专利名称：复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，属于中药质量检测技术领域。
背景技术：
复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂由复方珊瑚姜溶 液和尿素咪康唑软膏组成，主要用于治疗手足癣、甲癣等，质量标准收载于化学药品地方标准上升国家标准(第四册)，标准号WS-10001-(HD-0360)-2002。本发明人经过研究发现，现有的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂质量标准中，水杨酸含量测定为滴定分析法，取样量小，消耗的氢氧化钠量滴定液的量较少，测定结果误差大；而且现行标准中存在水杨酸干扰，需要一定的方法将其消除。另外，中国专利申请CN200710200837. 0(公布日期2008年I月9日)和CN200710200207. 3(公布日期2007年8月8日)公开了“治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂及其制备方法和质控方法”，其中在对复方珊瑚姜溶液的质量检测中，鉴别是对冰片、姜黄的薄层色谱鉴别，含量测定是采用高效液相色谱法对制剂中水杨酸和冰片的含量测定。在进一步研究中，我们发现，珊瑚姜是复方珊瑚姜溶液中的主要药用成分，但现有检测方法并没有对其有效成分姜黄素进行含量测定，另外对尿素咪康唑软膏中的另一药用成分硝酸咪康唑也未进行含量测定；另外，未对制剂中水杨酸、硝酸咪康唑进行鉴别，在进行姜黄的薄层色谱鉴别时，供试品溶液的配制以及展开剂的选择不甚理想，导致显色不够清晰，辨别不够准确；同时，对冰片、姜黄仅采用薄层色谱鉴别，不足以更有效更快捷地对产品质量进行控制；这将在产品的生产和流通环节等造成影响，形成产品质量隐患。随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，药品如果没有严格的质量标准，得到的产品质量可靠性不高，其治疗效果也不一定明显。因此，为了提高药物的治疗作用，效地控制药物的质量，确保用药的安全，制定更高效、更严格可靠的质量检测方法来保证药品质量，是药学工作者进行药物质量研究的方向和追求。为全面有效控制制剂的质量，保证疗效，我们提出复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，在现有技术的基础上，增加对姜黄素、硝酸咪康唑的含量测定，采用高效液相色谱法测定其含量，其方法专属、可行，重现性好，保证了质量检测标准的准确性和先进性；另外增加了对姜黄素、水杨酸、以及硝酸咪康唑的高效液相色谱鉴别方法，对冰片的气象色谱鉴别方法；在姜黄的薄层色谱鉴别项下，优化了供试品溶液的配制方法以及展开剂的选择，以达到准确有效地检测出制剂中所含有的有效成分的目的。该检测方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“均一、稳定、有效、可控”，能够有效地控制复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的质量
发明内容
本发明的目的在于提供复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法。本发明所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂即市售产品，由复方珊瑚姜溶液和尿素咪康唑软膏组成。本发明是通过以下技术方案来实现的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，所述检测方法为性状、检查，以及鉴别、含量测定项目；其中鉴别分为定性鉴别，以姜黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别，以及以水杨酸对照品、姜黄素对照品、硝酸咪康唑对照品为对照的高效液相色谱鉴另O、以冰片对照品为对照的气象色谱鉴别；含量测定是对制剂中所含姜黄素、水杨酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量测定。其中，鉴别方法为冰片的鉴别方法是以冰片对照品为对照，以键合交联聚乙二醇20000为固定相的气相色谱法；姜黄的鉴别方法是以姜黄对照药材为对照，以三氯甲烷 甲醇甲酸= 70-99 1-29 O. 1-1为展开剂的薄层色谱法；珊瑚姜的鉴别方法是以姜黄素对照品为对照，以乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45为流动相的高效液相色谱鉴别法；水杨酸的鉴别方法是以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50为流动相高效液相色谱鉴别法；硝酸咪康唑的鉴别方法是以硝酸咪康唑对照品为对照，以甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10为流动相的高效液相色谱鉴别法；含量测定方法为复方珊瑚姜溶液的含量测定方法是分别以姜黄素对照品、水杨酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，照中国药典2010版二部附录V D高效液相色谱法测定制剂中姜黄素、水杨酸、冰片的含量；以冰片对照品，以键合交联聚乙二醇20000为固定相，中国药典2010版二部附录VE气相色谱法测定制剂中冰片的含量；尿素咪康唑软膏的含量测定方法是以硝酸咪康唑对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，照中国药典2010版二部附录VD高效液相色谱法测定制剂中硝酸咪康唑的含量；以尿素对照品为对照，照中国药典2010版二部附录IV A紫外-可见分光光度法测定尿素的含量。具体的鉴别方法为(I)取本品2-10ml，升华后，升华物滴加香草醛硫酸溶液，即显紫堇色。(2)取本品5_20ml，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣用体积比为20%的二乙胺水溶液5-20ml使溶解，转入分液漏斗中，用乙醚振摇提取2-4次，每次5_20ml，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇O. 5-2ml使溶解，再挥至约O. 2-0. 7ml，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材O. 3-0. 8g,加无水乙醇5-20ml冷浸,滤过,滤液水浴蒸干,残洛同法处理作为对照药材溶液。照中国药典2010年版二部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ I、对照药材溶液5μ 1，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸= 70-99 1-29 O. 1-1为展开剂，置于展开剂饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)在姜黄素含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中姜黄素峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；(4)在水杨酸含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中水杨酸峰的保留时间应与对照品溶液中水杨酸峰保留时间一致；
(5)在冰片含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中冰片峰的保留时间应与对照品溶液中冰片峰保留时间一致。(6)取尿素含量测定项下供试品溶液2 3ml，加盐酸I滴，摇匀后，加10%咕吨氢醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解；(7)在硝酸咪康唑含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中硝酸咪康唑峰的保留时间应与对照品溶液中硝酸咪康唑峰保留时间一致；更加具体的鉴别方法为(I)取本品5ml，升华后，升华物滴加香草醛硫酸溶液，即显紫堇色。(2)取本品10ml，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣用体积比为20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，转入分液漏斗中，用乙醚振摇提取三次，每次10ml，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，再挥至约O. 5ml，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材O. 5g， 加无水乙醇IOml冷浸，滤过，滤液水浴蒸干，残渣同法处理作为对照药材溶液。照中国药典2010年版二部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ I、对照药材溶液5 μ 1，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7为展开剂，置于展开剂饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)在姜黄素含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中姜黄素峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；(4)在水杨酸含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中水杨酸峰的保留时间应与对照品溶液中水杨酸峰保留时间一致；(5)在冰片含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中冰片峰的保留时间应与对照品溶液中冰片峰保留时间一致；(6)取尿素含量测定项下供试品溶液2 3ml，加盐酸I滴，摇匀后，加10%咕吨氢醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解；(7)在硝酸咪康唑含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中硝酸咪康唑峰的保留时间应与对照品溶液中硝酸咪康唑峰保留时间一致。具体的含量测定方法为(I)水杨酸照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50为流动相；检测波长为305nm。理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000 ；测定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀；再量取O. 5-2ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量续滤液取10μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取水杨酸对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. 03-0. 09mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(2)冰片照中国药典2010年版二部附录VE气相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验以键合交联聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱，柱长30m，内径为O. 25mm，膜厚为O. 5um;柱温为130°C ;理论版数按龙脑峰计算不低于10000 ；校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每Iml中含2-4mg的溶液，作为内标溶液；另称取冰片对照品10-30mg，称定，置50ml量瓶中，加入内标溶液5-20ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；测定法量取本品l_3ml，置50ml容量瓶中，再加入内标溶液5_20ml，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液；吸取I μ I注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；(3)姜黄素照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈O. 4%磷 酸溶液=35 55 65 45为流动相；检测波长为440nm，理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于3000 ；测定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，量取续滤液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取姜黄素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中含5-20 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(4)硝酸咪康唑照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10为流动相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺调pH至3. 2±0.2 ;检测波长为230nm，理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算应不低于3000 ；测定法取本品适量，称定为约相当于硝酸咪康唑2_8mg，置IOOml量瓶中，加体积比三氯甲烷甲醇=1 120-60ml，置热水浴中，加热使溶解后，放冷，用体积比三氯甲烷甲醇=1 I稀释至刻度，摇匀，冷冻I小时，取出，迅速滤过，待续滤液放至室温，精密量取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硝酸咪康唑对照品适量，精密称定，加体积比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀释制成每Iml中含O. 05-0. 2mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(5)尿素照中国药典2010年版二部附录IV A紫外-可见分光光度法测定称取尿素对照品O. 2-0. 5g，置IOOml量瓶中，加水适量溶解后，稀释至刻度，摇匀，量取5-20ml，移置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得每Iml含尿素O. 1-1. Omg的对照品溶液；供试品溶液的制备称取本品O. 05-0. 2g,约相当于尿素15-60mg，置IOOml量瓶中，加水适量，置水浴上加热，并剧烈振摇，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷却片亥IJ，取出放至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法量取对照品溶液与供试品溶液各5_20ml，分别置25ml量瓶中，另取水5-20ml，作空白，各精密加对二甲氨基苯甲醛试液5-20ml，其中二甲氨基苯甲醛试液的制备方法为称取对二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及盐酸6ml溶解，即得；用水稀释至刻度，摇匀，放置暗处15分钟，在420nm波长处分别测定吸收度，计算即得。更加具体的含量测定方法为(I)水杨酸照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40为流动相；检测波长为305nm。理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000 ；
测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取lml，置IOml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量续滤液取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取水杨酸对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. 06mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(2)冰片照中国药典2010年版二部附录VE气相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验以键合交联聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱，柱长30m，内径为O. 25mm，膜厚为O. 5um ;柱温为130°C;理论版数按龙脑峰计算不低于10000 ；校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每Iml中含3mg的溶液，作为内标溶液；另称取冰片对照品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇勻，吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，计算校正因子； 测定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液；吸取 μ I注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；(3)姜黄素照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈0.4%磷酸溶液=45 55为流动相；检测波长为440nm，理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于3000 ；测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取姜黄素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含10 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得;(4)硝酸咪康唑照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20为流动相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺调pH至3. 2±0. 2 ;检测波长为230nm，理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算应不低于3000 ；测定法取本品适量，精密称定为约相当于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加体积比三氯甲烷甲醇=I I约40ml，置热水浴中，加热使溶解后，放冷，用体积比三氯甲烷甲醇=1 I稀释至刻度，摇匀，冷冻I小时，取出，迅速滤过，待续滤液放至室温，精密量取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硝酸咪康唑对照品适量，精密称定，加体积比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. Img的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(5)尿素照中国药典2010年版二部附录IV A紫外-可见分光光度法测定精密称取尿素对照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水适量溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供试品溶液的制备精密称取本品O. lg，约相当于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水适量，置水浴上加热，并剧烈振摇，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷却片刻，取出放至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各10ml，分别置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加对二甲氨基苯甲醛试液10ml，其中二甲氨基苯甲醛试液的制备方法为称取对二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及盐酸6ml溶解，即得；用水稀释至刻度，摇匀，放置暗处15分钟，在420nm波长处分别测定吸收度，计算即得。为了确保本发明有效，其质量检测方法科学、合理、可靠，申请人进行了一系列的试验研究，主要的试验资料如下实验例I :复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂中姜黄素的高效液相色谱法鉴别及含量测定研究I. I仪器与试药仪器戴安P680 高效液相色谱仪，Agilent TC-C18 (2) 5 μ m 4. 6mmX 250mm,岛津UV1700紫外分光光度计；赛多利斯CPA22 电子天平，精度为十万分之一。试剂与试药姜黄素对照品，中国药品生物制品检定所，批号110823-200603 ;复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂样品为本公司生产产品。乙腈色谱纯，磷酸分析纯，乙醇分析纯。I. 2方法与结果I. 2. I实验用溶液的制备供试品溶液的制备精密量取样品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥24小时的姜黄素对照品15. 19mg，批号110823-200603，置25ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，制成每Iml含O. 6076mg的对照品浓配液；精密量取上述对照品浓配液1ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，制成每Iml含12. 1520 Ug的对照品溶液。I. 2. 2色谱条件的选择及系统适用性试验A :流动相的选择取同一批号的样品按前述供试品溶液的制备方法制成供试液，分别以乙腈4%冰醋酸溶液=45 55、乙腈0.2%磷酸溶液=45 55，其中磷酸溶液中含O. 2%三乙胺、乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55为流动相对样品中姜黄素进行测定，试验结果见表I。表I :流动相对含量测定的影响
权利要求
1.复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于所述检测方法为性状、检查，以及鉴别、含量测定项目；其中鉴别分为定性鉴别，以姜黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别，以水杨酸对照品、姜黄素对照品、硝酸咪康唑对照品为对照的高效液相色谱鉴别；以冰片对照品为对照的气象色谱鉴别；含量测定是对制剂中所含姜黄素、水杨酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量测定。
2.根据权利要求I所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于冰片的鉴别方法是以冰片对照品为对照，以键合交联聚乙二醇20000为固定相的气相色谱法；姜黄的鉴别方法是以姜黄对照药材为对照，以三氯甲烷甲醇甲酸=70 99 : I 29 : O. I I为展开剂的薄层色谱法；珊瑚姜的鉴别方法是以姜黄素对照品为对照，以乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45为流动相的高效液相色谱鉴别法；水杨酸的鉴别方法是以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50为流动相高效液相色谱鉴别法；硝酸咪康唑的鉴别方法是以硝酸咪康唑对照品为对照，以甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10为流动相的高效液相色谱鉴别法。
3.根据权利要求I所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于复方珊瑚姜溶液的含量测定方法是分别以姜黄素对照品、水杨酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，照中国药典2010版二部附录V D高效液相色谱法测定制剂中姜黄素、水杨酸、冰片的含量；以冰片对照品，以键合交联聚乙二醇20000为固定相，中国药典2010版二部附录VE气相色谱法测定制剂中冰片的含量；尿素咪康唑软膏的含量测定方法是以硝酸咪康唑对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，照中国药典2010版二部附录V D高效液相色谱法测定制剂中硝酸咪康唑的含量；以尿素对照品为对照，照中国药典2010版二部附录IVA紫外-可见分光光度法测定尿素的含量。
4.根据权利要求I 3任一所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于鉴别方法为 (1)取本品2-10ml，升华后，升华物滴加香草醛硫酸溶液，即显紫堇色。
(2)取本品5-20ml，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣用体积比为20%的二乙胺水溶液5-20ml使溶解，转入分液漏斗中，用乙醚振摇提取2-4次，每次5_20ml，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇O. 5-2ml使溶解，再挥至约O. 2-0. 7ml，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材O. 3-0. Sg，加无水乙醇5-20ml冷浸，滤过，滤液水浴蒸干，残渣同法处理作为对照药材溶液。照中国药典2010年版二部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μ1、对照药材溶液5μ1，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=70-99 1-29 O. 1-1为展开剂，置于展开剂饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)在姜黄素含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中姜黄素峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致； (4)在水杨酸含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中水杨酸峰的保留时间应与对照品溶液中水杨酸峰保留时间一致； (5)在冰片含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中冰片峰的保留时间应与对照品溶液中冰片峰保留时间一致。
(6)取尿素含量测定项下供试品溶液2 3ml，加盐酸I滴，摇匀后，加10%咕吨氢醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中硝酸咪康唑峰的保留时间应与对照品溶液中硝酸咪康唑峰保留时间一致。
5.根据权利要求4所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于鉴别方法为 (1)取本品5ml，升华后，升华物滴加香草醛硫酸溶液，即显紫堇色。
(2)取本品10ml，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣用体积比为20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，转入分液漏斗中，用乙醚振摇提取三次，每次IOml，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，再挥至约O. 5ml，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材O. 5g，加无水乙醇IOml冷浸，滤过，滤液水浴蒸干，残渣同法处理作为对照药材溶液。照中国药典2010年版二部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ I、对照药材溶液5 μ 1，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7为展开剂，置于展开剂饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)在姜黄素含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中姜黄素峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致； (4)在水杨酸含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中水杨酸峰的保留时间应与对照品溶液中水杨酸峰保留时间一致； (5)在冰片含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中冰片峰的保留时间应与对照品溶液中冰片峰保留时间一致； (6)取尿素含量测定项下供试品溶液2 3ml，加盐酸I滴，摇匀后，加10%咕吨氢醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中硝酸咪康唑峰的保留时间应与对照品溶液中硝酸咪康唑峰保留时间一致。
6.根据权利要求1-3任一所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于含量测定方法为 (1)水杨酸照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50为流动相；检测波长为305nm。理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000 ； 测定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀；再量取O. 5_2ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量续滤液取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取水杨酸对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. 03-0. 09mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (2)冰片照中国药典2010年版二部附录VE气相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以键合交联聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱，柱长.30m，内径为0. 25mm，膜厚为O. 5um ;柱温为130°C ;理论版数按龙脑峰计算不低于10000 ； 校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每Iml中含2-4mg的溶液，作为内标溶液；另称取冰片对照品10-30mg，称定，置50ml量瓶中，加入内标溶液5-20ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，计算校正因子； 测定法量取本品l_3ml，置50ml容量瓶中，再加入内标溶液5_20ml，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液；吸取 μ I注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得； (3)姜黄素照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45为流动相；检测波长为440nm，理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于 3000 ； 测定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，量取续滤液.10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取姜黄素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中含5-20 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (4)硝酸咪康唑照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10为流动相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺调pH至3. 2±0. 2 ;检测波长为230nm，理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算应不低于3000 ； 测定法取本品适量，称定为约相当于硝酸咪康唑2-8mg，置IOOml量瓶中，加体积比三 氯甲烷甲醇=1 120-60ml，置热水浴中，加热使溶解后，放冷，用体积比三氯甲烷甲醇=1 I稀释至刻度，摇匀，冷冻I小时，取出，迅速滤过，待续滤液放至室温，精密量取.10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硝酸咪康唑对照品适量，精密称定，加体积比三氯甲烷甲醇=I I溶解并定量稀释制成每Irnl中含O. 05-0. 2mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (5)尿素照中国药典2010年版二部附录IVA紫外-可见分光光度法测定 称取尿素对照品O. 2-0. 5g，置IOOml量瓶中，加水适量溶解后，稀释至刻度，摇匀，量取.5-20ml，移置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得每Iml含尿素O. 1-1. Omg的对照品溶液；供试品溶液的制备称取本品O. 05-0. 2g，约相当于尿素15-60mg，置IOOml量瓶中，力口水适量，置水浴上加热，并剧烈振摇，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷却片刻，取出放至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得； 测定法量取对照品溶液与供试品溶液各5-20ml，分别置25ml量瓶中，另取水5_20ml，作空白，各精密加对二甲氨基苯甲醛试液5-20ml，其中二甲氨基苯甲醛试液的制备方法为称取对二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及盐酸6ml溶解，即得；用水稀释至刻度，摇匀，放置暗处15分钟，在420nm波长处分别测定吸收度，计算即得。
7.根据权利要求6所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于含量测定方法为 (I)水杨酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40为流动相；检测波长为305nm，理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000 ；测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量续滤液取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取水杨酸对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含.O. 06mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (2)冰片照中国药典2010年版二部附录VE气相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以键合交联聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱，柱长30m，内径为O. 25mm，膜厚为O. 5um ;柱温为130°C ;理论版数按龙脑峰计算不低于10000 ； 校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每Iml中含3mg的溶液，作为内标溶液；另称取冰片对照品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，计算校正因子； 测定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液；吸取I μ I注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得； (3)姜黄素照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55为流动相；检测波长为440nm，理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于3000; 测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取姜黄素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含10 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (4)硝酸咪康唑照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20为流动相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺调pH至3. 2±0. 2 ;检测波长为.230nm,理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算应不低于3000 ； 测定法取本品适量，精密称定为约相当于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加体积比三氯甲烷甲醇=I I约40ml，置热水浴中，加热使溶解后，放冷，用体积比三氯甲烷甲醇=1 I稀释至刻度，摇匀，冷冻I小时，取出，迅速滤过，待续滤液放至室温，精密量取.10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硝酸咪康唑对照品适量，精密称定，加体积比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. Img的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (5)尿素照中国药典2010年版二部附录IVA紫外-可见分光光度法测定 精密称取尿素对照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水适量溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供试品溶液的制备精密称取本品O. lg，约相当于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水适量，置水浴上加热，并剧烈振摇，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷却片刻，取出放至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得； 测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各10ml，分别置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加对二甲氨基苯甲醛试液10ml，其中二甲氨基苯甲醛试液的制备方法为 称取对二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及盐酸6ml溶解，即得；用水稀释至刻度，摇匀，放置暗处15分钟，在420nm波长处分别测定吸收度，计算即得。
8.根据权利要求1-3任一所述的复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，其特征在于所述质量检测方法为 性状 复方珊瑚姜溶液为棕黄色至黄色的澄明溶液，具有茉莉香气，久闻有刺鼻感，易挥发；尿素咪康唑软膏为浅黄色软膏； 鉴别 (1)取本品5ml，升华后，升华物滴加香草醛硫酸溶液，即显紫堇色； (2)取本品10ml，置蒸发皿中水浴蒸干，残渣用体积比为20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，转入分液漏斗中，用乙醚振摇提取三次，每次IOml，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇Iml使溶解，再挥至约O. 5ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材O. 5g，加无水乙醇IOml冷浸，滤过，滤液水浴蒸干，残渣同法处理作为对照药材溶液。照中国药典2010年版二部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ I、对照药材溶液5 μ 1，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7为展开剂，置于展开剂饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)在姜黄素含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中姜黄素峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致； (4)在水杨酸含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中水杨酸峰的保留时间应与对照品溶液中水杨酸峰保留时间一致； (5)在冰片含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中冰片峰的保留时间应与对照品溶液中冰片峰保留时间一致； (6)取尿素含量测定项下供试品溶液2 3ml，加盐酸I滴，摇匀后，加10%咕吨氢醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中硝酸咪康唑峰的保留时间应与对照品溶液中硝酸咪康唑峰保留时间一致； 检查 (1)复方珊瑚姜溶液乙醇量按中国药典2010年版二部附录VIIE检测，应为65% ·75% ;应符合中国药典2010年版二部附录I C酊剂项下有关的各项规定； (2)尿素咪康唑软膏应符合中国药典2010年版二部附录IF软膏剂项下有关的各项规定； 含量测定 (I)水杨酸照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40为流动相；检测波长为305nm。理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000 ； 测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取lml，置IOml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量续滤液取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取水杨酸对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含·O. 06mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得；(2)冰片照中国药典2010年版二部附录VE气相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以键合交联聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱，柱长30m，内径为O. 25mm，膜厚为O. 5um ;柱温为130°C ;理论版数按龙脑峰计算不低于10000 ； 校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每Iml中含3mg的溶液，作为内标溶液；另称取冰片对照品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，计算校正因子； 测定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入内标溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，作为供试品溶液；吸取1μ I注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得； (3)姜黄素照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55为流动相；检测波长为440nm，理论塔板数按姜黄素峰计算应不低于3000; 测定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取姜黄素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每Iml中约含10 μ g的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (4)硝酸咪康唑照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20为流动相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺调pH至3. 2±0. 2 ;检测波长为230nm,理论塔板数按硝酸咪康唑峰计算应不低于3000 ； 测定法取本品适量，精密称定为约相当于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加体积比三氯甲烷甲醇=I I约40ml，置热水浴中，加热使溶解后，放冷，用体积比三氯甲烷甲醇=1 I稀释至刻度，摇匀，冷冻I小时，取出，迅速滤过，待续滤液放至室温，精密量取10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取硝酸咪康唑对照品适量，精密称定，加体积比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀释制成每Iml中约含O. Img的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得； (5)尿素照中国药典2010年版二部附录IVA紫外-可见分光光度法测定 精密称取尿素对照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水适量溶解后，稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供试品溶液的制备精密称取本品O. lg，约相当于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水适量，置水浴上加热，并剧烈振摇，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷却片刻，取出放至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得； 测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各10ml，分别置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加对二甲氨基苯甲醛试液10ml，其中二甲氨基苯甲醛试液的制备方法为称取对二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及盐酸6ml溶解，即得；用水稀释至刻度，摇匀，放置暗处15分钟，在420nm波长处分别测定吸收度，计算即得； 上述检测结果显示，本品含复方珊瑚姜酊以姜黄素(C21H2tlO6)计每Iml应不得低于O. Img ;水杨酸(C7H6O3)应为标示量的80. 0% 120. 0% ;每Iml含冰片(CltlH2tlO)应不得少于8. Omg ;含尿素(CH4N2O)、硝酸咪康唑(C18H14Cl4N2O · HNO3)均应为标示量的90. 0% 110. 0%。
全文摘要
本发明公开了复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的检测方法，所述检测方法为性状、检查，以及鉴别、含量测定项目；其中鉴别分为定性鉴别，以姜黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别，以水杨酸对照品、姜黄素对照品、硝酸咪康唑对照品为对照的高效液相色谱鉴别，以冰片对照品为对照的气相色谱法鉴别；含量测定是对制剂中所含姜黄素、水杨酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量测定。本发明科学合理，准确性高，可行性强，提高了复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的稳定性，有效地控制了复方珊瑚姜溶液尿素咪康唑软膏复合制剂的质量，从而确保其临床疗效。
文档编号G01N1/38GK102788863SQ20121015680
公开日2012年11月21日 申请日期2012年5月18日 优先权日2012年5月18日
发明者张涛涛, 张芝庭 申请人:贵州神奇药业股份有限公司