测定；图8示出了根据本发明的实施例测得的作为颗粒浓度以及磁场性质的函数的光学散射信号；图9示出了根据本发明的实施例的测得的用于缓冲剂中和血浆(plasma)中的测定的剂量响应曲线；以及图10示出了根据本发明的实施例测得的对缓冲剂中的bBSA的三个浓度的频率响应。
具体实施例方式图1示出了根据本发明的实施例的光学机构的略图。由(玻璃)比色皿10中的超顺磁颗粒形成的磁性簇20由磁场旋转，磁场例如是由四个外部电磁体(未示出)生成的。光源，优选激光器30，发出聚焦于玻璃比色皿10的中心的准直激光束，玻璃比色皿10中放置有生物样品。利用与主光轴近似成30度放置的透镜收集流体中的颗粒散射的光，实现了暗场配置。透镜41用于收集以大约30°的数个角散射到探测器40上的光。当利用磁场来致动簇20时，由于它们的细长形状，它们暴露时间相关的截面于入射激光束。结果，光电探测器40探测的散射光的量取决于簇相对于入射光束的取向。探测方法的主要优点是，由于单颗粒的球形形状，它们对信号的作用可以被忽略。两颗粒簇在临界频率以下的频率与场同步旋转。在临界频率以上，簇示出了摆动和减小的净旋转频率，如W02010/026551A1中更详细地描述的。对于基于散射的探测的最近的引用是Sandhu等在NanoLetters, 2010,10,p.446-551中的公开。Sandhu等致动并探测具有非常长的长度的颗粒链。相比而言，本发明聚焦于短簇，特别是两颗粒簇，的灵敏探测，其在具有非常低的目标浓度的测定中是重要的。在(线性)簇的旋转动力学的定量描述中，在满旋转期间，每一个周期，簇将相同面积暴露于入射光两次，如图2中所示例，以外场的频率的两倍的频率调制散射光强度，其中线性簇具体是两颗粒簇。首先(to first order),光学散射信号与yz平面中的投影面积成比例。根据测量，提取外场的频率的两倍的频率处的光学信号的幅度。给定长度的每一个簇能够与高达临界频率的外场同步旋转，在超过临界频率时，净旋转速率降低。簇越长，则临界频率的值越低。结果，在外场的频率两倍的频率处的调制的量在临界频率以下恒定，而在较高频率处急剧下降。图2示出了具有角度不相关的幅度的旋转场的情况下的计算的曲线。通过测量其中存在两颗粒簇的颗粒的总体(ensemble)的频率相关的光学信号，能够精确地特征化颗粒的磁性性质。不必具有独立簇的视觉图像，如Ranzoni等在Lab Chip,2010，10，第179-188页中描述的。利用快速测量，能够测试簇的总体。如果颗粒的磁化率的值存在可变性，则用于不同的两颗粒簇的临界频率在外场频率的稍微不同的值处发生。结果，代替调制量的急剧降低，预期到平滑得多的转变(见图3)。根据测得的曲线，获得了用于颗粒的总体的磁化率的平均值以及磁化率的统计离散(spread )。
图3示出了对于涂覆有抗生蛋白链菌素的465nm颗粒(Microparticles GMBH)的实验结果。作为Mason数的函数绘示了调制量，Mason数是定义为粘性与磁性扭矩之间的比率的无量纲参数。在施加的场的不同的大小处记录频率相关的信号并根据基于运动和投影的模型的等式对其进行拟合。对实验参数的不同的值获得的测量结果压缩到(collapseonto)单个通用曲线上。图3示出了以极端控制方式给特定类型的簇施加扭矩和旋转是可能的。临界频率以上，调制以及斜率的逐渐降低可以用于估计纳米尺寸的对象的磁化率的统计离散和平均值。此外，由于临界频率的值，能够区分簇的尺寸。两颗粒簇具有最高临界频率；归因于簇的较高的粘性拖曳，较长的链具有较低的临界频率的值。当数个簇种类存在于样品中时，在光学信号的频率依赖关系中将存在数个临界转变。图4示出了用于同时包含单颗粒、两颗粒簇、以及三颗粒簇的溶液的频率相关的光学信号的测量结果。第一临界频率对应于三联体(triplet)停止与外场同步旋转的事实。当外场的频率比用于双联体(doublet)的临界频率高时，信号以具有两倍的陡度的斜率降低。特别是，在0-4Hz的范围中，两个簇类型均与施加的场同步旋转。三颗粒簇的临界频率约为4Hz。两颗粒簇的临界频率约为8Hz。能够应用不同的生物测定形式。例如，在本身已知的夹心簇测定中，在颗粒之间捕获(“夹置”)分析物。还有，能够使用其它测定形式。这里，我们给出竞争测定(competitiveassay)或抑制测定(inhibition assay)的范例，即适合于小分子的探测的形式。在一可能的实施例中，使用两种颗粒核素:涂覆有分析物类似物的第一种；以及涂覆有抗分析物抗体的第二种。当颗粒暴露于不包含分析物的样品时，则抗体将会自由接合至分析物类似物，成簇不受到抑制，形成了许多成簇的颗粒，并且信号导致最大值。越多的分析物存在于样品中，则越多的抗体被阻挡，并且不能形成化学键，导致低数量的簇和许多单颗粒。这给出了对于竞争测定的典型剂量响应行为(对于低分析物浓度，信号高，且对于高分析物浓度，信号低)。图5中示例了基于旋转致动的磁性颗粒簇的生物测定。测定能够概括于以下步骤中:与分析物一起培养(至少一分钟)涂覆有具体识别分析物的生物分子的超顺磁颗粒(见图5a)。在此阶段，超顺磁颗粒能够截获分析物并使分析物固定于它们的表面上。而在溶液中，颗粒彼此以相当慢的动力学彼此碰撞:两颗粒簇的形成需要许多小时。施加旋转磁场，使得颗粒在数秒的时间规模中形成长链，并且它们保持极接近(见图5b)o簇形成反应大大加速,并且形成了两颗粒簇。在以上提到的Baudry等在Proc.Natl.Acad.Sc1.103, 2006, p.16076-16078中描述了产生链以加速簇形成的概念。当去除场时，归因于热运动，颗粒能够重新分散，除非通过生化键保持极接近。归因于非特定键，颗粒也能够保持耦合。在此特定范例中，施加旋转磁场以形成颗粒的长链，颗粒由偶极子-偶极子相互作用保持靠近一起。由于振动和旋转的一定的自由度，颗粒之间的有效接合是可能的，并且形成了两颗粒簇。给予簇一些时间来扩散，然后进行通过旋转致动的探测。图6(左画面)示出了生物测定的结果。已经与浓度为25pmol/l的生物素化的BSA(biotinylated-BSA)—起,在PBS和5% w/v的BSA形成的缓冲剂中，对涂覆有抗生蛋白链菌素的Ademtech 500nm的颗粒进行了 60min的培养。然后培养颗粒10分钟，容许它们在以IHz旋转的5mT的场下形成链。已经将样品暴露于40kHz的超声波以减小非特定成簇的量。已经利用4.5mT的场进行了光学信号的测量；已经对每个测量点在IkHz对光学信号采样了 3秒。对于没有分析物的测量，临界频率移动至较低频率。这是归因于已经形成了不可忽略数量的三颗粒链并且它们的特征在于较低临界频率的事实。当用于双联体的临界频率相交时，曲线的斜率加倍。已经利用与浓度为8pmol/l的生物素化的BSA —起培养的300nm的颗粒执行了另一实验(图6右画面),遵循相同实验程序。示出了 8pmol/l和Opmol/1处的实验结果。归因于较小的颗粒尺寸，测量结果更加嘈杂。然而，临界转变在8pmol/l的情况下是清楚可见的，而在样品中存在Opmol/1的BSA时，仅背景信号是可见的。图7中勾画了实验布置。沿z轴准直的激光束照明玻璃比色皿。四个电磁体在比色皿内引起旋转磁场，这使得磁性纳米致动器在XZ平面中旋转。光电探测器收集沿与Z轴成近似30度的角度散射的光。图7b描述测定的不同阶段。容许目标蛋白质的有效捕获的短的培养之后是施加磁场以引起链形成。在链中，纳米颗粒相互作用并经由捕获的目标分子迅速形成纳米颗粒间的键。以下，去除场以容许链分解。最终，施加选择性地致动纳米致动器以进行探测的旋转磁场。嵌于单纳米颗粒的总体中的两颗粒纳米致动器的灵敏和选择性探测基于两个相区分的特征，即磁性各向异性和光学各向异性。两颗粒纳米制动器的磁性形状各向异性使得能够进行频率控制的旋转，而纳米致动器的光学各向异性生成光学散射光的调制。单颗粒对光学调制的作用可以忽略，因为它们缺少两颗粒纳米致动器的特征磁性和光学各向异性。图7c示出了以频率《f/2 Ji = IHz旋转的ii QH = 3.5mT的场中的纳米致动器的测得的光学散射。信号周期等于施加的场的周期的一半。这是独立(individual)颗粒的等同物和两颗粒纳米致动器的得到的点对称性的直接结果。数据示出了，在纳米致动器垂直于光束对准时，即在纳米致动器将它们最大的几何截面朝向入射光束暴露时，散射最高。最低信号的取向接近沿光束的取向。图1d对包括半径a的两个纳米颗粒的纳米致动器示出了作为cpna，纳米制动器轴与z轴的角度，的函数的计算的几何截面面积。几何截面面积复制半周期特征并具有与光学散射信号相同的相位，但是曲线的形状相当不一样。例如，测得的散射曲线示出了在纳米致动器几乎沿光束对准(tpna mi)时，感兴趣的精细特性。该特性能够对纳米致动器的差分散射截面Gmi(I),(P)的角度相关的性质起作用。在实验机构中，利用低数值孔径透镜(NA = 0.025)将准直激光束聚焦到方形截面的玻璃比色皿的中心。低数值孔径透镜保证Imm的聚焦深度。该聚焦深度与比色皿(Imm)内的光路相当。束腰计算为直径近似为32 ym。结果，光学探查体积近似为Inl。利用蓝光激光器(405nm，NichiaNDV4212T，工作于120mW)测量了 300nm的纳米颗粒(抗生蛋白链菌素涂覆的 Bio-AdemBeads, AdemTech)。利用红光激光器(658nm, SanyoDL-6147-240,工作于40mff)测量了 500nm的纳米颗粒(抗生蛋白链菌素涂覆的Masterbeads, AdemTech)。激光束的焦点和玻璃比色皿放置在四极电磁体的中心，四极电磁体在竖直平面中生成旋转磁场。利用霍尔探针对磁体进行了校准，并且磁体生成70mT的最大场。磁体的频率响应的测量示出了，仅在数百Hz以上的频率处，线圈的自感变得重要。以与主光轴大致30度的角度测量了散射光，因为发现此配置最大化了强度。探测路径包括将散射光聚焦到光电探测器(New Focus,2031型，增益2.1O6)上的透镜。在3s期间在IkHz处对光电探测器测得的电压信号进行采样，并且将其存储在使用数字数据获取的文档中(NationalInstrument N1-DAQ6259)。数据通过FFT算法在MATLAB中处理以计算信号幅度。2f峰的FWHM值约为5mHz。利用校准样品研究系统的光学响应。来自储液的纳米颗粒在包含5%w/v的BSA的PBS缓冲剂(10mM，pH 7.4)(均从Sigma-Aldrich购买)中稀释为0.lmg/ml的浓度。利用在40KHZ和50W工作的声针(sonic needle)对样品进行声波处理(sonicate) 3s。以MCR300流变仪Antoon Paar Physica测得的溶液粘性为2.32±0.09Pa.S。已经在显微镜下检查了样品，并且两颗粒纳米致动器的数量与单颗粒的数量之间的比率确定为近似为5% ;没有显著部分的较大簇能够被识别(小于总数(total population)的0.1%).
当执行测定时，纳米颗粒储液在缓冲剂中稀释为2mg/ml，并且溶液暴露于40kHz和50W的超声波3s以最小化初始样品中成簇的纳米颗粒的数量。将3 Ul体积的抗生蛋白链菌素涂覆的纳米颗粒添加至3 ill的生物素化的BSA(bBSA，Sigma Aldrich, cod.A8549),最终浓度在60fM与IOnM之间。培养纳米颗粒和bBSA 10s。其后，在磁性链接(chaining)阶段期间，样品暴露于以IHz旋转的5.3mT的场达2分钟。在探测步骤之前，利用去离子水将溶液稀释为85 y g/ml，因为那给出的空白值近似为仪器噪声的10倍。测量对频率扫描的光学响应，并且每一个实验点是对于3.5mT的场强的3s平均时间的结果。利用IHz与25Hz之间的频率探查了样品。对于人血衆(human plasma)的实验,利用永久磁体将2mg/ml的溶液中的纳米颗粒吸引至小瓶的底部，去除上清液并通过相等体积的加标(spiked)人血浆对其进行替换。从20个健康捐献者的纯人肝磷脂血浆池(从Innovative购买)获得血浆。通过利用PBS缓冲剂中的30 ii M的pBSA对整个血浆进行加标，并且通过随后在整个血浆中稀释为达到剂量响应曲线所需的目标浓度，制备了所有样品。从而，最终样品中的PBS缓冲剂的量是可忽略的。用于链接和探测的致动协议与用于缓冲剂中的测定的相同。在探测之前，血浆样品稀释为55y g/ml的最终纳米颗粒浓度，因为那给出的空白值近似为仪器噪声的10倍。一式三份地测量剂量响应曲线中的所有点。图7a示出了聚焦于四个电磁体的中心处的准直激光束，该中心处放置玻璃比色皿。相对于入射激光束以近似30度的角度散射的光聚焦到光电探测器上。图7b示出了生物测定的三个阶段。首先，利用目标蛋白质培养生物活化的纳米颗粒。其后，施加旋转磁场以驱动纳米颗粒链的形成，这使得能够进行有效的纳米颗粒间接合。最终，去除磁场以容许未接合的纳米颗粒重新分散，并且在频率选择性磁场致动下探测光学散射。图7c示出了测得的来自以IHz旋转的磁场中的两颗粒纳米致动器的典型光学散射信号。图7d示出了旋转期间两颗粒纳米致动器的计算的几何截面。为了校准光磁探测系统，对不同的溶液浓度执行实验，见图8。储液稀释为2mg/ml的颗粒浓度，并且被声波处理，导致具有许多单纳米颗粒和低数量的两颗粒纳米致动器的溶液。通过光学显微术量化校准样品的组分，示出了 1:20的两颗粒纳米致动器与单纳米颗粒的比率。未观测到较大尺寸的簇。通过FFT算法(快速傅立叶变换)以3秒的积分时间对作为时间的函数的光学信号的记录的曲线进行分析。FFT频谱(见插图)仅示出了偶数谐波，如从纳米致动器的点对称所预期的。2f处的峰占频谱的支配地位。2f峰的大小示出了对颗粒浓度的线性依赖关系，具有约二十的动态范围。根据曲线的斜率、溶液中两颗粒纳米致动器的已知浓度、以及我们的系统中的光学探查体积(约InL)，对我们的机构中的每个两颗粒纳米致动器的光学信号推导了
权利要求
1.一种用于探测涂覆有生物反应剂的超顺磁颗粒的簇的方法，包括以下步骤: Ca)在待分析的流体中提供所述超顺磁颗粒的悬浮物； (b)归因于所述流体内分析物的存在，容许所述颗粒形成簇； (c)施加以至少一个频率旋转的磁场； Cd)将光束引导至所述流体；以及 Ce)测量所述流体中的所述颗粒散射的光的强度；以及 (f)确定在所述磁场的频率的较高次谐波处的散射光的所测得的强度的幅度。
2.按权利要求1所述的方法，其中，散射光的所测得的强度的所述幅度是在所述磁场的频率的较高次谐波处测量的。
3.按权利要求1所述的方法，其中，所述至少一个频率至少约为I。
4.按权利要求1所述的方法,其中，所述磁场约为I至10mT。
5.按权利要求1所述的方法，其中，根据所述磁场的频率来确定在两倍的所述场处的散射光的所测得的强度的所述幅度，以实现频率相关的测量。
6.按权利要求5所述的方法，其中，使用所述频率相关的测量来测量特定尺寸的簇的临界频率。
7.按权利要求5所述的方法，其中，使用所述频率相关的测量来探测具有不同尺寸的簇的存在。
8.按权利要求5所述的方法，其中，使用所述频率相关的测量来测量用于所述流体中的所述颗粒的磁化率的平均值和/或所述磁化率的统计离散。
9.按权利要求1所述的方法，其中，探测具有两个颗粒的簇。
10.按权利要求1所述的方法，其中，在所述旋转的平面外测量所述流体中的所述颗粒散射的光的所述强度。
11.一种用于探测超顺磁颗粒的簇的设备，包括: (a)光源(30)，用于将光束引导至包括待分析的流体中的超顺磁颗粒的悬浮物的比色皿(10)； (b)用于施加至少一个频率的旋转磁场的构件；以及 (c)探测器(40)，用于探测所述流体中的所述颗粒散射的光并测量所散射的光的强度， 所述设备适于确定在所述磁场的频率的较高次谐波处的散射光的所测得的强度的幅度，优选地在所述磁场的频率的两倍的频率处的散射光的所测得的强度的所述幅度。
12.按权利要求11所述的设备，其中，所述光源(30)为激光器。
13.按权利要求11所述的设备，其中，所述探测器(40)布置在暗场配置中，其中优选地，光学构件(41)用于收集以数个角度散射到所述探测器(40)上的光。
14.按权利要求11所述的设备，其中，所述至少一个频率至少约为I。
15.按权利要求11所述的设备，其中，所述磁场具有I至10mT。
16.按权利要求11所述的设备，其中，所述设备适于确定在所述磁场的频率的两倍的频率处的散射光的所测得的强度的所述幅度。
全文摘要
提供了一种探测涂覆有生物反应剂的超顺磁颗粒的簇的方法。提供了待分析的流体中的所述超顺磁颗粒的悬浮物。归因于所述流体内分析物的存在，容许所述颗粒形成簇；并且将以至少一个频率旋转的磁场施加至溶液。将光引导至所述流体，以及提取在磁场的频率的两倍的频率处的散射光的强度的幅度。通过根据磁场的频率来确定在两倍的场处的散射光的所测得的强度的幅度，可以实现频率相关的测量。可以使用频率相关的测量来确定簇的临界频率，以区分具有不同尺寸的簇或测量流体中的颗粒的磁化率的平均值和磁化率的统计离散。此外，提供了用于用于探测超顺磁颗粒的簇的设备的设备。
文档编号G01N33/543GK103097894SQ201180032753
公开日2013年5月8日 申请日期2011年5月25日 优先权日2010年7月2日
发明者A·兰佐尼, M·W·J·普林斯 申请人:皇家飞利浦电子股份有限公司