专利名称：一种从动物粪便中提取激素的方法
技术领域：
本发明涉及一种从动物粪便中提取激素的方法。
背景技术：
激素是机体内的重要物质，调节细胞的代谢，影响机体的生理活动。激素水平的测量通常使用血样分析或尿样分析，但两者的采集都会对机体进行干扰，对机体内的真实激素水平造成一定偏差，且对于动物而言，尤其是野外动物或者保护动物，取血或者取尿具有一定的难度，需要进行麻醉或限制，影响机体的激素水平。而粪便是机体的自然代谢产物， 能够真实的反应机体的激素水平变化，样本的采集在不干扰机体的情况下很容易获得，而且样本可以在一段时间内有规律的收集，可以在不影响机体内分泌的状态下，重复对同一个体取样，测量在长时间内动物对特殊环境或特定处理的短期激素水平变化。另外，粪便中激素水平的一段时间内总的激素量，受激素分泌的波动影响较小，不因为应激反应而影响测量结果，可以精确地代表机体激素的水平状态。
发明内容
本发明旨在提供一种操作方便、快捷的粪便激素提取方法，利用粪便即可完成机体激素水平的检测，在不能完成采血或采尿的情况下利用粪便反映出机体的激素水平，对机体也具有保护作用。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下
本发明的从动物粪便中提取激素的方法，包括下述步骤
(1)将粪便置于冷冻干燥机中干燥充分，将干燥粪样研磨成粉末；
(2)用电子天平准确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；
(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡IOmin后静置2h；
(4)将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的离心管B中；
(5)向A管中加2ml无水甲醇进行重提；
(6)将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8_12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取1.5ml装于一只2ml的离心管中。60°C水浴干燥，置于4°C以待检测。本发明的从粪便中提取激素的方法优选为
(1)将粪便置于冷冻干燥机中处理24h，将干燥处理后的粪样研磨成粉末；
(2)用万级电子天平准确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；
(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡IOmin后静置2h；
(4)将离心管A再次润旋震荡2min,3000rpm离心lOmin,取上清液Iml置于5ml的离心管B中；
(5)向A管中加2ml无水甲醇进行重提；(6)将离心管A进行涡旋振荡10min，3000rpm离心lOmin，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取I. 5ml装于一只2ml的离心管中。60°C水浴干燥，置于4°C以待检测。本发明的技术关键在于该提取方法的优点在于所需仪器、试剂较少。方法简便， 快捷，操作性高。回收率高，安全可靠，能够真实反应机体的激素水平。
图I是实施例I中的结果图。图2是实施例2中的结果图。
具体实施例方式实施例I
(一)自然状态下接收雌雄昆明小鼠雌雄各10只的粪便和对应尿液。(二)应用本实施例的方法对小白鼠粪便激素进行提取。(I)将粪便置于冷冻干燥机中处理24 h，将干燥粪样研磨成粉末；
(2)用电子天平准确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；
(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡IOmin后静置2h；
(4)将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的离心管B中；
(5)向A管中加2ml无水甲醇进行重提；
(6)将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8_12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取1.5ml装于一只2ml的离心管中。60°C水浴干燥，置于4 °C以待检测。(3)利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测定，测量睾酮、雌二醇的含量。(三)利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测量，测量睾酮、雌二醇的含量。(2)结果
结果见图1，应用本发明方法提取的激素和尿液中的激素含量无显著差异，粪便激素提取方法安全可靠。实施例2
(一)自然状态下接收雌雄猕猴雌雄各10只的粪便和对应尿液。(二)应用本实施例的方法对猕猴粪便激素进行提取。(I)将粪便置于冷冻干燥机中处理24 h，将干燥粪样研磨成粉末；
(2)用电子天平准确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；
(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡IOmin后静置2h；
(4)将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的离心管B中；
(5)向A管中加2ml无水甲醇进行重提；
(6)将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8_12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取I. 5ml装于一只2ml的离心管中。60°C水浴干燥，置于4 °C以待检测。(3)利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测定，测量睾酮、雌二醇的含量。(三)利用ELISA法对粪便提取的激素和尿液中的激素进行测量，测量睾酮、雌二醇的含量。(2)结果
结果见图2，应用本发明方法提取的激素和尿液中的激素含量无显著差异，粪便激素提取方法安全可靠。本提取方法简便快捷，对各种激素的提取率稳定，回收率高，能够真实反映机体的激素水平。且所需要的仪器试剂简单，操作简便。
权利要求
1.一种从动物粪便中提取激素的方法，其特征在于包括下述步骤(1)将粪便置于冷冻干燥机中干燥充分，将干燥处理后的粪样研磨成粉状；(2)用万级电子天平精确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡lOmin，然后静置2h；(4)将离心管A再次涡旋震荡2-3min，3000rpm离心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的离心管B中；(5)向A管中补加2ml无水甲醇进行重提；(6)将离心管A进行涡旋振荡8-12min，3000rpm离心8_12min，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取I. 5ml装于一只2ml的离心管中；60°C水浴蒸干，置于4°C环境中以待检测。
2.根据权利要求I所述的从动物粪便中提取激素的方法，其特征在于包括下述步骤:(I)将粪便置于冷冻干燥器干燥充分，将干燥粪样研磨成粉末；(2)用电子天平准确称取样品粉末lOOmg，置于5ml离心管A中；(3)向离心管A中加无水乙醇和双蒸水各1ml，涡旋振荡IOmin后静置2h；(4)将离心管A再次润旋震荡2min,3000rpm离心IOmin,取上清液Iml置于5ml的离心管B中；(5)向A管中加2ml无水甲醇进行重提；(6)将离心管A进行涡旋振荡10min，3000rpm离心lOmin，取上清液2ml置于B管中混匀两次所取上清液，取I. 5ml装于一只2ml的离心管中，60°C水浴干燥，置于4°C以待检测。
全文摘要
一种从动物粪便中提取激素的方法。将粪便冷冻干燥处理后研磨成粉末；经无水乙醇和双蒸水的混合溶液充分浸提后；取部分上清液；剩余部分用甲醇进行重提；取上清液，将两次所取上清液混合后待测。本发明是以物理化学的方法提取粪便中的激素以便进行测定。本提取方法简便快捷，安全可靠，为粪便中激素的测量提供了基础。
文档编号G01N1/34GK102607927SQ20121007121
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月19日 优先权日2012年3月19日
发明者任宝红, 曾小宇, 王思敏, 王振龙, 赵林萍, 路纪琪, 魏卓 申请人:郑州大学